视黄醇结合蛋白4在妊娠期糖尿病患者血清、脐血及胎盘组织中的表达及意义

董金华++薛丽丽

[摘要] 目的 探討妊娠期糖尿病（GDM）患者血清、脐血、胎盘组织中视黄醇结合蛋白4（RBP4）表达水平及临床意义。 方法 选取2014年1～12月浙江省嘉兴市妇幼保健院收治的40例GDM孕妇为GDM组和40例糖耐量正常的孕妇为NGT组，用逆转录聚合酶链反应检测胎盘组织中RBP4 mRNA的表达，用酶联免疫吸附试验检测孕妇血清RBP4及脐血RBP4水平，计算体重指数，检测空腹血糖、空腹胰岛素、血脂，计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR），并记录新生儿出生体重。 结果 两组空腹血糖、三酰甘油、HOMA-IR及新生儿出生体重比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。GDM组血清、脐血RBP4水平均高于NGT组，差异有统计学意义（P < 0.05）。两组脐血RBP4水平均低于血清RBP4水平，差异有统计学意义（P < 0.05）。GDM组胎盘组织中RBP4 mRNA表达水平显著高于NGT组（P < 0.01）。血清RBP4水平与三酰甘油、新生儿出生体重呈正相关（r = 0.489、0.488，P < 0.01）；脐血RBP4水平与新生儿出生体重呈正相关（r = 0.327，P < 0.05）。 结论 GDM孕妇体内RBP4表达水平与妊娠期糖代谢异常和胎儿生长发育有关，其可能参与GDM发病。

[关键词] 视黄醇结合蛋白4；妊娠期糖尿病；胎盘；发病机制

[中图分类号] R714.25 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）12（b）-0080-04

Expression and significance of serum， cord blood and placental tissue retinol-binding protein 4 in patients with gestational diabetes mellitus

DONG Jinhua XUE Lili

Department of Obstetrics， Maternal and Child Health Care Hospital of Jiaxing City， Zhejiang Province， Jiaxing 413050， China

[Abstract] Objective To investigate expression and clinical significance of serum， cord blood and placental tissue retinol-binding protein （RBP） 4 in patients with gestational diabetes mellitus （GDM）. Methods 40 cases of GDM in Maternal and Child Health Care Hospital of Jiaxing City， Zhejiang Province from January to December 2014 were selected as GDM group， and 40 normal pregnant women with impaired glucose tolerance were selected as NGT group. The expression of RBP4 mRNA in placenta tissue was detected by reverse transcription polymerase chain reaction. Maternal serum and cord blood RBP4 levels were detected by enzyme-linked immunosorbent assay. Body mass index was calculated， fasting blood glucose， fasting insulin， blood lipid levels were detected， HOMA-IR was calculated， birth weight of newborn was recorded. Results Fasting blood glucose， triglyceride， HOMA-IR and birth weight of newborn between two groups were compared， with statistical differences （P < 0.05）. Serum， cord blood RBP4 levels of GDM group were higher than those of NGT group， with statistical differences （P < 0.05）. Cord blood RBP4 levels of two groups were lower than serum RBP4 levels， with statistical differences （P < 0.05）. Placental tissue RBP4 mRNA of GDM group was significantly higher than that of NGT group （P < 0.01）. Serum RBP4 level was positively correlated with triglyceride， birth weight of newborn （r = 0.489， 0.488， P < 0.01）. Cord blood level was positively correlated with birth weight of newborn （r = 0.327， P < 0.05）. Conclusion RBP4 expression levels in GDM women are closely correlated with gestational glycometabolism abnormality， fetal growth and development， it may be involved in the pathogenesis of GDM.

[Key words] Retinol-binding protein 4； Gestational diabetes mellitus； Placenta； Pathogenesis

妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）已引起国际国内临床学者的广泛关注。GDM未予恰当干预可能会出现各种严重的母婴并发症，不仅威胁到孕期母婴的安全，孕妇将来罹患糖尿病的机会也将增加。大多数的GDM患者通过饮食及运动可以很好地控制血糖水平，或者孕期需用胰島素制剂控制血糖。多数意见认为，GDM发病机制与稳态模型的胰岛素抵抗相关。而GDM孕妇产后大多糖耐量恢复正常，表明胎盘所分泌的物质可能起到重要作用。近期研究发现，视黄醇结合蛋白4（retinol-binding protein 4，RBP4）作为一种新的脂肪因子与2型糖尿病胰岛素抵抗密切相关[1-2]。RBP4不仅在肝脏、脂肪中高表达，而且孕期在胎盘中亦可分泌。孕妇血清RBP4水平与其脂肪组织中的RBP4水平无关[3]。因此，孕期是否存在其他RBP4影响因素值得探讨。本研究检测正常妊娠与GDM胎盘组织中RBP4 mRNA的表达，探讨其与胰岛素抵抗及糖脂代谢的关系，从不同角度了解RBP4在GDM发病过程中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2014年1～12月浙江省嘉兴市妇幼保健院产科门诊产检并收住院分娩的40例GDM孕妇作为GDM组，年龄20～33岁，平均（26.9±2.8）岁，孕龄37～41周，孕产次1～2次；选择同期分娩、糖耐量正常的孕妇40例作为NGT组，年龄21～32岁，平均（25.3±2.5）岁，孕龄37～42周，孕产次1～2次。纳入标准：孕妇均在24～28周产检时行口服葡萄糖耐量试验（OGTT）检查，空腹血糖（FPG）5.1 mmol/L，服糖后l h血糖10.0 mmol/L，服糖后2 h血糖8.5 mmol/L，其中有1项或1项以上达到或超过正常值，符合GDM诊断标准。排除标准：合并1型糖尿病、2型糖尿病、肝肾疾病、心脏病、妊娠期高血压疾病、甲状腺疾病、多囊卵巢综合征、多胎妊娠、产检资料不齐全者。经产妇前一次妊娠均无GDM病史。两组孕妇的基础资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会审核通过。全部研究对象均知晓本研究，自愿参加，并签署了知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 样本采集及处理 ①分娩前采晨起空腹肘静脉血4 mL，胎盘取出前抽取脐血4 mL，2000 r/min，离心15 min，取上清保持于-80℃冰箱；②胎盘娩出后擦拭干净血块，于5 min内在无菌条件下取胎盘中央（避开钙化区）的组织1 cm×1 cm×1 cm，用生理盐水反复漂洗后放入冻存管内，并马上置于液氮中保存。

1.2.2 观察指标及检测方法 用酶联免疫吸附试验测定血清及脐血RBP4水平，试剂盒购于美国R&D公司，严格按照操作说明进行。FPG测定采用葡萄糖氧化酶法，空腹胰岛素（FINS）测定采用放射免疫法，FPG酶FLARE分析试剂盒购自北京嘉美纽诺生物科技有限公司，FINS试剂盒购自北京科美东雅生物技术有限公司，均严格按照操作说明进行。用酶联免疫吸附试验观察胎盘组织中RBP4表达，细胞胞浆或胞核内有棕黄色颗粒，为阳性；细胞核蓝染，为阴性。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定RBP4 mRNA的表达水平，对胎盘样本进行处理（研磨、溶解、离心、提取）后，经凝胶电泳实验测定其质量并纯化，进行PCR反应，以检测胎盘组织中RBP4 mRNA的表达。HOMA-IR、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）的检测采用全自动生化仪（美国雅培公司生产，型号：C16000），计算体重指数（BMI）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR），并记录每个新生儿出生体重。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验或Wilcoxon检验，采用直线相关分析，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组孕妇相关代谢指标和HOMA-IR比较

两组FPG、TG及HOMA-IR比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；两组FINS和TC比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

2.2 两组孕妇BMI、RBP4、新生儿出生体重比较

两组BMI比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；GDM组血清及脐血RBP4水平高于NGT组，差异有统计学意义（P < 0.05）；两组脐血RBP4水平均低于血清RBP4水平，差异有统计学意义（P < 0.05）；GDM组新生儿出生体重重于NGT组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表2。

2.3 两组孕妇胎盘组织RBP4 mRNA表达水平比较

GDM组胎盘组织RBP4 mRNA表达水平（0.73±0.09）明显高于NGT组（0.57±0.16），差异有高度统计学意义（P < 0.01）。

2.4 GDM组RBP4水平与HOMA-IR的相关性

血清RBP4水平与TG、新生儿出生体重呈正相关（r = 0.489、0.488，P < 0.01）；与TC、HOMA-IR、BMI无相关性（r = 0.074、0.130、0.026，P > 0.05）。脐血RBP4水平与新生儿出生体重呈正相关（r = 0.327，P < 0.05），与HOMA-IR、血清RBP4无相关性（r = 0.139、0.185，P > 0.05），与各代谢参数无相关性（P > 0.05）。胎盘RBP4 mRNA与新生儿出生体重、血清RBP4、脐血RBP4、HOMA-IR无相关性（r = 0.057、0.030、0.102、0.149，P > 0.05），与各代谢参数无相关性（P > 0.05）。

3 讨论

研究发现，在特异性敲除脂肪组织葡萄糖转运子4（GLUT4）的小鼠中，血清RBP4水平上升[1]。且RBP4可直接诱导肝脏磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的表达，从而促进糖异生；通过减少血清RBP4可提高胰岛素敏感性，稳定血糖。目前GDM孕妇血清中RBP4水平的变化尚存争议。资料显示，GDM妇女的血清RBP4水平比健康妊娠妇女高[4-7]。另有研究结果表明，GDM组RBP4和视黄醇水平较健康者低，而RBP4与视黄醇的比值在GDM组升高[8]。本研究結果发现，GDM组血清RBP4水平较健康妊娠组上升，且与FPG水平呈正相关。提示RBP4可能在GDM的发生、发展中起一定作用。

有研究在代谢综合征患者中发现其RBP4水平明显升高，且与TG水平呈正相关，与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关[9-11]。但RBP4与高甘油三酯之间的关联是独立于胰岛素抵抗之外。有研究检测GDM及正常妊娠孕妇血RBP4水平以计算胰岛素抵抗指数，结果发现，GDM组较对照组有更高的胰岛素抵抗，但两者的RBP4水平与胰岛素抵抗之间无相关性[12-14]。本研究也发现，GDM患者中胰岛素抵抗较正常者高，且血RBP4及TG水平升高。推测作为脂肪因子，RBP4的升高可能与胰岛素抵抗有关，但通过直线相关分析，发现其与胰岛素抵抗无相关性。提示GDM伴随血清RBP4增高及血脂代谢异常，但其相互影响的机制尚不明了。

GDM的并发症之一是巨大儿的发生，原因尚不明确。GDM时，孕妇血清及脐血RBP4水平发生改变，其与胎儿生长有无关联，机制如何，目前报道有限。GDM组孕妇可能比正常妊娠组分娩适于胎龄儿的孕妇拥有更高的血清RBP4水平[15-16]；且正常组孕妇血清RBP4水平在分娩大于胎龄儿中显著高于分娩适于胎龄儿（P = 0.001）。也有学者发现，小于胎龄儿脐血中RBP4水平为（30.2±3.78）mg/mL，显著低于正常妊娠分娩胎龄儿的（35.6±5.12）mg/mL（P < 0.01）[17-18]。本研究中，GDM组孕妇血清及脐血RBP4水平均较正常组高，与GDM组新生儿出生体重高于正常组一致。但孕妇血清RBP4水平与其脐血RBP4水平无相关性。笔者分析，可能原因是人类RBP4分子量太大。人类RBP4基因位于染色体10q23.3，其相对分子质量约为21 kD。由于胎盘屏障作用，分子量大于500 D的物质不能通过胎盘。故脐血中的RBP4可能由胎儿自身和胎盘分泌，故与母体循环中的RBP4无关。本文在GDM与正常妊娠组的胎盘中均检测到RBP4 mRNA，支持上述观点。与相关研究[5，19-22]一致，本研究发现脐血RBP4水平与新生儿出生体重呈正相关，RBP4在小于胎龄儿的脐血中降低。推测可能是RBP4起到调节血糖、加速胎儿生长的作用。其机制可能为胎儿低营养状态的代偿机制。但也有少数研究得出相反的结论[13]。

本研究中未检测新生儿出生后血RBP4水平，且样本量不多，可能会对研究结果有影响。此为本研究的不足之处。

综上所述，妊娠期GDM孕妇血清、脐血RBP4水平及其胎盘中RBP4 mRNA表达明显高于NGT孕妇，说明RBP4与妊娠期糖代谢异常有关，这一结果为GDM的病因学研究及临床治疗提供了进一步研究基础。GDM孕妇血清、脐血RBP4水平及其胎盘中RBP4 mRNA表达均与HOMA-IR无相关性，这一结果说明RBP4与GDM的关联可能是独立于胰岛素抵抗之外，但具体机制有待进一步研究。

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（收稿日期：2016-09-17 本文编辑：李亚聪）