葛根通络颗粒对偏头痛大鼠模型的作用及机制研究*

关珊珊，曹利民， 张 鹏

陕西省榆林市中医医院 (榆林 719000)

·实验研究·

葛根通络颗粒对偏头痛大鼠模型的作用及机制研究*

关珊珊，曹利民， 张 鹏△

陕西省榆林市中医医院 (榆林 719000)

目的：观察葛根通络颗粒(GG)对硝酸甘油致大鼠偏头痛模型的作用，探讨其缓解偏头痛的机理。方法：采用皮下注射硝酸甘油的方法建立偏头痛大鼠模型，观察3h内大鼠前肢挠头次数，测定血清一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性，脑组织5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NA)水平，并检查血液流变学指标。结果：葛根通络颗粒3.0、6.0g·kg-1减少模型大鼠的前肢挠头次数，降低偏头痛大鼠血清中NO的含量，增加脑组织内5-HT含量，6.0g·kg-1降低全血粘度。结论：葛根通络颗粒有一定防治偏头痛的功效，其机制可能与调节体内5-HT、NO水平以及改善机体的血液流变学有关。

葛根通络颗粒是在中医药理论指导下，根据多年的临床实践，采用现代先进的制备工艺加工而成的,具有祛风化痰、活血化瘀、通络止痛之功效。临床主要用于治疗头风血瘀夹痰证所引起的偏头痛，但目前有关该药的基础实验研究甚少。本文对葛根通络颗粒对硝酸甘油偏头痛大鼠模型的作用及机制进行研究，为其临床应用提供依据。

材料与方法

1 药 品 葛根通络颗粒颗粒由榆林市中医医院提供，用时以0.5%的CMCNa混悬液将药物配制成所需浓度。

2 试 剂 羧甲基纤维素钠(批号：20140715，天津市永大化学试剂有限公司)；硝酸甘油注射液(广州白云山明兴制药有限公司，国药准字H44020569)；西比灵(盐酸氟桂利嗪胶囊，5 mg/粒，国药准字H10930003，西安杨森制药有限公司)；戊巴比妥钠，规格：25g/瓶，批号：140418，由德国默克生物科技公司生产。一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)测定试剂盒均购于南京建成生物工程研究所；大鼠ELISA 试剂盒:5-羟色胺(5-HT)，去甲肾上腺素(NA),均为R&D 公司分装，大连泛邦化工技术开发有限公司提供。

3 动 物 SD大鼠，SPF级，雌雄兼用，体重180～220 g，动物质量合格证号：11400500010598，购自中国食品药品检定研究院，生产许可证号：SCXK-(京)2014-0013。

4 仪 器 电子天平，CAV2101，奥豪斯仪器(上海)有限公司，BL-420 分析天平(瑞士梅特勒托利多公司) ，BSA124S电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；超纯水系统HFSuper PW(上海康雷分析仪器有限公司)；冷冻离心机(型号：L-535R，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)，S10 型手提式高速分散器(宁波新芝公司生产)，SA5600 自动血流变仪( 北京)。

5 实验方法[ 1-3]

5.1 模型建立、分组与给药:动物适应饲养5 d，选用检疫合格的60只SD大鼠，雌雄各半，体重180～220 g，按体重、性别随机均衡分为6组，分别为空白组、模型组、葛根通络颗粒低、中、高剂量组(1.5、3.0、6.0g·kg-1，按体表面积折算，分别等效于临床剂量的1、2、4倍)，西比灵阳性对照药组(5 mg/kg)，每组10只，灌胃给药，每天给药1次，连续7 d，模型组给予0.5%CMCNa混悬液，给药体积为20 ml/ kg，于末次给药后30 min，除空白组注射生理盐水外，其余5组大鼠颈部皮下注射硝酸甘油10 mg /kg，造模1次。

5.2 指标观察与检测:造模后30 min左右，动物出现双耳发红、前肢频繁挠头、爬笼次数增多、自主活动增多等现象，此现象持续约2.5～3 h，继而出现蜷卧，活动减少， 表明偏头痛动物复制成功，记录3h内大鼠前肢挠头次数。观察结束后，大鼠经戊巴比妥钠45 mg/kg腹腔注射麻醉后经腹主动脉取血，第1管肝素抗凝血用于测定动物全血粘度，第2管置于促凝管放置0.5 h，2500 rpm离心，取血清，用于测定NO含量及NOS活性，置-20℃冰箱备用。

取血后将大鼠断头后于冰台迅速分离脑组织(去除小脑)，生理盐水冲洗，滤纸拭干，在液氮中快速冷冻后移至-80℃冰箱保存备用。将脑组织加入适量生理盐水快速研磨(质量体积比为1 g∶9 ml)，3000r/min，离心10 min后吸取上清，用Elisa试剂盒测定脑组织5-HT、NA的含量。

结 果

1 对硝酸甘油偏头痛模型行为症状的影响 记录造模后3 h 内每组大鼠的前肢挠头次数，结果显示：与模型组相比，葛根通络颗粒中、高剂量组及西比灵组都能明显减少模型大鼠的前肢挠头次数(P<0.05)，见表1。

2 对大鼠血清NO及NOS含量的影响 与空白组比较，模型组大鼠血清中的NO含量及NOS活性明显升高(P<0.01)；与模型组比较，葛根通络颗粒中、高剂量组及西比灵均能明显降低模型大鼠血清中NO的含量及NOS的活性(P<0.05或0.01)，见表2。

3 对大鼠脑内单胺神经递质的影响 与空白组比较，模型组大鼠脑组织中5-HT、NE的含量均明显降低(P<0.05或0.01)；与模型组比较，葛根通络颗粒中、高剂量组及西比灵组大鼠脑组织中5-HT的含量明显增加(P<0.05或0.01)，低剂量组动物脑内 5-HT 含量增加，但与模型组比较无显著性差异(P>0.05)；各治疗组NE含量与模型组比较无显著性差异(P>0.05)，见表3。

4 对大鼠血液流变学的影响 与空白组比较，模型组大鼠低切、中切、高切全血黏度值均明显增加(P<0.05)。与模型组比较，葛根通络颗粒高剂量组及西比灵组大鼠全血黏度低切、中切、高切值明显降低(P<0.05)，葛根通络颗粒中、低剂量组对全血粘度未见明显影响，见表4。

表1 葛根通络颗粒(GG)对偏头痛模型大鼠挠头次数影响±s)

注：与空白组比较，ΔP<0.01；与模型组比较，*P<0.05

表2 葛根通络颗粒(GG)对偏头痛模型大鼠血清

注：与空白组比较，ΔP<0.01；与模型组比较，*P<0.05，◇P<0.01

表3 葛根通络颗粒(GG)对偏头痛大鼠脑神经递质的影响±s)

注：与空白组比较，ΔP<0.05，◇P<0.01；与模型组比较*P<0.05，▲P<0.01

表4 葛根通络颗粒(GG)对偏头痛模型大鼠血液流变学的影响±s)

注：与空白组比较，◇P<0.01；与模型组比较，*P<0.05

讨 论

葛根通络颗粒以“角药”葛根、川芎、羌活为主药，葛根可解表通络，现代药理研究葛根具有镇静和扩张脑血管作用，改善脑供血，对治疗血管神经性头痛有显著疗效；川芎，善疏通升散，具有活血行气，祛风止痛之功效，现代药理研究川芎能改善微循环、抗氧化、抑制自由基等。羌活辛苦性温，有祛风止痛之功效，善治头痛。三药相辅相成，有机配合，起到通络止痛的作用。

颅内外血管舒缩异常和痛阈改变是偏头痛发病机制之一，而引起这些变化的主要物质是5-羟色胺、NE、NO、组胺等[1-2]。硝酸甘油是广泛应用偏头痛药物研究的模型之一，发病机制与症状与人类相似，并且造模省时、容易复制。硝酸甘油皮下注射在体内生成一氧化氮(NO)，NO通过强烈的扩张脑血管效应和神经毒性作用诱发实验性偏头痛，内源性NO的合成是在NOS的参与下合成的， 因此研究NOS 的含量显得尤为重要。本实验研究结果表明，模型组大鼠给予硝酸甘油造模后出现倦卧、双耳发红，挠头，尤其是前肢挠头等，与文献报道一致[2-4]，说明造模成功。与模型组比较，葛根通络颗粒能明显减少大鼠前肢挠头次数，证明可以缓解硝酸甘油致大鼠偏头痛的临床症状。模型组大鼠血清中NOS 、NO 含量均明显增加，脑组织5-HT、NA的含量极度减少，全血黏度值明显增加。而葛根通络颗粒可以通过降低大鼠血清中NO、NOS的含量，减缓NO舒张脑血管的作用；增加脑组织内的5-HT含量，促进5-HT对血管收缩和痛觉调节作用，缓解偏头痛的发作；此外，葛根通络颗粒降低全血粘度，改善偏头痛血液流变学特点，可能与复方中的川芎及葛根有关[5-6]。然而葛根通络颗粒对脑组织中的 NA 含量影响不大，有待进一步研究。

该研究是首次通过大鼠实验对该复方缓解头痛的作用进行研究，结果提示葛根通络颗粒可明显缓解硝酸甘油致大鼠偏头痛的临床症状，对NO/NOS 通路、脑内神经递质(5-HT)、血液流变学3个方面均有影响，具有良好的开发前景，但因葛根通络颗粒是中药复方制剂，下一步研究要从中医角度对其缓解偏头痛的药理作用及作用机制进行研究和探讨。

[1] 郭倩瑶,郭建生,刘顶鼎,等.芎麻汤不同提取物对硝酸甘油偏头痛模型大鼠血浆NO、CGRP、5-HT、ET含量的影响[J]. 西安交通大学学报医学版, 2013,34(3):393-396.

[2] 谭 亮. 偏头痛发病机制的研究进展[J]. 中国临床神经外科杂志, 2012, 17(9):571-573.

[3] 刘顶鼎,郭建生,郭倩瑶,等. 芎麻汤药效部位干预硝酸甘油型偏头痛大鼠行为学症状、外周血及脑组织中5-HT的研究[J]. 中华中医药杂志, 2015, 30(5):1708-1711.

[4] 董晓梦,荆 龙,陈金波,等. 偏头痛模型大鼠相关活性物质表达[J]. 中国神经免疫学和神经病学杂志, 2015, 22(1):34-39.

[5] 金玉青, 洪远林, 李建蕊,等. 川芎的化学成分及药理作用研究进展[J]. 中药与临床, 2013, 4(3):44-48.

[6] 张素慧,宁 炼,石劲敏,等. 葛根总黄酮经鼻给药对硝酸甘油致偏头痛模型大鼠的保护作用[J]. 中国新药与临床杂志, 2013，32(5):394-398.

(收稿：2016-11-30)

Effects of the Gegen Tongluo granules on the migraine model of rats and the mechanism

Guan Shanshan，Cao Limin，Zhang Peng.

TCM Hospital of Yulin City in Shaanxi Province (Yulin 719000)

Objective: To observe the effect of Gegen Tongluo sranules (GG) on the model of migraine induced by nitroglycerin in rats, and to explore the mechanism of relieving migraine. Methods: The rats model was established by subcutaneous injection of nitroglycerin. The symptoms of scratching head with forepaws were observed for three hours, nitric oxide (NO) content and nitric oxide synthase (NOS) activity in serum, 5- serotonin (5-HT) and norepinephrine (NA) levels in brain, and the hemorheology were determined. Results: The number of scratching head with forepaws, the level of NO in serum were reduced significantly, serotonin levels in the rat brain were improved obviously at GG 3 and 6.0 g·kg-1, and also， the blood viscosity was decreased at GG 6.0g kg-1. Conclusion: Gegen Tongluo granules have a certain effects on migraine, and its mechanism may be related to regulate 5-HT and NO levels and improve the hemorheology.

Migraine/traditional Chinese medicine therapy @Gegen Tongluo granules Nitric oxide Hemorheology

*陕西省中医药管理局课题(15-LC077)

偏头痛/中医药疗法 @葛根通络颗粒 一氧化氮 血液流变学

R289.5

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.05.058

△通讯作者