混合型抗体EZH2/34βE12/p63在前列腺穿刺标本中的诊断意义

李江 邱雁 邱梁

混合型抗体EZH2/34βE12/p63在前列腺穿刺标本中的诊断意义

李江 邱雁 邱梁

目的 探讨混合型抗体EZH2/34βE12/p63在不同前列腺病变穿刺标本中的表达及其意义。 方法 在一张切片上采用免疫组织化学方法同时检测EZH2、34βE12、p63在前列腺癌(PCa)、良性前列腺增生(BPH)、高度上皮内瘤变(HGPIN)、非典型腺瘤样增生(AAH)中的表达。 结果 52例PCa标本中，EZH2主要表达于前列腺腺上皮细胞核，阳性率为98.1%。60例BPH、10例HGPIN和14例AAH标本中，34βE12主要表达于前列腺基底细胞胞质，在上述病变中的阳性率分别为96.7%、100.0%和85.7%；p63主要表达于前列腺基底细胞胞核，在上述病变中的阳性率分别为98.3%、90.0%和92.9%。EZH2、34βE12和p63在PCa中表达与BPH、HGPIN、AAH中两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 联合检测混合型抗体EZH2/34βE12/p63 3种免疫学指标，在前列腺穿刺标本中对PCa与其他病变的鉴别诊断具有一定参考价值。

前列腺癌； EZH2； 34βE12； p63

前列腺癌(PCa)是男性泌尿系统中常见的恶性肿瘤，随着我国人均寿命的延长，PCa日益受到重视[1]。前列腺穿刺活检技术已广泛应用于临床，为PCa的病理诊断开拓了新的领域。由于前列腺癌的异质性，以及穿刺技术的局限性，前列腺病变良恶性的鉴别常常成为临床病理诊断中的难题，因此，寻找有效的指标和便捷的方法使PCa得以明确诊断尤为重要。本研究拟观察单酶标记混合型抗体EZH2/34βE12/p63在不同前列腺疾病穿刺标本中的表达，探讨其在PCa中的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 标本来源 收集我院2010年1月至2015年12月期间前列腺穿刺标本136例,年龄50～86岁,平均(68.72±4.32)岁。所有标本均经4%中性甲醛液固定,常规石蜡包埋。经2位高年资病理医师诊断:其中PCa 52例,良性前列腺增生(BPH)60例,前列腺高度上皮内瘤变(HGPIN)10例,非典型腺瘤样增生(AAH)14例。

1.2 免疫组织化学

1.2.1 免疫组化试剂:EZH2兔单克隆抗体、34βE12、p63鼠单克隆抗体为浓缩型试剂购于福州迈新公司;EnVision试剂盒为Dako公司产品。

1.2.2 单酶标记混合型抗体的配制与染色[2]:吸取EZH2、34βE12和p63浓缩型试剂各10 μl,加入2000 μl抗体稀释液中,漩涡混合器上旋转混匀,配制成1∶200的抗体混合型工作液(4 ℃冰箱保存备用),行免疫组化EnVision法染色,辣根过氧化物标记,DAB显色。

1.3 结果判断标准 EZH2于前列腺腺上皮细胞核呈棕黄色判断为阳性;34βE12和p63分别于基底细胞的胞质和胞核呈棕黄色判断为阳性。按Masi分级标准进行半定量分析,切片中阳性着色细胞数量,无着色或<10%为(-);10%～20%为(+);21%～75%为(++);>75%为(+++)。

1.4 统计学处理 试验数据采用SPSS 12.0统计软件进行分析,计数资料比较采用卡方检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

52例PCa中,51例癌性腺上皮细胞核EZH2呈阳性表达,49例癌性腺体周围基底细胞消失,34βE12和p63均无显色。60例BPH中,58例腺体周围基底细胞34βE12和p63均呈强阳性表达,53例腺上皮EZH2阴性。10例HGPIN中,9例腺体周围基底细胞34βE12和p63均呈强阳性表达,7例腺上皮未表达EZH2。14例AAH中,12例腺体周围基底细胞34βE12和p63均呈强阳性表达,13例腺上皮未表达EZH2。EZH2、34βE12、p63在PCa中表达与其他病变两两比较差异均有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 EZH2、34βE12、P63在前列腺不同病变组织中的表达

注:与PCa组比较,*P<0.05

3 讨论

在前列腺穿刺标本中,高分化PCa、BPH、HGPIN、AAH等,光镜下有时难以区分和鉴别,一直是临床病理诊断的重点和难点,特别是穿刺标本量少时更是如此。因而临床需要寻求一种有效的鉴别指标和克服穿刺标本局限的有效方法。

34βE12是一种单克隆高分子角蛋白,可识别Moll数为1、5、10、14角质层的57 kD及66 kD的角蛋白。34βE12作为基底细胞的特异性标记物,在经蛋白酶消化的石蜡包埋组织的免疫组化染色中被广泛应用。p63是一种核蛋白,由位于染色体3q27-29的一种与p53有同源性的基因编码。p63在诊断PCa时与34βE12具有相似的应用意义,而p63有时可标记34βE12阴性的基底细胞,相对于34βE12稳定,因而两者结合可提高基底细胞的阳性率[3-6]。本组研究中,我们观察到52例PCa中,49例癌性腺体周围基底细胞消失,34βE12和p63均未显色,而其他非癌性病变中基底细胞表达良好。

EZH2是一种转录抑制因子,在胚胎发育早期具有活性,随着细胞分化,其表达减少。最近研究发现,EZH2在人类许多恶性肿瘤中出现基因扩增和较高水平表达,与PCa的发生和进展有密切联系[7]。本研究通过免疫组化发现52例PCa中EZH2表达98.1%,与前列腺其他病变组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

此外,前列腺穿刺标本一般较小,尤其是微小病灶可能仅出现在1～2张切片上,如果常规行免疫组化染色EZH2、34βE12、p63 3个抗体至少需要3张组织切片,而实际工作中由于病灶较小再次切片时可能病变组织已经消失,此外由于连续切片有时腺体形态也会有一些变化,不利于观察同一个腺体3种抗原的表达情况。本试验采用了单酶法同时标记EZH2、34βE12、p63混合型抗体,3种抗体可分别结合前列腺腺上皮的核抗原和基底细胞的核、质2种抗原。该方法只需3种抗体等量混合后滴加在同一张组织切片上,进行一次二步法的标记和显色即可完成。此种方法减少了试验步骤,缩短了染色的时间,同时切片用中性塑胶封固,结果可长期保存。该方法的缺点在于阳性信号均呈棕黄色,初次观察结果有一定难度[2]。

综上所述,应用单酶标记混合型抗体在前列腺穿刺活检标本中对提高PCa的诊断与鉴别诊断具有一定的临床应用价值。

[1] 郭放,刘兆喆,谢晓冬,等.NCCN前列腺癌临床治疗指南更新要点解读与探讨[J].中华泌尿外科杂志,2013,34(12):949-951.

[2] 董丹丹,杨红,李科,等.单/双酶标记鸡尾酒抗体AMACR/p63/3413E12在前列腺穿刺组织鉴别诊断中的对比观察[J].临床与实验病理学杂志,2007,23(5):615-617.

[3] 徐月梅,黄文斌,赵建华,等. Np63(p40)和p63在前列腺基底细胞中的表达[J].诊断病理学杂志,2015,22(7):426-428.

[4] Signoretti S, Waltregny D, Dilks J, et al. p63 is a prostate basal cell marker and is required for prostate development[J].Am J Pathol,2001,157(6):1769-1775.

[5] Shah RB,Zhou M,Leblanc M, et al.Comparison of the basal cell-specific markers, 34betaE12 and p63,in the diagnosis of prostate cancer[J].Am J Pathol,2002, 26(9):1161-1168.

[6] 李军红,程蔚蔚,周会行,等.P504S、34βE12联合P63在前列腺癌及上皮内瘤变诊断中的临床价值[J].河南科技大学学报:医学版, 2013,31(2):89-90.

[7] 苏燕胜,李富军,高云,等.EZH2在前列腺癌中的表达及临床意义[J].现代肿瘤医学,2014,22(6):1351-1353.

Significance of detection of mixed type antibody EZH2/34βE12/p63 in needle biopsy specimen of prostatic lesions

LIJiang,QIUYan,QIULiang.

DepartmentofPathology,JiangsuProvincialGeriatricsHospital,Nanjing210024,China

Objective To study the expression and significance of EZH2/34βE12/p63 in needle biopsy specimen of prostatic lesions. Methods Expression of EZH2,34βE12 and p63 were detected using immunohistochemical method in the biopsy specimen of 53 cases of prostate cancer (PCa), 60 cases of benign prostatic hyperplasia (BPH), 10 cases of prostatic high grade intraepithelial neoplasia (HGPIN) and 14 cases of prostatic atypical adenomotous hyperplasia (AAH) with mixed type antibody in a single paraffin section. Results EZH2 was mainly expressed in the prostatic epithelia nuclear and the positive rate was 98.1% in 52 cases of PCa. 34βE12 was mainly expressed in the prostatic basal plasma and the positive rate in 60 cases of BPH,10 cases of HGPIN and 14 cases of AAH was 96.7%, 100% and 85.7% respectively.P63 was mainly expressed in the prostatic basal nuclear and the positive rate in BPH, HGPIN and AAH was 98.3%, 90.0% and 92.9% respectively. There were significant differences in expressions of EZH2,34βE12 and p63 among PCa, BPH, HGPIN and AAH (P<0.05). Conclusions Immunohistochemical detection of EZH2,34βE12 and p63 in single paraffin sections could improve diagnostic and differential diagnostic accuracy in needle biopsy specimen of prostate lesion.

prostate cancer； EZH2； 34βE12； p63

210024江苏省南京市，江苏省老年医院病理科

R 446.8

A

10.3969/j.issn.1003-9198.2017.05.016

2016-06-03)