改良Masson染色法在慢性乙型肝炎及肝硬化病理学诊断中应用

周冬青

[摘要] 目的 研究一種改良的Masson染色方法用来显示肝组织中胶原纤维，作为慢性乙型肝炎、肝硬化纤维化程度的病理分期标准，为临床治疗提供帮助。方法 方便选取2012年6月—2016年12月徐州市传染病医院病理室50例石蜡包埋肝组织切片，采用在传统Masson染色基础上进行改良的染色方法进行胶原纤维染色，根据染色结果显示慢性乙型肝炎及肝硬化肝组织中胶原纤维增生情况，作为病理诊断纤维化程度依据，染色结果与传统染色方法进行对比，并结合临床资料，判断病理诊断的分级、分期与临床诊断的分度是否一致，来评价其应用价值。结果 根据患者HE染色结果和改良的Masson染色显示的胶原纤维染色结果，进行慢性肝炎病理分级、分期诊断及肝硬化诊断，50例患者中慢性乙型肝炎轻度有6例（G1-2，S1-2），慢性乙型肝炎轻-中度（G2-3、，S2-3）及中度（G3、，S3）有36例，慢性乙型肝炎重度2例（G4S2），早期肝硬化2例（G3S4），肝硬化4例，结合患者临床资料，根据染色结果作出的病理学诊断的分级、分期与患者的临床分度基本一致，有2例患者临床诊断为慢性乙型肝炎，经染色后病理诊断为肝硬化。结论 改良Masson染色法与传统染色方法染色结果对比切片背景清晰，胶原纤维色泽鲜艳，对比度强，能够显示较细小的胶原纤维，染色效果更好，能满足临床病理学诊断的纤维化分期要求，具有重要的应用价值。

[关键词]改良Masson染色法；慢性乙型肝炎；肝硬化；病理学诊断

[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）03（b）-0046-03

[Abstract] Objective To research a kind of modified Masson staining method used to show the collagen fibrils in liver tissue and provide help for the clinical treatment by using it as the pathological staging standards of chronic hepatitis B and liver cirrhosis fibrosis degree. Methods 50 cases of paraffin embedding hepatic tissue slices in the pathological room in our hospital from June 2012 to December 2016 were selected and dyed by collagen fibrils on the basis of the traditional Masson staining method， and the collagenous fiber hyperplasia in the chronic hepatitis B and liver cirrhosis liver tissues were showed according to the staining results， as the basis of diagnosis of fibrosis degree， and the staining method and the traditional staining method was compared and whether the pathological diagnosis grading and staging was consistent with the clinical diagnosis division were determined according to the clinical data and its application value was evaluated. Results The HE staining results and modified Masson staining results showed that in the 50 cases of patients， there were 6 cases with mild chronic hepatitis B（G1-2，S1-2）， 36 cases with mild-moderate chronic hepatitis B （G2-3，，S2-3）- （G3，，S3）， 2 cases with severe chronic hepatitis B （G4S2）， 2 cases with early liver cirrhosis（G3S4） and 4 cases with cirrhosis and the pathological diagnosis grading and staging according to the staining results was basically consistent with the clinical grading， and 2 cases were diagnosed with chronic hepatitis B and diagnosed with liver cirrhosis after dyeing. Conclusion Compared with the traditional staining method， the slice background of modified Masson staining method is clear， the color of collagen fibrils is bright， and the contrast is strong， which can show the tiny collagen fibers， and the staining effect is better， and it can meet the clinical pathological diagnosis fibrillation staging requirements with important application value.

[Key words] Modified Masson staining method； Chronic hepatitis B； Liver cirrhosis； Pathological diagnosis

慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染肝细胞后激发免疫反应引起的慢性炎症，全球约3.5亿人曾感染过HBV，我国每年约30万人死于与HBV相关的肝脏疾病所致的肝硬化、肝癌等严重肝病[1]。HBV感染后，肝细胞出现变性、坏死，当坏死范围较小，主要依靠肝细胞再生即可达到修复肝组织的目的，当坏死范围较广，患者需要通过纤维化进行修复，许多研究表明，肝活检病理学检查在显示肝脏实质损害的炎症活动度与纤维化程度方面是金标准[2-8]，我国慢性乙型肝炎防治指南已将肝纤维化程度列入乙肝分级、分期的标准，作为病理学诊断标准依据[9]，目前国内显示用来纤维化的胶原纤维染色常用传统Masson染色方法、天狼猩红苦味酸染色方法等，传统的Masson三色染色方法，操作较繁琐，而且胶原纤维染色较暗不太鲜艳[10] ；而天狼猩红苦味酸染色方法需要偏光显微镜，一般实验室无法做到。为此，选取2012年6月—2016年12月徐州市传染病医院病理室的50例肝活检标本石蜡包埋组织试图建立一种改良的Masson染色方法用来显示胶原纤维，以达到提高染色的质量和工作效率的目的，为慢性肝炎纤维化程度分期及肝硬化患者的病理诊断提供可靠依据，也为临床精准诊疗提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取的50例慢性乙型肝炎、肝硬化患者石蜡包埋组织切片来源为徐州市传染病医院病理室的肝活检标本，所有患者均根据2015年《中国慢性乙肝防治指南》诊断标准具有明确诊断，切取石蜡包埋切片4～6 μm。

1.2 试剂：

1.2.1 0.5%酸性高锰酸钾 0.5%高锰酸钾溶液90 mL加入3%的硫酸10 mL。

1.2.2 1%草酸 草酸1 g，蒸馏水100 mL。

1.2.3 0.6%变色酸2R 变色酸2R 0.6 g 、磷钼酸0.4 g、蒸馏水100 mL。

1.2.4 0.2%冰醋酸 0.2 mL冰醋酸、蒸馏水100 mL。

1.2.5 0.4%磷钨酸 磷钨酸0.4 g、蒸馏水100 mL。

1.2.6 1%～2%苯胺蓝 苯胺蓝1～2 g，蒸馏水100 mL。

1.3 操作方法

常规石蜡切片脱蜡至水洗，放入酸性高锰酸钾中氧化5 min后，自来水冲洗1～2 min，放入草酸中5 min漂白，自来水冲洗后放入蒸馏水中洗涤1 min，用变色酸2R试剂染色5 min，0.2%冰醋酸洗涤，入0.4%磷钨酸中分化5 min，倾去余液放入1%～2%苯胺蓝染色5 min，再用0.2%冰醋酸水洗涤，不用脱水（防褪色），采用吹风机吹干后放入二甲苯中透明后封片。

2 结果

与传统Masson三色染色法染色结果对比切片背景清晰，胶原纤维色泽鲜艳，对比度强，能够显示较细小的胶原纤维，染色效果更好（见图1）。根据患者HE染色结果和改良的Masson染色显示的胶原纤维染色结果，进行慢性肝炎病理分级、分期诊断及肝硬化诊断，50例患者中慢性乙型肝炎轻度有6例（G1-2，S1-2），慢性乙型肝炎轻-中度（G2-3、，S2-3）及中度（G3、，S3）有36例，慢性乙型肝炎重度2例（G4S2），早期肝硬化2例（G3S4），肝硬化4例，结合患者临床资料，根据染色结果作出的病理诊断的分级、分期与患者的临床分度基本一致。慢性乙型肝炎患者纤维化程度与炎症活动度分级相关，患者肝组织纤维化程度的改变能反映出患者肝组织炎症程度的变化。另有2例患者临床诊断为慢性乙型肝炎，经染色后病理诊断为早期肝硬化，通过改良Masson染色方法不但可以发现早期隐匿性肝硬化，还可以为慢性肝炎患者的病理学分级、分期诊断提供可靠的依据，慢性乙型肝炎患者肝组织纤维化程度与肝组织炎症活动密切相关，在慢性乙型肝炎及肝硬化病理学诊断和临床治疗过程中具有重要的意义。

3 讨论

改良Masson染色能清晰地显示肝硬化患者肝组织中较细小的胶原纤维（胶原纤维呈亮蓝色），颜色鲜艳，对比度好，步骤少，效率高；传统的Masson三色染色方法，虽然有很多优点，但是操作较繁琐，而且胶原纤维染色不太鲜艳，且容易褪色；与之对比改良Masson染色效果更好，根据患者HE染色结果和改良的Masson染色显示的胶原纤维染色结果，进行慢性肝炎病理分级、分期诊断及肝硬化诊断，50例患者中慢性乙型肝炎轻度有6例（G1-2，S1-2），慢性乙型肝炎轻-中度（G2-3，S2-3）及中度（G3，S3）有36例，慢性乙型肝炎重度2例（G4S2），早期肝硬化2例（G3S4），肝硬化4例，结合患者临床资料，根据染色结果作出的病理诊断的分级、分期与患者的临床分度基本一致，有2例患者临床诊断为慢性乙型肝炎，经染色后病理诊断为肝硬化，因此可以作为慢性肝炎患者的病理学分级、分期诊断提供可靠的依据，对慢性乙型肝炎的治疗具有重要的参考价值，而且能够早期发现隐匿性肝硬化，在乙型肝炎及肝硬化病理检查应用中值得应用推广。李楚天等[11]用网状纤维染色和Masson染色研究496例慢性肝炎患者纤维化程度与炎症活动度分级相关性，结果表明慢性肝炎患者肝组织纤维化程度的改变能反映出患者肝组织炎症程度的变化，这与我们的研究结果一致，但传统的Masson染色过程中需要用VG铁苏木素液染胞核，盐酸酒精分化，染色结束后用酒精脱水、透明后封固；经过改良的Masson染色，在传统的方法基础上减去了VG铁苏木素液染胞核，盐酸酒精分化步骤，增加了酸性高锰酸钾氧化和草酸漂白处理后染色，用变色酸2R及苯胺蓝染色结束后用吹风机吹干代替酒精脱水，省略了传统方法VG苏木素染色、酒精梯度脱水的步骤，避免了蓝色的胶原纤维经酒精脱水引起的脱色，节约了时间和成本，同时简化了操作步骤，提高了效率。与洪少君等[12]改良Masson染色法相比，该改良的Masson染色法省略了Harris苏木素染细胞核及盐酸乙醇分化的步骤，增加了酸性高锰酸钾氧化和草酸漂白处理，使切片去除了其他色素的影响，使切片背景清晰，亮蓝色的胶原纤维色泽鲜艳，对比度強，能够显示较细小的胶原纤维，用来显示肝组织中胶原纤维，经济实用，值得推广，在慢性乙型肝炎及肝硬化病理学诊断及研究乙型肝炎病毒致病机制中具有重要的应用价值。迄今为止，肝活检病理学检查使用Masson染色显示胶原纤维仍然是判断肝脏纤维化程度方面的金标准，但是由于肝活检是一种有创的检查，因此，有学者试图检测外周血单个核细胞纤维蛋白表达（Fibrosin-mRNA）水平来判断肝纤维化程度，但是此项指标能否替代肝活检Masson染色，尚需进一步大量研究才能证实[13]。

综上所述，改良Masson染色用于显示慢性乙型肝炎、肝硬化肝组织中的胶原纤维效果好，在慢性乙型肝炎及肝硬化病理学诊断及研究乙型肝炎病毒致病机制中具有重要的应用价值，为临床精确诊断和精准治疗方面提供可靠的依据，具有重要的意义。鉴于本研究只是个人的初步探索，下一步将扩大样本含量，进一步改良染色方法，使胶原纤维染色达到更好的效果，以便更好地明确患者纤维化程度，为抗纤维化治疗提供确切的依据。

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