肺癌组织中EGFR和K-ras表达的意义

秦建领,秦名扬

(1.河南省第二人民医院 呼吸内科,河南 郑州451191;2.郑州大学基础医学院2015级研究生)

肺癌组织中EGFR和K-ras表达的意义

秦建领1,秦名扬2

(1.河南省第二人民医院 呼吸内科,河南 郑州451191;2.郑州大学基础医学院2015级研究生)

表皮生长因子受体(EGFR)在许多肿瘤中均会发生突变和(或)过度的表达，通过信号转导可以控制肿瘤的生长，并参与肿瘤新生血管的形成、浸润以及转移等过程[1]。K-ras定位于染色体12p11.1-p12.1，具有三磷酸鸟苷酶的活性，可以结合GTP。在多种肿瘤中，ras基因均能够表达且发生突变，也可以直接在Ras/Raf/MEK/ERK通路的激活过程中起到作用[2，3]。本研究通过检测94例肺癌患者组织中EGFR及K-ras蛋白的表达情况，研究二者在肺癌的发生、发展中的作用以及调控机制，以期对肺癌的早期诊断、判断预后以及治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2008年1月至2015年12月在我院和郑州市肿瘤医院手术切除治疗的94例肺癌患者的组织石蜡标本。所有患者术前均未接受过放疗、化疗治疗，均经过组织病理学检查确诊。其中，男性58例，女性36例；年龄41-75岁，平均年龄(55.6±8.7)岁；根据2003版WHO有关肺癌的病理类型分类标准分型：腺癌40例，鳞癌34例，腺鳞癌9例，大细胞癌7例，小细胞癌4例；高中分化56例，低分化38例；Ⅰ-Ⅱ期52例，Ⅲ-Ⅳ期42例；淋巴结转移49例，淋巴结未转移45例。另外取上述肺癌患者距离肿瘤边缘5 cm以上的癌旁正常的组织。

1.2 主要试剂和方法

鼠抗人K-ras单克隆抗体、鼠抗人EGFR单克隆抗体、SP检测试剂盒以及DAB显色液均购自福建迈新生物技术开发有限公司。采用常规的免疫组化SP法，用已知的EGFR和K-ras的阳性标本作为阳性对照，用PBS来代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定

EGFR的染色定位在细胞膜和细胞质，K-ras的定位在细胞核，染色均呈现浅黄色、棕黄色或是棕褐色的颗粒。按照定量计分法[4]对结果进行评定：在每张切片上选取5个不同的区域，在400倍光镜下计数阳性细胞，计算阳性细胞的百分比，阳性细胞数不足5%的即为1分，阳性细胞数位于5%-25%之间的即为2分，阳性细胞数位于26%-50%之间的即为3分，阳性细胞数超过50%的即为4分；细胞无明显的着色即为0分，染色细胞呈浅黄色的即为1分，染色细胞呈棕黄色即为2分，染色细胞呈棕褐色即为3分；将上述两次的得分相乘后计算结果：0-1分为阴性(-)，2-4分为弱阳性(+)，5-8分为中度阳性(++)，9分及以上为强阳性(+++)，然后再将+～+++的病例数相加，即可以判定为阳性染色。

1.4 统计学处理

应用SPSS17.0软件对数据进行统计分析，肺癌与癌旁正常组织中EGFR和K-ras表达阳性率的比较以及肺癌组织中EGFR和K-ras表达的关联分析采用χ2检验。肺癌组织中EGFR和K-ras相关性分析采用Spearman等级相关分析。当P<0.05时，则认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EGFR和K-ras的表达情况比较

在肺癌组织中，EGFR、K-ras的阳性表达率均明显高于其在癌旁组织中的表达，差异具有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

2.2 EGFR、K-ras的表达与临床病理的关系

EGFR的表达与患者的年龄、组织学类型以及分化程度无明显的相关性(P>0.05)，而与性别、TNM分期以及淋巴结转移密切相关(P<0.05)；K-ras的表达与患者的性别、年龄、分化程度、TNM分期以及淋巴结转移均无显著的相关性(P>0.05)，而与患者的组织学类型密切相关(P<0.05)。详见表2。

表2 EGFR、K-ras的表达与临床病理的关系

2.3 肺癌组织中EGFR和K-ras表达的关系

肺癌中两者均为阳性37例，均为阴性23例，EGFR阳性而K-ras阴性20例，EGFR阴性而K-ras阳性14例，两者的表达呈轻度的正相关(r=0.266，P=0.010)。详见表3。

表3 肺癌组织中EGFR和K-ras表达的关系

3 讨论

肺癌是目前世界上最主要的肿瘤死亡原因之一，并呈逐年增高的趋势。目前，肺癌的5年生存率还达不到15%，主要是由于在患者确诊时，约30%以上的患者肿瘤已经发生了远处转移，手术效果不十分理想，术后容易发生转移、复发，也说明肺癌患者生存率低的主要原因是肿瘤的浸润和转移。小分子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR- TKI)开启了肺癌个体化治疗的新时代，晚期 NSCLC EGFR突变患者接受 EGFR-TKI治疗可以显著的提高患者的生存时间，中位生存时间(OS)可以达到24-30个月[5,6]。EGFR是跨膜受体酪氨酸激酶ErbB家族的一员，是由1186个氨基酸残基组成的，由一个能与表皮生长因子结合的胞外功能区、一个短的穿膜区以及一个具有酪氨酸激酶活性的胞内区组成[7,8]。本次研究结果显示，EGFR的阳性表达率在肺癌组织中均明显高于癌旁组织中的表达(P<0.05)，证实了EGFR蛋白的高表达与肺癌的发生有着十分密切的关系。在女性患者中，EGFR蛋白表达明显高于男性患者(P<0.05)，这可能与女性患者EGFR的基因突变较男性明显的增高有关[9]。在Ⅲ-Ⅳ期及发生淋巴结转移患者中，EGFR蛋白的表达明显高于Ⅰ-Ⅱ期以及未发生淋巴结转移的患者(P<0.05)，说明EGFR阳性的肿瘤的分裂增殖能力和浸润性可能更强，检测EGFR在肿瘤组织中的表达可以作为预测患者预后的一个指标。

K-ras基因是EGFR基因下游的一个信号通路，对肿瘤细胞的生长起到明显的抑制作用，一旦其发生突变，可以持续的刺激细胞生长，导致肿瘤的发生。体内的某些生长因子将Ras/Raf/MAPK信号通路中的膜受体激活后，然后再激活Ras蛋白，活化的Ras-GTP可以与下游Raf的N端结构域进行结合后激活，活化的Raf又将下游的MAPK激活，从而激活MAPK级联反应[10,11]。在Ras/Raf/MAPK信号通路中，如果某一成员发生突变，均可以导致该通路下游的效应蛋白的功能发生改变，致使细胞发生异常增殖以及凋亡障碍[12]。本次研究结果显示，K-ras的阳性表达率在肺癌组织中明显的高于癌旁组织中的表达(P<0.05)，结果提示，K-ras蛋白的高表达与肺癌的发生有着密切的关系。本次研究结果还显示，K-ras的表达与患者的性别、年龄、分化程度、TNM分期以及淋巴结转移均无显著的相关性(P>0.05)，而与患者的组织学类型密切相关(P<0.05)，结果提示，虽然K-ras可以参与肿瘤的发生过程，但是可能与细胞的分化过程关系不十分密切，同时也可能与本研究样本量偏小有关，有待于今后进行进一步的研究。研究报道[13]，在20%-30%的非小细胞肺癌中可以出现K-ras基因的突变，主要发生于腺癌，而很少发生在鳞状细胞癌。

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