HPLC法测定复方感冒胶囊中扑尔敏的含量

苏玲萍　张勇　朱晓北　谢珊珊

摘要：建立復方感冒胶囊中扑尔敏的含量测定方法。方法：色谱柱为Red Classical C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相A为磷酸缓冲液（取磷酸二氢铵11.5g，加水适量使溶解，加磷酸4ml，用水稀释至1000ml），流动相B为乙腈，梯度洗脱，检测波长为215nm，流速为1.0ml·min-1，进样量为10μl。结果：扑尔敏浓度在12μg·ml-1-55μg·ml-1范围内，线性关系良好（r=0.9985），平均回收率为100.86%，RSD为1.7%（n=6）。结论：本法简便、准确、重复性好，可用于复方感冒胶囊中扑尔敏的含量测定。

关键词：高效液相色谱法；复方感冒胶囊；扑尔敏；含量测定

复方感冒胶囊为我公司独家产品，主要生产工艺是羌活、防风、荆芥、黄芩、细辛等中药材经过提取浓缩制成干膏，加扑热息痛和扑尔敏制成的中西结合的复方制剂。有解表散寒的功效，用于感冒风寒、头痛、身疼、恶寒发热。现国家药品监督管理局执行标准为WS-10980（ZD-0980）-2002-2011Z采用HPLC法测定马来酸氯苯那敏的含量。由于成分较多，存在较多干扰峰，该方法无法准确测定扑尔敏的含量。在参阅有关文献[1，2，3]的基础上，本文建立准确有效的高效液相色谱法，对复方感冒胶囊中扑尔敏的含量进行测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

电子分析天平（Sartorius BP211D），高效液相色谱仪（LC-10AT VP泵、SPD-10AVP紫外检测器、SIL-10A自动进样器），Class-vp工作站（日本岛津）。

1.2 试药

复方感冒胶囊（规格：每粒装0.33g，批号20151201，20151202，温州海鹤药业有限公司）；扑尔敏原料药（批号：150112，河南九势制药股份有限公司）扑尔敏对照品（批号：100047-200606；纯度：99.7%，中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯，水为公司自制的纯水，磷酸二氢铵等分析纯。

2 实验方法和结果

2.1色谱条件

色谱柱为 C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相A为磷酸缓冲液（取磷酸二氢铵11.5g，加水适量使溶解，加磷酸4ml，用水稀释至1000ml），流动相B为乙腈，按表1进行梯度洗脱，检测波长为215nm，流速为1.0ml·min-1，进样体积：10μl。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品贮备液：取扑尔敏对照品10.1mg置100ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度。

2.2.2对照品溶液：吸取贮备液2ml置5ml容量瓶中，用流动相A：流动相B（82：18）稀释至刻度。

2.2.3供试品溶液：取复方感冒胶囊内容物，研细，取0.33g，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相适量，超声处理（功率300W，频率50kHz）15分钟，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，静置半小时，滤过，滤液作为供试液

2.2.4阴性对照 取按工艺制备的干膏，加其他原辅料除扑尔敏外的样品，按2.2.3制备，作为阴性对照。

2.3最低检出限和定量限

吸取对照品溶液分别稀释成12ug.ml，1.2ugml；0.12ug.ml；0.36ug.ml，分别吸取10μl，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进样。检测限浓度为0.36μg·ml-1，信噪比为6，峰面积RSD为2.5%；定量限浓度为1.2μg·ml-1，信噪比为18，峰面积RSD为4.3%。

2.4线性关系考察

分别吸取上述对照品贮备液3，5，10，12，14ml置25ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成12，20，40，48，56μg·ml-1的系列溶液，按上述色谱条件进样，采集峰面积。制线性关系图，结果表明扑尔敏含量在12μg·ml-1-56μg·ml-1范围内，线性关系良好（r=0.9985）。

2.5稳定性试验

取上述同一份供试品溶液，分别于0，4，8，12，24，36，48h测定，结果扑尔敏峰面积RSD为3.3%（n=6）。表明供试品溶液在48h内稳定性良好。

2.6加样回收率

精密称取批号20160402的复方感冒胶囊0.165g，共6份，置25ml容量瓶中，精密加入对照品0.45mg，照“2.2.3”项下方法处理。进样，分别测定含量，结果平均回收率为93.6%，RSD为0.4%（n=6）。

2.7精密度试验

精密吸取对照品溶液，连续进样6针，结果扑尔敏峰面积RSD为1.0%（n=6）。

2.8样品含量测定

取复方感冒胶囊（批号20151201，20151202，温州海鹤药业有限公司）两批产品，分别称取装量差异项下的复方感冒颗粒，研碎，称取0.33g，按上述的色谱条件，测定含量。两批的平均含量分别为0.93mg/粒、0.90mg/粒

3讨论

3.1检测波长的选择：对扑尔敏对照品溶液作在200—400nm进行扫描，其最大吸收峰波长分别为211nm和265nm。在上述实验条件下，分别于215nm和265nm波长处对上述样品进行实验分析，结果215nm处所得的色谱图谱简单，分离效果较好。故选择215nm为检测波长。

3.2流动相的选择：参照文献[1，2，3]，选择三种不同的流动相进行分析乙腈-50%甲醇溶液（含0.5%十二烷基硫酸钠和0.1%磷酸）（42：58）；0.005mol/L辛烷磺酸钠（用醋酸调节pH3.0）：乙腈3：1；磷酸缓冲液（取磷酸二氢铵11.5g，加水适量使溶解，加磷酸1ml，用水稀释至1000ml）-乙腈（80：20），结果第三种流动相所得的HPLC图谱分离度较好，但是黄芩苷峰60分钟都未出，所以调整为梯度洗脱方式。

3.3流动相pH的选择 pH值对扑尔敏的出峰时间及峰形影响较大。用文献[3]方法加1ml磷酸，扑尔敏峰拖尾严重且分离度不好，后改为加4ml磷酸（pH2.27）峰形尖锐漂亮，分离度较好。加3.5ml（pH2.42）-6ml（pH2.1）磷酸，分离度及峰形均符合要求。最后，选定加磷酸4ml。

3.4 耐用性分别用不同流速、不同品牌的同类型柱子、不同pH条件进行进样分析，方法均稳定可靠。

参考文献：

[1]李桃，林焕泽，吴秀荣.RP-HPLC法测定马来酸氯苯那敏片中马来酸氯苯那敏的含量[J].临床合理用药杂志，2010（5）：56-57

[2]何永虎，周小露，陈洪骏.HPLC法测定治感佳胶囊中马来酸氯苯那敏的含量[J].今日药学，2008（4）：31-32，42

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典二部[M].北京：中国医药科技出版社，2015.63

作者简介：苏玲萍（1970-），女，浙江瑞安人，本科学历，工程师，研究方向：药品生产研发、药品质量管理。