消毒剂对实验室空气中细菌的杀灭作用研究

张正莹吴 润

(1.甘肃农业大学,甘肃兰州 730000; 2.景泰县畜牧兽医局,甘肃白银 730400)

消毒剂对实验室空气中细菌的杀灭作用研究

张正莹1，2吴 润1

(1.甘肃农业大学,甘肃兰州 730000; 2.景泰县畜牧兽医局,甘肃白银 730400)

为了验证菌毒敌液、强力消毒灵液等六种消毒药对实验室空气菌的敏感程度，本实验采用微管-平板法测定了菌毒敌液、强力消毒灵液等6种消毒药对实验室空气菌的最小抑菌浓度（MIC）分别是，菌毒敌液对实验室菌的MIC是1/500*8g/ml、中农卫康消毒剂MIC为1/500*16g/ml、金碘王（聚维酮碘溶液）MIC为1/500*2g/ml、强力消毒灵液MIC为1/500*128g/ml、威特格瑞液MIC为1/500*128g/ml。由此表明，消毒药品对实验室细菌的抑制作用效果有区别，本实验对实验室消毒药品的选择有指导意义。

实验室空气菌 最小抑菌浓度 抑制作用 消毒药

生物安全（Biosafety）是一个广义定义，虽然在很多国际、地区或国家的法规和标准中涉及，但目前国际上尚无统一定义。从其涉及的内容分析，主要是指生物（特别是微生物）和基因操作对生命和（或）环境的影响，可以包括安全（Biosafety）和安保（Biosecurity）两层含义。科学家在实验室对病原微生物的研究始于18世纪，故而实验室的消毒灭菌愈来愈重要。随着各种消毒药的市场化，实验室消毒药的种类也越来越多。二氯异氰尿酸钠和三氯异氰尿酸同属氯胺类氯化异氰尿酸类消毒剂，两者杀菌谱广，杀菌力强，可杀灭各种微生物，广泛用于医疗卫生和饮食行业及水体消毒。有关此两种消毒剂复方制剂的杀菌效果报道较多，但对两者作平行比较研究则少见报道。经试验证明，二氯异氰尿酸钠和三氯异氰尿酸对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌都有很好的杀灭效果，虽然三氯异氰尿酸对细菌繁殖体和真菌杀灭对数值比二氯异氰尿酸钠者稍高，但这种差别基本无统计学价值，与相关报道的结果基本一致。近年来，由于人们滥用抗生素从而使很多细菌产生了耐药性。由于中药抗菌的特殊机理，不易产生耐药性，因此，抗菌中药引起众人的关注，逐步成为研究的热点。

早在20世纪50年代我国医药工作者即开始了中药抑菌作用与抑菌成分研究，并发现许多具有抗菌作用的中药。常规的药敏实验方法：①纸片琼脂扩散法；②试管稀释法；③平板稀释法；④打洞法；⑤挖沟法；⑥微量稀释法等。然而，这些方法也存在着其缺陷或局限性，因此，我们应根据实际情况选择较合适的方法。试管稀释法[8]是一个比较好的方法，但具有实验工作量大，操作烦琐，一个系列稀释度含药培养基只能测一种菌，营养要求高的菌无法培养等弊端；打洞法同纸片扩散法，存在药物扩散问题，又没有中药标准纸片，实验结果难以控制；平板稀释法只需制两个系列稀释度含药平板，一个稀释度可同时测多种细菌，操作简便，结果准确，是一种比较理想的方法，但是必须注意细菌之间交叉感染的问题；微量稀释法准确可靠，重复性好，且简便易行，但是结果不易观察，加显色剂以后不适用于需要加血的培养基。

1 材料

1.1 药品

表1 参试药品表

1.2 细菌

实验室空气菌。

1.3 试剂

营养琼脂，生产厂家：青岛市高科技园海博生物科技有限公司。

革兰氏染液，生产厂家：青岛市高科技园海博生物科技有限公司。

普通肉汤培养基，生产厂家：杭州微生物试剂有限公司。

1.4 仪器

表2 参试仪器设备

2 方法

2.1 培养基的制备

2.1.1 普通营养琼脂培养基的制备

30g营养琼脂加入1000ml超纯水，高压灭菌121℃，15min。放入生物安全柜，当营养琼脂温度降到55℃左右时浇平板2～3cm厚。待平板内琼脂凝固后，冷藏备用[5]。

2.1.2 普通营养肉汤培养基的制备

30g普通肉汤加入1000mL超纯水，高压灭菌121℃，15min，放入生物安全柜，紫外线消毒降温到室温冷藏备用。

2.2 试验药液的制备

2.2.1 菌毒敌液 在生物安全柜内取10ml灭菌超纯水加20μl菌毒敌原液将其作1：500倍稀释到畜禽房舍及器具消毒浓度，冷藏备用。

2.2.2 中农卫康消毒剂 在生物安全柜内取10ml灭菌超纯水加20μl菌毒敌原液将其作1：500倍稀释到畜禽房舍及器具消毒浓度，冷藏备用。

2.2.3 金碘王（聚维酮碘溶液） 在生物安全柜内取10ml灭菌超纯水加10μl菌毒敌原液将其作1：1000倍稀释到养殖场常规消毒浓度，冷藏备用。

2.2.4 威特格瑞液 在生物安全柜内取10ml灭菌超纯水加0.01g菌毒敌原液将其作1：1000倍稀释到养殖场常规消毒浓度，冷藏备用。

2.2.5 强力消毒灵液 在生物安全柜内取10ml灭菌超纯水加0.01g菌毒敌原液将其作1：1000倍稀释到饲养场所器具消毒浓度，冷藏备用。

2.2.6 烧碱溶液 在生物安全柜内称取0.3g烧碱，加灭菌超纯水10ml将其配成3%消毒浓度，冷藏备用。

2.3 菌种的准备

取浇好的一个营养琼脂平板打开放置在实验室，24h后挑取菌落并用普通营养肉汤做增菌培养，放置恒温培养箱37℃培养18～24h候得原菌液。取试管分别对原菌液用生理盐水进行二倍比稀释，用移液器从8号管中取20μl菌液注入平板上，重复做3个平板，并用L棒将其涂匀，培养18～24h查菌落数，得出原菌液的细菌浓度。将原菌液或稀释后的菌液用生理盐水稀释到所需浓度106cfu/ml，4℃冰箱保存备用。

2.4 各药液对试验菌的最小抑菌浓度（MIC）的测定

在生物安全柜内，采用微管-平板法[4]。每种药物12支EP管，每个EP管内加入500μl的肉汤，向第1支EP管里加入500μl配好的药液，混匀，从中吸取500μl加入第2支EP试管[5]，依次类推，直至第11支试管，弃去500μl，12号EP管做阴性对照。1-12号EP管内加入20μl菌液，37℃培养18～24h后，将其分别接种到平板上[8]，37℃再培养18～24h后，得试验药物对实验菌的MIC。

3 试验结果

通过试验，可以得出菌毒敌液、中农卫康消毒剂、金碘王（聚维酮碘溶液）、威特格瑞液、强力消毒灵液和烧碱溶液的最小抑菌浓度的MIC，记录于表3。

表3 消毒剂的最小抑菌浓度

4 结语

烧碱溶液对试验菌的抑制作用明显，强力消毒灵液和威特格瑞液对实验室细菌的抑制作用相当，对试验菌的抑制作用仅次于烧碱，其他消毒药对某些实验室细菌的抑制作用不明显。此结论为实验室消毒等工作具有指导意义。

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