可溶性细胞间粘附分子-1及血管内皮生长因子在糖尿病合并多发性骨髓瘤患者血清中的表达水平

岳文婧

可溶性细胞间粘附分子-1及血管内皮生长因子在糖尿病合并多发性骨髓瘤患者血清中的表达水平

岳文婧

目的 探讨可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)及血管内皮生长因子(VEGF)在糖尿病合并多发性骨髓瘤(MM)患者血清中的表达水平及其关系。方法 随机选择60例MM患者(实验组)以及40例健康体检者(对照组)为研究对象,观察和对比不同临床分期和不同肿瘤量MM患者血清sICAM-1及VEGF的表达水平。结果 健康对照组的sICAM-1、VEGF的表达水平分别为(287±81)μg/L、(113±78)mg/L，实验组患者血清中sICAM-1及VEGF的表达水平则分别为(375±100)μg/L、(614±205)mg/L，与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。sICAM-1及VEGF表达水平随着MM肿瘤量的增加和临床分期增高而上升(P<0.05)。MM患者血清中sICAM-1浓度与VEGF浓度呈正相关。结论 sICAM-1及VEGF在MM患者血清中均呈现出高表达情况，且在不同时期MM患者中均有不同程度的增高。因此VEGF及sICAM-1的浓度或许可作为监测MM患者病情的指标之一。

可溶性细胞间粘附分子-1；血管内皮生长因子；糖尿病合并多发性骨髓瘤

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:725～727)

糖尿病合并多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是恶性浆细胞病中最为常见的一种类型[1-3]。多发性骨髓瘤特征是单克隆浆细胞恶性增殖并且分泌大量单克隆免疫球蛋白，易引起广泛骨质破坏、反复感染等一系列临床表现并导致了不良后果[4-6]。血管内皮生长因子(VEGF)参与刺激内皮细胞增生，增强血管渗透，是一种影响血管通透性的因子[7]。为提高对糖尿病合并多发性骨髓瘤(MM)诊断和治疗水平，本研究分析不同临床分期患者血清中可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平以及两者在实验中所表现的相关性，探究其在MM诊断及治疗中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选择MM患者60例，其中男性32例，女性28例，年龄20～70岁，平均(50.2±3.2)岁；再根据肿瘤量分组：低肿瘤量18例，中肿瘤量21例，高肿瘤量21例；按照临床分期分组，Ⅰ期15例，Ⅱ期23例，Ⅲ期22例。健康体检者40例，其中男性21例，女性19例，年龄20～69岁，平均年龄(49.2±2.3)岁，该组均无糖尿病、高血脂、肺、肾疾病等情况。各组性别、年龄等基本情况均无统计学意义。

1.2 方法

受试者清晨空腹状态下抽静脉血5 ml于试管中，在室温下静置30 min，然后以3 500转/分钟，(离心半径为6 cm)离心15 min分离血液，将分离的血清置于-80 ℃保存，待测。

VEGF测定:运用双抗体夹心ABC-ELISA法。取适量的实验组和对照组的VEGF单抗包被于酶标板上，VEGF和抗体结合，从而形成免疫复合物链接在板上。加入OPD，当出现黄色时，加入终止液硫酸，颜色变深，在492 nm处测OD值，由于VEGF与OD的值成正比，可通过绘制标准曲线求得VEGF浓度。其中具体的操作步骤如下：(1)建立标准曲线：取8个标准孔，向每孔中加入样品稀释液90 μl,将第1个孔加入标准品90 μl，混合均匀，后用加样器取出95 μl,将其加入第2个孔中，如此反复操作，直到第7孔时，去除90 μl弃去。第8孔为空白对照组。(2)加样：向每个待测样品孔中加入90 μl待测样品。(3)将反应板置于37 ℃下2 h。(4)洗板：用洗涤液将反应板洗涤4次，向滤纸上印干。(5)向每孔中加入第一抗体工作液40 μl。(6)将反应板置于37 ℃下1 h。(7)洗板：用洗涤液将反应板洗涤4次，向滤纸上印干。(8)向每孔中加入酶标记抗体工作液90 μl。(9)将反应板置于37 ℃下1 h。(10)洗板：用洗涤液将反应板洗涤4次，向滤纸上印干。(11)向每孔中加入底物工作液90 μl,将其置于37 ℃暗处反应7 h。(12)向每孔中加入一滴终止液将其混合均匀。(13)在492 nm处测吸光值。

同样sICAM-1也采用双抗体夹心ABC-ELISA法。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 健康对照组与实验组患者血清中sICAM-1和VEGF表达水平的比较

健康对照组血清sICAM-1和VEGF显著低于MM组患者，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 实验组与对照组血清中sICAM-1和VEGF表达水平 比较

2.2 MM患者血清中sICAM-1及VEGF比较

sICAM-1及VEGF在血清中的表达水平随着肿瘤量增加和临床分期增高而上升，两者具有正相关性(P<0.05)，见表2。

表2 MM患者血清中sICAM-1及VEGF比较

3 讨论

多发性骨髓瘤是恶性浆细胞病中最常见的一种类型，其伴随着单克隆抗体产生为特征的一种克隆性血液病。sICAM-1是细胞表面粘附分子中的重要一员，是一种单链糖蛋白，其主要存在于血管内皮细胞的表面。这些粘附分子会因为炎症、肿瘤自身免疫疾病等的出现而在血液中浓度升高。血清中sICAM-1参与细胞的识别和粘附，在介导免疫和炎症反应中有重要意义。本研究显示，MM患者血清的sICAM-1水平显著高于正常对照组。在多数情况下，sICAM-1基本不表达或很少表达，然而当机体处于炎性细胞分子攻击或其它因素刺激后，sICAM-1则表达于多种细胞表面，从而促炎症的产生与发展[8-9]。该研究中发现MM患者血清的sICAM-1的含量随着患者肿瘤量的增加而增加。血管内皮细胞生长因子是一种特异性极强的作用于内表皮细胞的细胞因子，有强大的促血管形成能力和增加血管通透性作用。MM患者的骨髓瘤细胞分泌OAF、淋巴细胞毒素等激活破骨细胞，可使骨质疏松，导致局部肿块[10]。这一过程离不开血管生成因子的调控，特别是VEGF在当中起着至关重要的作用。血管内皮细胞生长因子是一种具有肝素结合活性的二聚体糖蛋白，可以促进血管发生，内皮细胞的增殖，从而维持血管的正常状态和完整的结构。人VEGF基因其mRNA可形成5种同分异构体。研究发现，在多发性骨髓瘤细胞中，第一，由于缺氧可诱导VEGF基因的转录，使得VEGFmRNA的稳定性增强，促进VEGF的表达；第二，B细胞衍生的细胞因子对T细胞、巨噬细胞等的分泌作用是Tnf-α、IL-6等活化，诱导VEGF表达并使其与特异性受体结合；第三，MM患者中，其血管生成因子和血管抑制因子之间的稳态遭到破坏，从而影响了机体对MC的免疫应答效应，使得血液中VEGF含量升高[11-12]。血管内皮细胞上一种叫囊泡小体的细胞器与基膜作用形成一些有利于大分子物质通过的结构，VEGF就是通过调节这些结构的开启来增加血管通透性的。血管内皮细胞生长因子在肿瘤研究中被首次发现。它能够使小静脉对大分子物质的通透性增加，使得胸水增加。MM患者血液中VEGF高于生理浓度，从而促进肾小球毛细血管的内表皮细胞的增殖和分裂，同时促进了内皮细胞中胶原酶等血管活性物质的释放增强了血管的通透性，从而形成蛋白尿或微蛋白尿。

本研究显示，MM患者组血清中sICAM-1以及VEGF均显著高于健康对照组，具有统计学差异(P<0.05)。已有研究表明，体内有某些因素作用于肿瘤细胞，使其产生过量的sICAM-1，从而导致MM患者血清中sICAM-1表达水平上升。血清中sICAM-1以及VEGF的含量与不同MM患者的临床分期有关，并且MM患者肿瘤量越多，病情就越严重，相应的血清中sICAM-1以及VEGF的表达水平就越高。从研究数据可以看出，MM患者血清中VEGF和sICAM-1存在正相关关系,有统计学意义(P<0.05)，说明有可能其中一种因子为另一种因子的产生起到了促进作用。

综上所述，MM患者血清中VEGF和sICAM-1的表达水平可以作为MM患者病情诊断和疗效判断的依据。

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(编辑：甘 艳)

Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1 Vascular Endothelial Growth FactorExpression Levels in Serum and Diabetic Patients with Multiple Myeloma Patients

YUEWenjing.

TheFirstPeople'sHospitalofHuizhou,Huizhou,516003

Objective To investigate the soluble intercellular adhesion molecule-1(sICAM-1)and vascular endothelial growth factor(VEGF)in diabetic patients with multiple myeloma(MM)relationship between the expression of serum levels.Methods 60 cases of MM patients(experimental group)and 40 healthy volunteers(control group)were randomly selected for the study,different clinical stages and different tumor volume MM serum expression levels of sICAM-1 and VEGF were observed and compared.Results sICAM-1,the expression levels of VEGF in the control group were(287±81) μg/L,(113±78) mg/L,the expression levels of the experimental group sICAM-1 and VEGF,respectively up(375±100) μg/L,(614±205) mg/L,and the control group were significantly different(P<0.05).sICAM 1-concentration and the concentration of VEGF was positively correlated with the serum.Conclusion sICAM-1 and VEGF in the serum of patients with MM in both showed high expression,and have increased in different degrees in different periods in MM patients.Therefore,VEGF and sICAM-1 concentration or as an indicator of the condition of patients with MM license.For patients with clinical manifestations and progression of MM patients has extremely important reference value.

Soluble intercellular adhesion molecule-1;Vascular endothelial growth factor;Diabetic patients with multiple myeloma

广东省惠州市科技计划项目(编号：2015Y053)

516003 广东省惠州市第一人民医院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.05.009

R733.3

A

1001-5930(2017)05-0725-03

2016-07-20

2016-12-08)