氟苯尼考与替米考星对奶牛乳房炎常见病原菌的联合药敏试验

张艳玲，孙慧琴，熊天雪，李先强

(1.塔里木大学动物科学学院，阿拉尔 843300；2.新疆生产建设兵团塔里木畜禽科技重点实验室，阿拉尔 843300)

氟苯尼考与替米考星对奶牛乳房炎常见病原菌的联合药敏试验

张艳玲1,2，孙慧琴1，熊天雪1，李先强1,2

(1.塔里木大学动物科学学院，阿拉尔 843300；2.新疆生产建设兵团塔里木畜禽科技重点实验室，阿拉尔 843300)

本试验对氟苯尼考和替米考星在5种常见奶牛乳房炎病原菌(致病性大肠杆菌、停乳链球菌、乳房链球菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌)联合药敏试验中的相互作用进行了研究。结果表明，氟苯尼考和替米考星单独使用时对各菌的最低抑菌浓度（MIC）分别为0.5～4μg/mL和1～8μg/mL，二者联合后的部分抑菌指数（FIC）介于0.375～0.75，表现出协同作用或相加作用。

氟苯尼考；替米考星；奶牛乳房炎；联合药敏试验

奶牛乳房炎是制约全球奶牛业快速发展的最重要疾病之一。研究表明，美国加利福尼亚州、密歇根州、俄亥俄州和德国的巴伐利亚州、法国的韦仕敦以及英国，每年每头奶牛因防治奶牛乳房炎疾病分别花费122.4美元[1]、35.94美元[2]、39.85美元[3]、26.19美元[3]、69.46美元[4]和326.80美元[5]。我国奶牛乳房炎发病率高达46%～70%。目前，抗生素在奶牛乳房炎防治中仍然发挥着不可或缺的重要作用。

临床上，奶牛乳房炎的病因复杂，且常伴有多种病原菌的继发感染和混合感染，加之细菌耐药性问题日益严重，很难通过单一用药来进行有效控制[6]。目前，关于联合用药防治奶牛乳房炎已有大量文献报道，如恩诺沙星与卡那霉素[7]、阿莫西林与氧氟沙星[8]等，但并未见氟苯尼考与替米考星联合用药的相关报道。本研究针对5种常见奶牛乳房炎病原菌（致病性大肠杆菌、停乳链球菌、乳房链球菌、无乳链球菌以及金黄色葡萄球菌）进行了氟苯尼考与替米考星的联合药敏试验，旨在为奶牛乳房炎的临床用药新组合提供参考。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

氟苯尼考、替米考星标准品购自中国兽医药品监察所；MH肉汤、TSA琼脂和TSB肉汤培养基购自青岛新希望生物科技有限公司；胎牛血清购自广州瑞特生物技术有限公司。

1.2 试验菌种

停乳链球菌、乳房链球菌、无乳链球菌、致病性大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌均由本实验室分离保存。

1.3 药液制备

精密称取氟苯尼考与替米考星标准品，用无菌去离子水配制成128μg/mL的药液，并置于-20℃冰箱保存备用。

1.4 培养基制备

MH肉汤、TSA琼脂以及TSB肉汤均按相应说明书配制。

1.5 单价药的最低抑菌浓度(MIC)测定

采用美国临床实验室标准化研究所(C L S IM07A8-2010)制定的微量肉汤稀释法分别测定氟苯尼考和替米考星对5种常见奶牛乳房炎病原菌的MIC，质控药物选择氨苄青霉素，质控菌株选择大肠杆菌ATCC25922。

1.6 联合药敏试验

应用微量肉汤棋盘法[9]分别测定氟苯尼考与替米考星对5种常见奶牛乳房炎病原菌的联合药敏试验效应。以单价药MIC值的1/4、1/2、1、2、4、8倍等浓度在96孔细胞培养板上分别进行敏感试验，菌液与药液混合后将96孔板置恒温培养箱培养24h后观察结果。

1.7 结果判定

以部分抑菌指数(FIC)作为联合药敏试验的判断依据，计算公式如下：

FIC≤0.5为协同作用；FIC在0.5～1之间为相加作用；FIC介于1～2为无关作用；FIC＞2为拮抗作用。

2 结果与分析

2.1 单价药MIC

氟苯尼考、替米考星对停乳链球菌、乳房链球菌、无乳链球菌、致病性大肠杆菌以及金黄色普通球菌的MIC测定结果如表1所示。

表1 氟苯尼考、替米考星单独使用时对5种菌的MIC单位：μg/mL

如表1所示，氟苯尼考、替米考星单独使用时对5种常见奶牛乳房炎病原菌的MIC值分别介于0.5～4μg/mL 和1～8μg/mL，表明两药对致病性大肠杆菌、链球菌以及葡萄球菌等均有很好的抑菌效果，可用于临床奶牛乳房炎的防治。同时也表明，氟苯尼考和替米考星不仅对奶牛乳房炎致病菌中的革兰氏阳性菌有较强抑制作用外，还对革兰氏阴性菌（致病性大肠杆菌）也有很好的抑菌作用。

2.2 联合药敏试验结果

氟苯尼考和替米考星联合使用时，停乳链球菌、乳房链球菌、无乳链球菌、致病性大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌的MIC值均有所下降，表明联合用药时二者的抗菌能力均有所加强。氟苯尼考和替米考星对5种菌的FIC 为0.375～0.75，有四株菌表现为协同作用，其余六株菌表现为相加作用，具体的试验结果和联合效应如表2所示。

表2 氟苯尼考、替米考星联合用药时对5种菌的敏感试验

3 讨论

氟苯尼考属于酰胺醇类抗生素，其主要通过与病原菌的70S核蛋白体的50S亚基上的A位紧密结合，阻碍了肽酰基转移酶的转肽反应，使肽链不能延伸而抑制蛋白质的合成[10]。替米考星为大环类脂类抗生素，抗菌机理为与敏感菌的核蛋白体50S亚基结合，通过对mRNA位移的阻断而影响细菌蛋白质的合成[11]。二者联合用药伴有相加作用或协同作用的机制可能是作用的靶位不同[12]。另外，氟苯尼考和替米考星均属于速效抑菌剂，一种药物抑制细菌的蛋白质合成可能会加快另一种药物与细菌的结合，从而发挥着更强的抑菌作用[13]。

大量文献表明，临床上同时使用两种或以上的药物治疗疾病可适度扩大药物抗菌谱、减少药物用量，同时降低养殖成本和增强疗效、降低或避免毒副作用以及减少或延缓药物耐药性的产生[14]。本试验表明，以抗菌效应而言，氟苯尼考与替米考星二者可组方用于防治奶牛乳房炎疾病。然而，替米考星肌内注射时可产生较强的局部刺激，对动物的毒性作用主要体现在心血管系统，可引起心动过速和收缩力减弱、呼吸加快、呕吐和惊厥、甚至死亡等不良反应[15]。氟苯尼考虽无明显的毒性作用，但其水溶性极差，严重制约着其在临床上的广泛应用。目前，伴随着新型给药载体如固体脂质纳米技术、脂质体技术、微球与微囊技术等的快速研发和应用，在克服兽药较差物理性能的同时，还能明显改善药物体内过程。因此，在本试验的基础上可开发研究新型氟苯尼考与替米考星复方给药载体，以应对奶牛乳房炎疾病的复杂性、降低其临床危害和提高养牛效益。

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Susceptibility Testing of the Combination of Florfenicol and Tilmicosin against Some Pathogenic Bacteria of Dairy Cow Mastitis

ZHANG Yan-ling1,2, SUN Hui-qin1, XIONG Tian-xue1, LI Xian-qiang1,2
(1.College of Animal Science, Tarim University, Alar 843300; 2.Key Laboratory of Tarim Animal Husbandry Science and Technology of Xinjiang Production & Construction Corps, Alar 843300)

The aim of this study was to investigate the interaction between florfenicol and tilmicosin against some pathogenic bacteria of dairy cow mastitis. The minimal inhibitory concentration (MIC) of florfenicol and tilmicosin against the Escherichia coli, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, Streptococcus agalactiae and Staphylococcus aureus were determined with the broth dilution method. Combined antibacterial activities of florfenicol and tilmicosin against the bacteria determined by chequerboard analysis, and the fractional inhibitory concentration (FIC) were measured. The results demonstrated that, the MIC of florfenicol and tilmicosin against the bacteria when single used were 0.5～4 μg/mL and 1～8 μg/mL, and the combined chemosensitivity test suggested that florfenicol and tilmicosin have a synergic or additive effect against the some pathogenic bacteria of dairy cow mastitis with the FIC range from 0.375 to 0.75, respectively.

Florfenicol; Tilmicosin; Cow mastitis; Combined antibacterial activities

S858.23

A

1004-4264（2017）04-0034-03

10.19305/j.cnki.11-3009/s.2017.04.009

2016-09-25

国家级大学生创新创业训练计划项目《替米考星与氟苯尼考复方固体脂质纳米粒的制备(201610757018)》；塔里木大学校长基金青年创新资金项目《氟苯尼考包合物微球纳米混悬剂的研制(TDZKQN201603)》。

张艳玲（1994-），女，甘肃平凉人，汉族，本科在读。

李先强（1989-），男，安徽马鞍山人，汉族，讲师，主要从事兽医药理学及新兽药的开发研究工作。