食品中安赛蜜的两种快速检测方法比较

刘 峰

(漳州职业技术学院 食品与生物工程系， 福建 漳州 363000)

食品中安赛蜜的两种快速检测方法比较

刘 峰

(漳州职业技术学院 食品与生物工程系， 福建 漳州 363000)

采用高效液相色谱(HPLC)和液相色谱质谱联用仪(LC/MS)，以国家标准为参考，建立食品中安赛蜜的两种检测方法.结果表明：HPLC和LC/MS对安赛蜜的检测均可达到良好的效果，加标的安赛蜜具有较好的线性关系，两种方法相关系数均大于0.99；HPLC检测食品中安赛蜜的检测限为1.0 mg/kg，LC/MS检测安塞蜜的检测限为0.01 mg/kg；HPLC检测成本较低，而LC/MS检测周期较短，检测限更低.

高效液相色谱； 液相色谱质谱联用仪； 安赛蜜； 检测

乙酰磺胺酸钾(安赛蜜)分子式为C4H4KNO4S，分子量为201.24.安赛蜜是食品行业广泛应用的甜味剂[1-3]，生产工艺简单、价格低廉.我国卫生部于1992年5月正式批准安赛蜜用于食品、饮料领域[4].但超量使用安赛蜜将对人体的肝脏和神经系统造成危害，如果短时间内食用过量，会引起血小板减少，从而导致急性大出血.为此，GB 2760-2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》[5]中明确规定了安赛蜜的使用限量.

本文参照国标GB/T 23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定——高效液相色谱法》和GB/T 5009.140-2003《饮料中乙酰磺胺酸钾的测定》[6-7]的样品前处理方法及测定方法，对某些关键步骤进行细化，利用高效液相色谱(HPLC)和液相色谱质谱联用仪(LC/MS)，建立食品中安赛蜜的两种快速检测方法，检测结果理想.同时对该两种方法测定安赛蜜含量的检测技术进行分析比较，判断两种方法的优劣性.

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器设备

Agilent 1200高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器(美国Agilent公司)；液质联用仪，液相部分Agilent 1260；质谱部分Agilent 6410三重四级杆质谱仪(美国Agilent公司)；Eclipse XDB C18柱，4.6×250 mm，5 μm(美国Agilent公司)；Eclipse Plus C18柱，3.0 ×100 mm，1.8 μm(美国Agilent公司).

1.1.2 试剂

甲醇、乙腈、甲酸(色谱纯)；0.02 mol/L乙酸铵溶液；0.47 g/L乙酸铵水溶液(含0.2%(V/V)甲酸)；0.4 mol/L亚铁氰化钾溶液；1 mol/L乙酸锌溶液；安赛蜜标准品(纯度99.0%).

1.1.3 标准溶液的配制

(1) 标准储备溶液的配制：准确称取安赛蜜标准物质10 mg，加入适量超纯水溶解，再转移至100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，该标准储备溶液浓度为100 μg/mL.

(2) 液相法标准工作液的配制：准确吸取1 mL上述标准储备溶液于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，配制成10.0 μg/mL标准溶液，再根据需要逐级配制成0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 μg/mL的系列标准溶液.

(3) 液相色谱质谱法标准工作液的配制：准确吸取0.1 mL标准储备溶液于100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，配制成0.10 μg/mL标准溶液，再根据需要逐级配制成0.002、0.005、0.01、0.02、0.05 μg/mL的系列标准溶液.

1.2 方法

1.2.1 试样制备

取500 g供实验的样品，绞碎并使之均匀，然后置于-18 ℃以下冰箱中储存备用.

1.2.2 分析步骤

(1) 前处理步骤：准确称取样品5.00 g置于25 mL比色管中，加入15 mL超纯水，超声提取15 min，加入2 mL亚铁氰化钾溶液，再加入2 mL乙酸锌溶液，漩涡振荡0.5 min，加水定容至25 mL，摇匀，移入离心管中，4 500 r/min离心5 min，吸出上清液，用微孔滤膜过滤至进样瓶，分别供LC-MSMS和HPLC分析测试.

(2) 分析条件：HPLC和LC/MS的分析条件如表1所示.

表1 HPLC和LC/MS的分析条件

2 结果与分析

2.1 安赛蜜的HPLC色谱图和LC/MS色谱质谱图

用两种仪器都能较好地检测安赛蜜(见图1和图2)，但是检测限有所不同.利用HPLC检测安赛蜜的检测限为1.0 mg /kg，出峰时间为4.9 min；利用LC/MS检测安赛蜜的检测限为0.01 mg /kg，出峰时间为2.7 min.

2.2 HPLC和LC/MS检测条件的优化

采用HPLC检测时，将流动相A 0.02 mol/L乙酸铵溶液与流动相B甲醇按不同比例进行测试，实验发现：甲醇体积分数为20%时，出峰时间太快，此时极性杂质难分开，干扰较大；甲醇体积分数为5%时，出峰时间晚；甲醇体积分数为10%时，出峰时间较合理，而且分离效果较好.结果见图1.

采用LC/MS检测时,比较了甲醇、乙腈分别与水、0.47 g/L乙酸铵水溶液(含0.2%(V/V)甲酸)和0.5%甲酸水溶液组成的流动相系统的洗脱效果.结果表明，采用乙腈和0.47 g/L乙酸铵水溶液(含0.2%(V/V)甲酸)作为流动相时，安赛蜜响应值较好.在ESI电喷雾离子源负离子模式下，对安赛蜜标准溶液进行全扫描和子离子扫描，确定定量、定性离子对，分别优化碎裂电压和碰撞能量等参数.LC/MS法色谱图见图2.

2.3 HPLC的加标回收曲线、检测限、回收率和标准偏差

采用HPLC对实际样品进行1.0、2.5、5.0、10.0、25.0 mg/kg 水平的加标回收实验，以安赛蜜的响应值(y)对相应的浓度(mg/kg)制作标准曲线，结果显示：回归方程为y=6.504 8x-0.824 1，相关系数(R2)为0.999 1，在1.0～25.0mg/kg范围内具有良好的线性关系.同时用本法对菠萝罐头、腌渍姜样品进行6次5.0mg/kg水平的加标实验，其回收率为95.2%和97.5%，相对标准偏差(RSD)为3.0%和2.7%.以信噪比S/N>10确定方法的检测限，安赛蜜高效液相色谱法的检测限为1.0mg/kg，结果较为理想.

2.4 LC/MS的加标回收曲线、检测限、回收率和标准偏差

采用LC/MS对样品进行0.01、0.025、0.05、0.10、0.25 mg/kg 水平的加标回收实验，以安赛蜜的响应值(y)对相应的浓度(mg/kg)制作标准曲线，结果显示：回归方程为y=20 965.488x+1 351.969，其相关系数(R2)为0.998 0，在0.01～0.25mg/kg范围内具有良好的线性关系.用本方法对菠萝罐头、腌渍姜样品进行6次0.05mg/kg水平的加标实验，其回收率为90.5%和93.4%，相对标准偏差(RSD)为5.6%和6.0%.以信噪比S/N>10确定方法的检测限，安赛蜜液相色谱质谱法的检测限为0.01mg/kg，结果较为理想.

2.5 实际样品检测

运用本文建立的两种方法，分别对含有不同含量安赛蜜的2份腌渍姜样品进行检测，两种方法的检测结果无差异，结果见表2.

表2 两种方法对腌渍姜中安赛蜜质量浓度的测定结果

3 结 论

本文采用HPLC和LC/MS，建立了两种快速检测食品中安赛蜜的方法.结果表明，两种方法加标回收曲线线性良好，相关系数均大于0.99；两种方法的检测限低，检测效果较好.利用HPLC检测安赛蜜的检测限为1.0 mg/kg，利用LC/MS检测安赛蜜的检测限为0.01 mg/kg.在实际样品的检测中，两种方法的检测结果也比较接近.通过比较及应用发现，HPLC检测成本较低，经济实用.LC/MS检测周期较短，检测限更低.

[1]狄俊伟.食品中常见添加剂的检测与评价[D].江苏:苏州大学,2007:15-22.

[2]汤力.由食品添加剂的发展引发的对食品安全的思考[J].中国调味品,2015(9):75-78.

[3]张守文.国家进一步完善食品添加剂生产许可制度——解读新《食品安全法》对食品添加剂的规定[J].中国食品添加剂，2016(2):46-49.

[4]中华人民共和国卫生部.食品添加剂使用卫生标准:GB2760-2011[S].北京：中国标准出版社,2011:4．

[5]中华人民共和国卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准食品添加剂使用标准:GB2760-2014[S].北京：中国标准出版社，2014:12．

[6]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定——高效液相色谱法:GB/T 23495-2009[S].北京：中国标准出版社，2009:4.

[7]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.饮料中乙酰磺胺酸钾的测定:GB/T 5009.140-2003[S].北京：中国标准出版社，2003:8.

[责任编辑 邵圣文]

A Comparison of Two Methods for Rapid Detection of Acesulfame in Foods

LIU Feng

(Food and Biological Engineerin, Zhangzhou Institute of Technology, Zhangzhou 363000, China)

Considering national standards, two methods for the determination of acesulfame in food are established based on high performance liquid chromatography (HPLC) and liquid chromatograph-mass spectrometer (LC/MS). And both of them could obtain good result for acesulfame detection. As shown in recovery experiment, the linearity of standard samples was good, with correlation coefficients larger than 0.99. The detection limits of acesulfam in the muscle tissue of water products were1.0 mg/kg using HPLC, and 0.01 mg/kg using LC/MS. From the point of testing effect, the cost of HPLC detection is lower, but, LC/MS detection cycle is shorter with lower detection limit and better effect.

HPLC; LC/MS; acesulfame; detection

2016-12-10

福建省教育厅A类科技项目 (JA14384).

刘峰，硕士，讲师，研究方向：分析化学.E-mail:76808687@qq.com

O657.7

A

1009-1734(2017)02-0027-04