赤苍藤醇提物的急性毒性及对小鼠高尿酸血症的影响

黄元河+黎星星+潘乔丹+黎为能+黄一能

【摘要】目的：探讨赤苍藤醇提物的急性毒性及对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响。方法：采用最大耐受剂量法评价赤苍藤醇提物对小鼠的急性毒性；通过氧嗪酸钾灌胃复制高尿酸血症动物模型，赤苍藤和别嘌醇干预治疗，检测小鼠血清尿酸值和血清肌酐水平。结果：赤苍藤醇提物灌胃小鼠的最大给药量为400 g（生药）/kg，该剂量对小鼠心脏、肝脏、脾脏、肾脏均无显著影响。赤苍藤高、中、低剂量醇提物均能显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸浓度（P<001），并能显著抑制高尿酸血症小鼠血清肌酐水平的升高（P<001）。结论：赤苍藤醇提物毒性低，对高尿酸血症小鼠具有良好的治疗作用，对小鼠肾脏具有保护作用，临床用药安全。

【关键词】排毒菜；赤苍藤；急性毒性；高尿酸血症

【中图分类号】R2855【文献标志码】B【文章编号】1007-8517（2017）05-0052-03

痛风（gout）是由于嘌呤类物质代谢紊乱，产生尿酸过多和（或）尿酸排泄减少[1]，血尿酸浓度持续增高导致尿酸盐结晶沉积软组织所致的一组代谢性疾病，而高尿酸血症是痛风最重要的生化基础[2]。目前，治疗痛风的化学药物效果明显，如秋水仙碱和别嘌呤醇，不良反应较多，常见恶心、呕吐、腹泻、过敏反应、肝肾损害等[2]。赤苍藤（当地叫“排毒菜”）是广西西南地区靖西、那坡、德保县一带壮族人们常用排毒利尿的野生蔬菜，因食用后排臭尿而得名。笔者采集“排毒菜”的原植物经鉴定确认为铁青树科（Olacaceae）赤苍藤属（Erythropalum）赤苍藤（Erythropalum scandens Bl）。赤苍藤为多年生常绿大型木质藤本植物，具有较高的食用、药用及园林绿化观赏价值，主产于云南、贵州、广西、广东等地[3]。赤苍藤根中含酚性成分，树脂及三萜，树脂的主要成分为苏门树脂酸、桂皮酸松柏醇酯，具有清热解毒、明目赤胆之功效，用于肝胆赤热、黄胆、尿频、尿急、尿痛和小便不利等症，是治疗痛风的最佳药理食疗[4]。为科学合理地利用和开发赤苍藤资源，寻找安全、有效、经济的抗高尿酸血症药物，本研究以腹腔注射尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾建立尿酸酶缺乏型高尿酸血症小鼠模型，研究赤苍藤醇提物对高尿酸小鼠血清尿酸水平和血清肌酐水平的影响，其研究结果为开发赤苍藤食用、药用价值具有重要的意义。

1仪器与材料

11动物SPF级昆明种小鼠，体重18～23g，雌雄不限，来源于右江民族医学院实验动物中心，动物生产许可证号：SCXK（桂）2014-0010。

12仪器旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；UV1800紫外-可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；制冷泵与真空泵一体机（郑州世纪双科实验仪器有限公司）；循环水式多用正空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）。

13材料别嘌呤醇片（重庆青阳药业有限公司）；氧嗪酸钾盐（Aladdin公司）；尿酸测定试剂盒、肌酐测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）。

2方法

21赤苍藤醇提物的制备取赤苍藤茎叶干燥粉末，加入适量的75%乙醇加热回流，抽滤，收集滤液。回流3次，将3次回流所得滤液混合后用旋转蒸发仪浓缩，将浓缩液冷冻干燥，得浸膏。各样品组溶液在配制时均按生药量计算。

22急性毒性测定因预实验无法测出赤苍藤醇提取物的半数致死量（LD50），故进行最大耐受量（MTD）的测定[5]。昆明种小鼠，雌雄各半，共10只。选择人口服1025 g/d剂量的30倍为最大耐受量，折算为小鼠给药剂量，按生药量计算为40g/kg。实验前12 h禁食，每天灌胃2次，每次间隔6 h，药容积均为10 mL/kg。灌胃后每日观察1次，注意观察记录动物毒性反应及死亡数，灌胃前后体重变化，共观察14 d，对于所有的试验动物进行尸检，取心、肝、脾、肺、肾、等作大体观察，称质量，做脏器系数分析。

23对高尿酸血症小鼠的影响60只雄性昆明种小鼠随机分为6组（每组10只），分为正常对照组、模型对照组（阴性对照）、别嘌醇组（阳性对照，10 mg/kg）、赤苍藤醇提物低剂量组（750 mg生药/kg）、中剂量（1500 mg生药/kg）、高剂量组（3000 mg生药/kg）、除正常对照组外，其余各组每天腹腔注射尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾（给药量250 mg/kg，给药容积为10 mL/kg）塑造小鼠高尿酸血症模型并于造模2h后开始灌胃给药，给药容积为15 ml/kg，正常对照组和高尿酸血症模型组（阴性对照）给予等量生理盐水，连续给药7d。第8天摘眼球采血，在4℃冰箱放置2h后离心20 min，3000 r/min分离血清，取上层澄清液按试剂盒说明测定血清尿酸及肌酐水平。

24统计学方法数据采用SPSS170软件进行统计处理，采用（x±s）表示，组间比较采用独立t检验，多组间比较采用方差分析，P<005表示差异有统计学意義。

3结果

31赤苍藤醇提取物对小鼠的急性毒性赤苍藤醇提取物的小鼠最大耐受量试验的14d中，小鼠均表现正常，均未见死亡。14d中，灌胃后所有受试小鼠的毛色均光洁，其饮食、活动和大小便均正常，其眼、鼻和口腔均无异常分泌物，同时也未出现不良情况。灌胃前小鼠体重与灌胃后第5、10、12、14天后小鼠体重无明显变化。见表1。14d后处死所有小鼠，解剖后，观察受试小鼠的心、肝、脾、肺、肾和胃等脏器，均未见异常改变，脏器系数与正常组比较均无统计学差异（P>005）。见表2。

32对高尿酸血症小鼠血清尿酸和肌酐水平的影响与正常组相比较，高尿酸血症模型组血清尿酸显著升高（P<001），说明建模成功。与高尿酸血症模型组相比较，赤苍藤醇提物各剂量组和别嘌呤醇组均能显著降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平（P<001），并随着赤苍藤醇提物生药量增加降尿酸作用呈现增强的趋势。低剂量组的血清尿酸稍高于别嘌醇药物治疗组的，但中、高剂量组的血清尿酸水平低于别嘌醇药物治疗组及正常组的，说明中、高剂量组能降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平在正常值以下。血清肌酐水平是评价肾功能的重要因子，肾功能损伤导致肌酐排泄障碍，从而引起机体肌酐水平的升高[6]。因此血清肌酐水平越高，表示肾功能越差。与正常组相比较，高尿酸血症模型组小鼠血清肌酐水平均显著升高（P<001），表明高尿酸血症小鼠肾功能下降。与模型组相比较，赤苍藤醇提物各剂量组和别嘌呤醇组均能抑制高尿酸血症小鼠血清肌酐的升高。见表3。

4讨论

高尿酸血症与痛风、高血压、心血管疾病、肾脏疾病等有紧密的联系[7]。高尿酸血症可引起痛风性急性关节炎反复发作、痛风石性关节炎和关节畸形，更可累及肾脏引起慢性间质性肾炎和肾结石等。加强对高尿酸血症的研究，寻找防治痛风等疾病防治药物，具有十分重要的现实意义。本实验使用氧嗪酸钾制造高尿酸血症模型，其原理是氧嗪酸钾能抑制动物体内尿酸酶活性，使动物体内的尿酸不能分解，造成血清尿酸生成增多的动物模型[8]。该模型在国际上使用较为普遍，可用于评价药物的抗高尿酸血症和痛风的作用[9]。研究结果表明，赤苍藤醇提物经口给药小鼠的最大给药量为400g（生药）/kg 时，小鼠体重及心脏、肝脏、脾脏、肝脏、肾脏系数均无显著影响，证明赤苍藤醇提取物无明显急性毒性作用。

赤苍藤醇提物各剂量组均能够显著降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平，降低高尿酸血症小鼠体内肌酐浓度，说明赤苍藤醇提物是通过提高小鼠的肾功能，增加尿酸排泄来降低小鼠体内尿酸水平，表明赤苍藤将有可能成为预防和治疗高尿酸血症的新选择。采用中药化学成分预实验的方法[10]及薄层色谱法对赤仓藤的主要化学成分进行初步研究，结果提示赤苍藤醇提取物中可能有香豆素类、黄酮类、酚类、三萜类、多糖等物质，赤苍藤醇提物的降尿酸作用为今后研究该植物的基础物质奠定基础。

参考文献

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