HPLC法测定归芍舒肝散中芍药苷的含量

许庆+安艳苏+肖植国

【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定归芍舒肝散中芍药苷的含量。方法：采用BDS HYPERSIL C18色谱柱（250mm×46mm，5μm）；以甲醇-01%磷酸溶液（26∶74）为流动相，流速为10mL/min；柱温：30℃；检测波长：230nm。结果：芍药苷浓度在521～10411μg范围内与峰面积呈良好线性关系，r=09999，平均回收率为9894%（RSD为12%）。结论：本方法准确、快速、简便可靠，结果稳定，可用于归芍舒肝散中芍药苷的含量测定。

【关键词】归芍舒肝散；芍药苷；高效液相色谱法

【中图分类号】R248【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）05-0032-03

归芍舒肝散是曲靖市中医医院的院内制剂，由白芍、当归、柴胡、白术、茯苓、薄荷、甘草（炙）等七味中药组成，具有疏肝健脾、养血调经的作用。临床用于肝气不舒，胸胁胀痛，头晕目眩，食欲减退，月经不调等症。制剂中白芍为君药，具有养血调经、柔肝止痛之功效[1-2]。白芍的主要有效成分为芍药苷，是一种单萜类糖苷化合物，药理研究发现芍药苷具有抗自由基损伤，抑制细胞内钙超载和抗神经毒性等活性，体内实验证明其有降低血液黏度、抗血小板聚集、扩张血管、改善微循环、抗氧化、抗惊厥等多种生物学效应[3-6]。由于不同产地来源、不同炮制方法的白芍中芍药苷含量会有显著差异[7-8]，而归芍舒肝散现行质量标准中仅以显微及薄层色谱来鉴别其中部分药材，未建立制剂中白芍含量测定方法。本文参照文献[9-12]，以芍药苷为定量控制指标，采用高效液相色谱法（HPLC）对芍药苷进行含量测定，为有效控制归芍舒肝散质量提供了可靠且简便易行的方法。

1仪器与材料

11仪器Agilent1200型高效液相色谱仪（包括G1322A系列四元泵，G1315D DAD检测器，G1316A柱温箱，G1329A自动进样器）；KQ-300UDB型双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；METTLE MS205DU电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；PURELAB Flex 3一体式超纯水仪（英国ELGA公司）。

12材料芍药苷对照品（批号：110736-201539，中国食品药品检定研究院）；磷酸（分析纯，批号：2015071401，成都市科龙化工试剂厂），甲醇（色谱纯，CAS号：67-56-1，赛默飞世尔科技（中国）有限公司），水为纯化水。归芍舒肝散（批号：140203、150309、160103，曲靖市中医医院制剂室）。阴性样品用药材当归、柴胡、白术、茯苓、薄荷、甘草（炙）来源于曲靖市食品药品检验检测中心中药标本室经检验合格的留样标本。

2方法与结果

21色谱条件色谱柱：BDS HYPERSIL C18色谱柱（250mm×46mm，5μm）；流动相：甲醇-01%磷酸溶液（26∶74）；流速：10mL/min；柱温：30℃；检测波长：230nm；进样量：10μl。

22溶液制备

221供试品溶液制备取本品内容物，混匀，取约02g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，称定重量，超声（频率：45KHz；功率：240W）30min，取出，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

222对照品储备液的制备精密称取芍药苷对照品1125mg置25mL量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，即得芍药苷质量浓度为04338mg/mL的对照品溶液。

223陰性样品溶液的制备按归芍舒肝散处方比例，分别称取除白芍外的其它药材，依归芍舒肝散工艺制备不含白芍的阴性样品，并按“221”项下制备阴性样品溶液。

23线性关系的考察分别精密吸取“222”项下芍药苷对照品溶液03、06、12、30、60mL，分别置25mL量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，制得含芍药苷521、1041、2082、5206、10411ug/mL的系列对照品溶液。在“21”项下色谱条件进样分析，以对照品浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），计算线性回归方程，得芍药苷的回归方程Y=128698X-31886（r=09999）。结果表明，芍药苷浓度在521～10411μg范围内具有良好线性关系。

24精密度试验精密吸取同一芍药苷对照品溶液（含芍药苷5206μg/mL）在“21”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积值，RSD为07%，表明仪器的精密度良好。

25重复性试验取同一批归芍舒肝散（批号160103）6份，按“221”项下的方法处理，记录峰面积，计算含量，结果，每1g样品中平均含芍药苷5385mg，RSD为11%，表明本方法的重复性良好。

26稳定性试验取同一份供试品溶液（批号160103），分别于0、2、4、8、12、24h按“21”项下色谱条件进行分析，记录峰面积。结果芍药苷的RSD为13%。表明供试品溶液在24h内质量稳定。

27加样回收率试验分别取已知含量的同一批归芍舒肝散（批号160103）约01g，精密称定，共6份，分别精密加入对照品溶液（浓度为04338mg/mL）1mL，按“221”项下的方法处理，制备供试液，分别测定，计算回收率。平均回收率为9894%，RSD为12%。见表1。

28专属性试验将阴性样品溶液按“21”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，见图1。结果色谱图中在芍药苷相应出峰位置未出现干扰峰。

29样品含量测定取不同批号的供试品3批按“221”项下的方法处理，制备供试品溶液，按“21”项下色谱条件进样测定，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以外标法计算芍药苷含量。见表2。

3讨论