血清中亚甲基四氢叶酸还原酶活性与白癜风临床特征相关性研究

陈佳希 易秀莉 李春英 高天文



·论著·

血清中亚甲基四氢叶酸还原酶活性与白癜风临床特征相关性研究

陈佳希 易秀莉 李春英 高天文

目的： 明确白癜风患者血清中亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)活性与白癜风临床特征间的关系。方法： 选择性别年龄相匹配的白癜风患者及健康对照各90例，采用ELISA法检测血清中MTHFR活性。结果： 白癜风患者血清中MTHFR活性为(332.77±92.85)U/L,显著低于对照组的(403.66±96.56)U/L，(P<0.0001)。静止期、进展期及快速进展期患者血清中MTHFR活性呈逐级降低趋势。MTHFR活性在患者性别、家族史、病程等方面无显著差异。结论： 白癜风患者血清中MTHFR活性降低可能与白癜风疾病发展相关。

白癜风； 亚甲基四氢叶酸还原酶； 活性

白癜风是一种常见的获得性色素脱失性疾病，临床表现为皮肤黏膜白斑，病理表现为表皮、黏膜或其他组织内黑素细胞的减少或消失[1]。亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)是催化叶酸代谢及甲硫氨酸代谢通路的关键分子，是分子量为70～77 KD的黄素蛋白，具有结合FAD、NAD(P)H、CH2-H2的N端催化结构域及Ado Met的C端调节区。大量文献提示MTHFR及其代谢通路异常与白癜风发病密切相关。并且我们前期研究发现[2]，MTHFR是白癜风的易感基因之一，其rs1801133是白癜风的易感位点，该位点TT基因型与CT及CC型相比具有明显降低白癜风易感性的作用。然而MTHFR活性与白癜风临床特征之间的关系并不明确。因此从白癜风易感基因MTHFR出发，分析其活性与白癜风临床特征之间的相关性，有可能丰富该疾病发病的机制，并进一步为白癜风的治疗提供新的思路。

1 研究对象及方法

1.1 研究对象 已经临床确诊的白癜风患者为研究对象，选择性别年龄匹配的正常人为对照。所有病例样本来自第四军医大学西京医院皮肤科，正常对照来自西京医院同期的队列研究基地。对患者病情登记内容主要包括一般情况、个人疾病史、家族史、生活习惯、主要环境危险因素暴露史、临床资料包括临床分型、分类等，参照全国中西医皮肤性病学会色素病学组制定的白癜风临床分型及疗效标准(2003年修订稿)。疾病分期依据国外文献报道[3]及本科临床经验，在本文中将白癜风患者分为快速进展期、进展期、稳定期三类。其中，3个月内新发白斑或白斑面积扩大大于10%的患者定义为快速进展期，6个月内新发白斑或白斑面积扩大小于10%的患者定义为进展期；6个月内白斑无明显变化定义为稳定期。

1.2 实验方法 留取白癜风患者及正常对照全血，在4℃条件下，于2000 g离心15 min收集血清。通过酶联免疫法(ELISA)检测MTHFR在白癜风患者及正常对照血清中的活性。

1.3 统计学方法 采用SAS软件进行统计分析。描述性统计分析，定性指标以百分率或构成比描述；定量指标以均数±标准差表示。两组对比分析，定性资料采用卡方检验，fisher精确概率法，Wilcoxon秩和检验。定量资料符合正态分布用单因素方差分析方法(组间进行方差齐性检验，以0.05作为检验水准，方差不齐时选用Satterthwaite方法进行校正的t检验)，不符合正态分布的用Wilcoxon秩和检验。假设检验统一使用双侧检验，给出检验统计量及其对应的P值，以P<0.05作为有显著统计学意义。

2 结果

2.1 患者临床特征概况 对白癜风患者临床特征按照性别、病程、家族史、疾病活动性、皮损面积、疾病分型这五个方面进行分类。本研究包含90例白癜风患者及性别年龄相匹配的90名健康对照。在病例组中包含52.2%的男及47.8%的女。患者病程为(60.15±84.64)个月。有白癜风家族史患者占病例组人数的17.8%。病例组包含14.4%的稳定期患者，70.0%进展期患者及15.6%快速进展期患者。有56.7%的患者白斑面积<1%，23.3%的患者白斑面积1%～5%，13.3%的患者白斑面积5%～50%，6.7%的患者白斑面积>50%。30%的患者为局限型，3.3%的患者为肢端型，64.5%的患者为散发型，2.2%的患者为泛发型。具体分类结果见表1。

2.2 血清中MTHFR活性与白癜风临床特征相关性分析 使用ELISA法检测白癜风患者及正常对照血清中MTHFR活性后联合患者临床特征进行分析。结果显示，白癜风患者血清中MTHFR活性明显低于正常对照组。(332.77±92.85 vs. 403.66±96.56 U/L;P<0.0001)(图1)。

MTHFR活性与白癜风活动性分析结果显示，白癜风患者血清中MTHFR活性随着疾病活动性增强表达降低，其活性分别为稳定期(375.65±61.14)U/L，进展期(330.98±96.09)U/L，快速进展期(301.02±92.70)U/L。稳定期患者MTHFR酶活性与对照组相比无显著差异(P=0.3128)，进展期及快速进展期患者MTHFR酶活性与对照组相比具有差异显著(P<0.0001,P=0.0003)(图2)。

表1 临床样本概况 例(%)

MTHFR活性与白癜风皮损面积相关性分析结果显示，皮损面积处于<1%、1%～5%、5%～50%、>50%范围的患者MTHFR活性分别为(343.73±91.73)U/L，(292.16±81.87)U/L，(356.63±112.24)U/L，(334.05±72.59)U/L。皮损面积在5%范围内，随着皮损面积的增加，MTHFR活性降低，当皮损面积>5%，随着皮损面积的增加，MTHFR活性升高。皮损面积<1%、1%～5%的患者血清中MTHFR活性与对照组相比具有显著差异(P=0.0004，P<0.0001)，皮损面积5%～50%、>50%的患者血清中MTHFR活性与对照组相比无显著差异(P=0.123,P=0.087)(图3)。

图1 白癜风患者组及对照组MTHFR活性差异(***P<0.001) 图2 MTHFR活性与白癜风活动性分析(***P<0.001)

图3 MTHFR活性与白癜风皮损面积相关性分析(***P<0.001)

MTHFR活性与白癜风临床分型相关性分析显示，局限型、肢端型、散发型、泛发型患者血清中MTHFR活性分别为(334.23±94.61)U/L，(377.74±89.79)U/L，(326.58±92.58)U/L，(308.58±121.86)U/L。局限型及散发型患者MTHFR活性显著低于对照组(P=0.003，P<0.0001)，肢端型及泛发型患者MTHFR活性与对照组相比无显著差异(P=0.4665，P=0.1732)(图4)。

图4 MTHFR活性与白癜风临床分型相关性分析 (**P<0.01,***P<0.001)

进一步分析结果显示，不同性别的白癜风患者的MTHFR活性无显著差异(P=0.7147)。不同家族史的白癜风患者MTHFR活性无显著差异(P=0.9022)。不同病程的患者MTHFR活性无显著差异(P=0.572，r=0.060)。

3 讨论

MTHFR活性与白癜风临床特征相关性分析结果表明，MTHFR在白癜风患者血清中呈低活性，与性别、家族史、病程无关，与疾病进展程度、皮损面积及临床分型相关。其中，静止期、进展期及快速进展期患者血清中MTHFR活性呈逐级降低趋势。进展期及快速进展期患者，皮损面积<5%的患者，局限型及散发型患者血清中MTHFR活性显著低于正常对照组，以上分析结果提示MTHFR在白癜风疾病的发生发展中起到重要作用。

MTHFR可参与叶酸代谢及甲硫氨酸代谢循环，是两条代谢通路中的关键调控单元。一方面MTHFR可催化5,10-亚甲基四氢叶酸(5,10-MTHF)转变为5-甲基四氢叶酸(5-MTHF)，促进机体内叶酸发挥功能；另一方面MTHFR的催化产物5-MTHF在甲硫氨酸合成酶及其辅酶维生素B12的催化下提供一个甲基给同型半胱氨酸(Hcy)使之转化成为甲硫氨酸，从而维持体内甲硫氨酸水平并减少Hcy的堆积。研究表明叶酸作为MTHFR代谢通路的底物在白癜风的治疗中可起到较好的疗效。方春红等研究了表皮移植联合叶酸及腺苷钴胺治疗白癜风的疗效，结果显示，叶酸及腺苷钴胺用于表皮移植术，可使皮损部位复色时间提前并克服了色素生长欠均匀的缺陷[4]。此外，Montes等[5]研究发现，给予白癜风患者叶酸及维生素B12治疗，有一定的辅助治疗效果。而与之相对应MTHFR代谢通路中间产物的堆积则与白癜风发病密切相关。Shaker等研究发现与正常对照相比白癜风患者血清中及白斑皮损部位同型半胱氨酸(Hcy)水平显著增高[6-9]，表明白癜风患者中MTHFR可能存在障碍从而导致底物利用不足以及中间产物堆积最终造成疾病的发生。因此，合理升高MTHFR活性，可在一定程度上抑制白癜风疾病的发展，为治疗白癜风这一顽固性疾病提供新思路。

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(收稿：2016-09-07 修回：2016-10-26)

Correlation between serum MTHFR activity and clinical features of the patients with vitiligo

CHENJiaxi,YIXiuli,LIChunying,GAOTianwen.

Departmentofdermatology,XijingHospital,Fourthmilitarymedicaluniversity,Xi'an710032,ChinaCorrespondingauthor:GAOTianwen,E-mail:gaotw@fmmu.edu.cn

Objective:To determine the correlation between the serum methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) activity and clinical features of the patients with vitiligo. Methods: The MTHFR activity was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in 90 patients with vitiligo and 90 controls with matched age and sex. Results: The mean level of MTHFR was 332.77±92.85 U/L in vitiligo, which was lower than that in controls (403.66±96.56 U/L), (P<0.0001). The level of MTHFR activity in stable vitiligo, progressive vitiligo and rapid progressive vitiligo was decreased in a descending manner. There was no significant difference of MTHFR activity in sex, family history and duration of the disease. Conclusion: Reduction of MTHFR activity may be associated with the development of vitiligo.

vitiligo; MTHFR; activity

西京医院助推项目(编号：XJZT15M15)

第四军医大学西京皮肤医院，西安，710032

高天文，E-mail: gaotw@fmmu.edu.cn