硒缺乏对雏鸡空肠黏膜中SOD活性和MDA含量的影响

梁建斌 ， 杨颗粒 ， 张义爽 ， 徐丹丹 ， 孙志鹏 ， 曲艳鹏 ， 武 瑞

(黑龙江八一农垦大学动物科技学院 ， 黑龙江大庆163319)

硒缺乏对雏鸡空肠黏膜中SOD活性和MDA含量的影响

梁建斌 ， 杨颗粒 ， 张义爽 ， 徐丹丹 ， 孙志鹏 ， 曲艳鹏 ， 武 瑞

(黑龙江八一农垦大学动物科技学院 ， 黑龙江大庆163319)

将40只1日龄雏鸡随机分为两组(n=20)，对照组，饲料硒含量为0.40 mg/kg，试验组，饲料硒含量为0.01 mg/kg。分别与试验的第7天、21天、35天处死雏鸡并取空肠黏膜(各时间点均为6只),测定其中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果表明，与对照组相比，第7天试验组空肠黏膜中SOD活性显著低于对照组(P<0.05)，MDA含量无明显变化。第21天试验组空肠黏膜中SOD活性极显著高于对照组(P<0.01)，MDA含量显著高于对照组(P<0.05)。第35天试验组空肠黏膜中SOD活性极显著低于对照组(P<0.01)，MDA含量极显著高于对照组(P<0.01)。这表明，硒缺乏会降低雏鸡空肠黏膜中SOD的活性和提高MDA的含量。

雏鸡 ； 空肠黏膜 ； 硒缺乏 ； 超氧化物歧化酶 ； 丙二醛

硒(Selenium)，于1817年首次发现，初期硒被认为是有毒元素，在1957年首次发现硒具有生物学作用，直到1996年，在首届微量元素研讨会上，硒被认可为生物体必需的微量元素。在1988年，中国营养学会将硒列为人体必需的微量元素[1-2]。硒的生物学作用之一就是维持机体氧化还原状态的平衡[3]。硒能抑制膜脂质过氧化反应,从而起消除有害自由基,分解过氧化物和修复分子损伤的作用。硒缺乏会造成各组织的损伤。心功能不全、运动障碍，长期消化紊乱和严重腹泻是畜禽硒缺乏的主要临床体征。病初,动物的生长发育受阻,生产性能和繁殖力下降。随着病情的发展,可造成畜禽死亡。动物硒缺乏时,谷胱甘肽过氧化物酶活性降低,使各组织器官的生物膜遭受过氧化物的损害,从而引发细胞凋亡或细胞的变性坏死,消化系统的各部分也不例外,致使胃肠道平滑肌变性,胰腺发育不全、变性、分泌功能减弱,肝实质营养不良、坏死,功能不全[4]。超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内重要的抗氧化酶，是生物体内清除自由基的首要物质，SOD在生物体内活性的高低，直观反映出机体对氧自由基清除的能力。丙二醛(MDA)是不饱和脂肪酸受到自由基攻击而被氧化所产生的脂类过氧化物的主要分解产物，会引起蛋白质和核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性。测定MDA的含量可以反映机体内脂质过氧化的程度，间接反映出细胞或膜系统受损的程度[5]。本试验测定硒缺乏状态下的雏鸡空肠黏膜中SOD活性和MDA含量的变化，为进一步探讨硒缺乏对空肠黏膜脂质过氧化的影响提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 1日龄健康SPF艾维茵白羽肉用雏鸡40只，雌雄各半，购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心。

1.2 药品与试剂 试验组饲料(自配，硒缺乏玉米，购自黑龙江省龙江县)，对照组饲料，购自黑龙江省大庆禾丰有限公司。SOD活性检测试剂盒(NBT法)，产品编号S0109，脂质氧化(MDA)检测试剂盒，产品编号S0131，购自碧云天生物技术公司。

1.3 仪器 KHB ST-360免疫检测酶标仪(上海科华生物工程股份有限公司)。

1.4 分组与处理 雏鸡采用单因素完全随机分为两组，每组20只，Ι组为试验组，饲喂自配的硒缺乏饲料，饲料中硒含量为0.01 mg/kg。Ⅱ组为对照组，饲喂正常饲料，饲料中硒含量为0.40 mg/kg。饲喂采用自由饮水与采食。

1.5 样品采集与处理 分别于试验的第7天、21天、35天每组随机选取6只雏鸡剖杀，用灭菌后预冷的PBS洗净肠管，无菌采取空肠黏膜，于液氮中冻存过夜，保存于-80 ℃备用。

1.6 SOD活性检测 将冻存的肠黏膜样品按照说明书要求进行匀浆及后续步骤，最后用酶标仪按照说明书要求进行检测。

1.7 MDA含量检测 将冻存的肠黏膜样品按照说明书要求进行匀浆及后续步骤，最后用酶标仪按照说明书要求进行检测。

2 结果

2.1 空肠黏膜中SOD活性的变化 在试验第7天，对照组雏鸡空肠黏膜中超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于试验组(P<0.05)，在第21天，对照组雏鸡空肠黏膜中SOD活性极显著高于试验组(P<0.01)，在第35天，对照组雏鸡空肠黏膜中SOD活性极显著高于试验组(P<0.01)。见表1。

表1 不同日龄空肠黏膜中SOD活性 n=6.(nmol/mg)

注：同列比较，小写字母表示差异显著(P<0.05)，大写字母表示差异极显著(P<0.01)，下表同

2.2 空肠黏膜中MDA含量的变化 在试验第7天，对照组雏鸡空肠黏膜中丙二醛(MDA)含量与试验组无显著差异。在试验第21天，试验组雏鸡空肠黏膜中MDA含量显著性低于对照组(P<0.05)。在试验第35天，试验组雏鸡空肠黏膜中MDA含量极显著性低于对照组(P<0.01).详见表2。

表2 不同日龄空肠黏膜中MDA含量 n=6.(nmol/mg)

3 讨论

动物机体在正常的情况下，会不断产生氧自由基，同时这些氧自由基又会不断的在机体的抗氧化防御体系下被清除，使动物机体内的氧自由基的生产和清除时刻处于平衡状态，任何增强氧化作用和减弱抗氧化能力的因素，都会破坏这一平衡，导致动物机体内氧自由基的增多[6]。机体内的氧自由基增多，会使生物膜中的多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，生成MDA、羟基、氢过氧基或内过氧基等，使细胞膜受到破坏，导致细胞损伤，膜通透性增加，出现蛋白质以及DNA的变性[7]。SOD广泛存在于动物机体之中，是生物体内防御氧化损伤的一类生物酶，能将超氧阴离子自由基歧化为过氧化氢和氧气，起到消除超氧阴离子自由基的作用，因此具有增强机体抗辐射损伤的能力、抗衰老、增强机体对外界环境的适应能力、减轻肿瘤患者在治疗过程中出现的严重毒副作用等[8]。MDA为脂类过氧化的最终产物之一，可以反映出脂类的过氧化程度，间接反映体内自由基变化的程度[9]。硒的生物学作用之一就是与SOD等抗氧化酶清除机体内的脂质过氧化物，共同维持生物膜系统的完整性。大量的研究表明，硒缺乏会影响动物机体的抗氧化能力。张世珍在1997年进行硒与动物自由基内在关系的研究，其以小鼠为试验动物，试验结果显示，硒缺乏可导致小鼠肝脏自由基代谢紊乱，表现出脂质过氧化产物及相关组织内的自由基水平升高，自由基代谢紊乱状态随着硒缺乏状态的延续而加剧[10]。仝宗喜以雏鸡为试验动物，对硒缺乏症的分子机理进行研究，研究结果表明，硒缺乏可以导致雏鸡组织器官中总氧化能力(T-AOC)下降，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性降低，MDA含量升高，使机体处于氧化应激状态，使免疫细胞的膜系统受到损伤，免疫细胞结构和功能受到损害，造成机体免疫功能下降[11]。刘风民在2004年以寿隐杂交鸡，在日粮中添加有机硒和维生素E可明显降低肝脏、肾脏以及血清中MDA的含量，提高GSH-Px活性，增强机体的抗氧化能力，提高了试验鸡对热应激的抗性[12]。

本试验发现，试验组雏鸡空肠黏膜中SOD活性在试验第7天出现显著性降低，说明此时试验组雏鸡空肠黏膜的抗氧化能力已经显著性低于对照组雏鸡。随着雏鸡日龄的增加，在试验第21天，第35天，试验组雏鸡空肠黏膜中SOD活性呈现极显著性低于对照组雏鸡，且试验组雏鸡空肠黏膜中SOD活性呈现逐渐减弱的趋势，说明硒缺乏对雏鸡空肠黏膜中SOD活性的影响是随时间的延长而累积的。本试验中，试验组雏鸡空肠黏膜中MDA含量在第7天与对照组相比，未出现显著性变化，在试验第21天，试验组雏鸡空肠黏膜中MDA含量显著性高于对照组，在第35天试验组雏鸡空肠黏膜中MDA含量极显著性高于对照组。SOD活性及MDA含量在硒缺乏雏鸡空肠黏膜中的变化均与前人对硒与抗氧化的关系的研究结果一致。综上所述，本试验结果表明，硒缺乏会降低雏鸡空肠黏膜中SOD活性，使组织的抗氧化能力降低，组织中脂质过氧化反应加剧，继而使组织中MDA含量增高。

[1] Schwarz K.Biological potency of organic selenium compounds.I.Aliphatic monoseleno and diselenodicarboxylic acids[J].J Biol Chem，1969，244(8):2103-2110.

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[3] Brigelius-Flohé R,Flohé L.Is there a role of glutathione peroxidases in signaling and differentiation [J].Biofaetors,2003,17:93-102.

[4] 林玉才．硒缺乏对雏鸡肠道黏膜免疫影响的研究[D].大庆：黑龙江八一农垦大学,2010:4-5.

[5] 王艳萍，祁克宗，涂键，等．内毒素对仔鸡血浆SOD活性及MDA水平的影响[J].动物医学进展，2006,27(5)：63-65.

[6] Grisham M B，Granger D N，Lefer D J.Modulation of leukocyte-endothelial interactions by reactive metabolites of oxygen and nitrogen:relevance to ischemic heart disease [J].Free Radic Biol Med,1998,25(4-5):404-433.

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[10] 张世珍．硒与动物自由基代谢内在关系的试验研究[J].中国兽医科技，1997,27(4):31-33.

[11] 仝宗喜．鸡硒缺乏症分子机理的研究[D].哈尔滨：东北农业大学，2004.

[12] 刘风民．有机硒和维生素E对地方杂交鸡抗氧化和抗热应激性能的影响[D].泰安：山东农业大学，2004.

Effects of SOD Activities and MDA Level about Selenium Deficiency in jejunum tunica mucosa of Chickens

LIANG Jian-bin ， YANG Ke-li ， ZHANG Yi-shuang ， XU Dan-dan ， SUN Zhi-peng ， QU Yan-peng ， WU Rui

(College Of Animal Science And Veterinary Medicine ， Heilongjiang Bayi Agricultural University ，Daqing 163319 ， China)

A total of forty 1-day-old chicks were randomly divided into two groups(n=20):the control group，fed with selenium content of 0.40mg / kg，and the experimental group，fed with selenium content of 0.01mg / kg.Six chickens were slaughtered in 7d,21d and 35d.The activity of SOD and the content of MDA in jejunum tunica mucosa were analyzed.The results demonstrated as follows:Compared with the control group，the experimental group at 7 day in ejunum tunica mucosa the SOD activity was significantly lower than the control group(P<0.05)，and the MDA was no significant change for the two groups.At 21 day,the SOD activity of the test group in ejunum tunica mucosa was significantly lower than that of the control group(P<0.01),and the MDA levels were significantly higher than that of the control group(P<0.01).At 35 day the test group jejunal mucosal SOD activity was significantly lower than that of the control group(P<0.01)，and the MDA content was significantly higher than that of the control group(P<0.01).Our finding suggest that the selenium deficiency can significantly reduce the activity of SOD，and increase the content of MDA in jejunum tunica mucosa of chickens.

chicken ejunum tunica mucosa ; Selenium Deficiency ; Superxide dismutase(SOD); Malondialdehyde(MDA) Corresponding author:WU Rui

2015-11-05

国家自然科学基金(2041340004)

梁建斌(1990- )，男，硕士，从事临床兽医学研究，E-mail：564738394@qq.com

武瑞，E-mail：fuhewu@126.com

S858.31

A

0529-6005(2017)03-0029-03