热敏灸对过敏性鼻炎大鼠血清IgE、IL-4含量的影响*

陈盼碧，宣 锦，史林威，李俊君，程 聪，康弸泽，林子钰，杨孝芳

热敏灸对过敏性鼻炎大鼠血清IgE、IL-4含量的影响*

陈盼碧，宣 锦，史林威，李俊君，程 聪，康弸泽，林子钰，杨孝芳

（贵阳中医学院针灸推拿学院，贵州 贵阳 550002）

目的 探讨热敏灸对过敏性鼻炎大鼠血清中IgE、IL-4含量的影响。方法 Wistar雄性大鼠50只，随机分为5组：正常组、模型组、盐酸西替利嗪组、艾灸组和热敏灸组，每组10只。采用卵白蛋白全身致敏与局部攻击相结合的方法复制过敏性鼻炎大鼠模型，观察各组间症状积分的差异，采用ELISA法定量检测各组大鼠血清IgE、IL-4的含量。结果 模型组的症状积分与正常组比较差异有统计学意义（P＜0.05），各治疗组症状积分明显低于模型组（P＜0.05)，盐酸西替利嗪组、热敏灸组及艾灸组间比较，盐酸西替利嗪组与热敏灸组比较差异无统计学意义（P＞0.05），盐酸西替利嗪组、热敏灸组优于艾灸组（P＜0.05）；模型组血清中IgE、IL-4的含量明显升高，与正常组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；热敏灸组血清中IgE、IL-4含量明显降低，与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 热敏灸可降低过敏性鼻炎大鼠血清中IgE、IL-4含量，减轻鼻黏膜变应性炎症。

热敏灸；过敏性鼻炎；IgE；IL-4

过敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是特异性个体接触过敏原后，由免疫球蛋白E（Immunoglobulin E，IgE）介导的发生在鼻黏膜的I型变态反应性疾病，多种炎症介质、细胞因子参与AR的发病过程[1]，临床上以鼻塞、鼻痒、喷嚏、流清涕为主要症状。研究表明，在美国每年用于此病的相关费用约为63～79亿美元，而全球平均发病率为10%～25%[2]，西方国家的发病率一般约为10%～20%[3]，而在中国发病率竟高达37.74%[4]。目前多采用西药治疗AR，虽然在改善症状方面取得一定疗效，但不良反应明显且不能从根本上治疗AR[5]。因此寻找疗效确切，不良反应少的治疗方法已成为治疗AR的关键。针灸对AR的防治由来已久，方法多样，各具特色，且疗效肯定，副反应少。热敏灸属悬灸的一种，是江西省中医院灸疗医院成功推广的一种新型灸疗方法，它根据穴位在疾病状态下的敏化特性，对热敏化腧穴施以饱和灸量，从而能大幅度提高艾灸疗效，使灸效达到最大化。研究表明，艾灸热敏化穴可以调节和维持体内神经、内分泌、免疫平衡，增强机体抗病能力[6]。临床上AR等难以处理的疾病，采用热敏灸治疗时会有意想不到的疗效[7]。那么，热敏灸治疗AR的机制是什么呢？是否是通过增强机体的免疫功能减少IgE的合成，从而降低白细胞介素4（Interleukin，IL-4）的含量达到治疗目的？本研究旨在通过热敏灸治疗后，检测AR大鼠血清IgE、IL-4含量的变化，进一步研究热敏灸治疗疾病的作用机制，也为临床更好地推广运用热敏灸提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

清洁级Wistar健康成年雄性大鼠50只，体重200～250 g，由贵阳中医学院实验动物研究中心提供。标准颗粒饲料饲养，自由饮水，饲养温度20～25℃，相对湿度50%～70%，适应性喂养2周，然后随机分为正常组（10只）、模型组（10只）、盐酸西替利嗪组（10只）、治疗组（20只）；根据“肺俞”“肾俞”“风池”“迎香”穴是否被热敏化将治疗组自动分为艾灸组（未热敏化）和热敏灸组（热敏化）。

1.2 主要药品及试剂

盐酸西替利嗪胶片（产品批号：B1420004693，珠海安生凤凰制药有限公司），卵白蛋白（GradeⅡ，美国 Sigma公司），氢氧化铝（批号：20000307，贵阳市化学试剂厂），生理盐水、特制精艾绒艾条（规格：直径22 mm×长度120 mm，江西省中医院生产，材料为二级精艾绒），清艾条、IgE ELISA试剂盒（上海博士德生物有限公司），IL-4 ELISA试剂盒（上海博士德生物有限公司）。

1.3 主要实验仪器

Olymplus显微镜（日本Olymplus光学仪器有限公司），AR2140型电子分析天平（美国奥豪斯有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 过敏性鼻炎大鼠模型复制 参照文献[8]OVA 10 mg+A1（OH）3粉末30 mg+生理盐水1 ml制成混悬液，除正常组外其余各组大鼠行腹腔内注射，隔日1次，共7次，作为基础致敏。第15天进行加强免疫，给予5%OVA 50μl滴鼻/（侧·日）和1%OVA喷雾吸入5 min，连续7 d。正常组大鼠予等量生理盐水代替进行腹腔注射、滴鼻及喷雾吸入刺激，方法同上。

1.4.2 穴位热敏化标准 用固定夹将大鼠固定后，选取治疗组大鼠“肺俞”“肾俞”“风池”“迎香”穴，定位取穴按照参考文献[9]进行。用艾条悬于“肺俞”“肾俞”“风池”“迎香”穴上约2 mm处先回旋灸2 min预热局部皮肤，再固定于“肺俞”“肾俞”“风池”“迎香”穴施行温和灸。艾灸“肺俞”“肾俞”“风池”“迎香”穴10 min后，对大鼠进行红外热像检测，红外热成像产生沿穴位纵向扩散或横向扩散的红外辐射增强区域（温度升高0.5℃以上）长径≥3 cm被视为腧穴的热敏化阳性[10]。

1.4.3 治疗方法 造模成功后，开始介入治疗。热敏灸组：取大鼠双侧“肺俞”“肾俞”“风池”“迎香”穴，选用特制精艾绒艾条，距穴位2 cm左右温和灸大鼠，40 min/次，1次/d，共14 d。艾灸组：施灸方法同热敏灸组，艾条选用清艾条。盐酸西替利嗪组：盐酸西替利嗪溶液，盐酸西替利嗪人的常用剂量是10 mg/d，换算成大鼠的用药剂量为每日每鼠0.18 mg。将西药配成0.18 mg/ml的溶液。1 ml/（只·d），灌胃治疗，1次/d，共14 d。模型组：给予生理盐水1 ml/（只·d），灌胃治疗，1次/d，共14 d。空白对照组：不作处理，正常饲养。

1.4.4 鼻部症状评分 最后1次滴鼻后30 min，观察动物的鼻痒、喷嚏、清涕的轻重程度并逐项评分，逐项评分用叠加法计算总分[11]。鼻痒：轻擦鼻1、2次为1分，擦鼻多次为2分，抓挠鼻、面不止，到处擦磨为3分；喷嚏：1～5个为1分，5～10个为2分，11个以上为3分；流涕：留至鼻孔处为1分，过鼻孔为2分，流涕满面为3分。行为学总分超过5分即为造模成功。

1.4.5 大鼠血清IgE、IL-4检测 末次治疗结束后将所有大鼠乙醚麻醉，股动脉取血并处死。采血5ml，室温自然凝固10～20 min，3 000 r/min离心10 min，收集上清液，置入-20℃冰箱冷冻保存待检。大鼠血清IgE、IL-4采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测。

1.4.6 鼻黏膜取材及形态学观察 取血后的大鼠，将之断头，分离上、下颌，取出鼻中隔黏膜，固定于10%的甲醛溶液中，石蜡包埋、切片，片厚约3μm，HE染色，光镜下观察鼻黏膜形态学变化。

1.5 统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较用t检验；多组间比较，方差齐者用单因素方差分析，组间用LSD-t检验；方差不齐者用Tamhane’sT2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠鼻部症状积分

模型组大鼠的鼻部症状积分＞5分（5.52±0.51），高于正常组（0.90±0.35），差异有统计学意义（P＜0.05），表明模型成功；经盐酸西替利嗪（2.53±0.37）、热敏灸（2.88±0.40）及艾灸（3.67±0.50）干预后，各组大鼠症状积分均低于模型组（5.52±0.51），差异有统计学意义（P＜0.05）；热敏灸组与盐酸西替利嗪组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；艾灸组与热敏灸组、盐酸西替利嗪组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 各组大鼠鼻黏膜组织的病理形态学变化

各组大鼠鼻黏膜HE染色后光镜下观察发现，正常组大鼠鼻黏膜组织结构完整，无充血、水肿；模型组大鼠鼻黏膜明显充血、水肿，有大量炎症细胞浸润，鼻黏膜表面纤毛破坏严重，腺体增生明显。经治疗后，盐酸西替利嗪组鼻黏膜轻度充血、水肿，少量炎症细胞浸润，鼻黏膜表面纤毛破坏轻；热敏灸组鼻黏膜无明显水肿，仅局部见轻度充血，有少量炎症细胞浸润，腺体增生轻，艾灸组大鼠鼻黏膜明显充血、水肿，并且大量炎症细胞浸润，腺体增生明显。见附图。

2.3 各组大鼠血清IgE、IL-4含量变化

附图 各组大鼠鼻黏膜组织病理形态学变化 （×200）

各组干预前大鼠血清IgE含量比较，差异无统计学意义。与本组造模前比较，模型组干预前后大鼠血清IgE、IL-4含量均升高（P＜0.05）。与本组干预前比较，各治疗组干预后大鼠血清IgE、IL-4含量均降低（P＜0.05）。与正常组比较，模型组干预前后大鼠血清IgE、IL-4含量升高（P＜0.05）；经治疗后大鼠血清IgE、IL-4含量均降低。各组大鼠血清IgE含量与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05），3个治疗组中尤以盐酸西替利嗪组降低最为明显，与热敏灸组比较差异有统计学意义（P＜0.05），与艾灸组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；大鼠血清IL-4含量，盐酸西替利嗪组、热敏灸组与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05），艾灸组与模型组间差异有统计学意义（P＜0.05），3个治疗组中尤以盐酸西替利嗪组降低最为明显，与热敏组比较差异有统计学意义（P＜0.05），与艾灸组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1、2。

表1 各组大鼠血清IgE含量变化 （n=10，μg/ml，x±s）

表2 各组大鼠血清IL-4含量变化 （n=10，pg/ml，x±s）

3 讨论

IgE在AR发病机制中的作用已成定论：变应原进入机体后，被抗原呈递细胞吞噬并激活B淋巴细胞，导致变应原特异性IgE的产生，IgE附着于肥大细胞和嗜酸性粒细胞表面，当再次接触变应原后，IgE与受体结合交联，激活肥大细胞、EOS释放组胺和白三烯等炎症递质，进而刺激鼻黏膜引发鼻痒、喷嚏、流涕等症状[12]。IL-4主要是由抗原或丝裂原刺激的CD4+T细胞产生，活化的肥大细胞亦可产生IL-4[13]。目前比较明确的是：IL-4是一个Ig类转换因子，为B细胞提供了活化信号，使B细胞由产生IgM转换成产生IgE抗体，促进IgE的产生[14]。因此，IL-4为IgE的正性调节因子，是AR患者血清中IgE合成过多的原因，而研究表明[15]表明IL-4、IgE均参与AR的免疫发病机制，所以降低IL-4含量，减少IgE合成是防治AR的重要途径之一[16]。

研究表明[10]，艾灸可通过调节机体免疫功能来改善肺通气功能，尤其适用于变态反应性疾病等。热敏灸疗法通过对热敏化腧穴施以饱和灸量后能使灸效达到最大化。因此本实验以OVA致敏和激发复制AR大鼠模型，选取“迎香”“风池”“肺俞”“肾俞”[17]穴位进行热敏灸等治疗，观察AR大鼠鼻部症状积分、鼻黏膜病理组织学变化及检测大鼠血清中IgE、IL-4含量变化。

李佳峰[18]、赵秀杰等[11]根据实验动物的行为学表现建立了一套完整的评分系统，即喷嚏、抓鼻、鼻涕行为学表现量化，以叠加法记录总分，行为学总分超过5分为造模成功。该方法在一定程度上简化AR模型的评判过程，客观上也能反映AR模型建立情况。从本实验大鼠鼻部症状积分看，模型组鼻部症状积分＞5分，表明模型成功。而灸法及盐酸西替利嗪均可减轻AR的发病症状，盐酸西替利嗪组、热敏灸组及艾灸组大鼠鼻部症状积分均＜5分，与模型组比较差异有统计学意义，从盐酸西替利嗪组大鼠鼻部症状积分看，热敏灸组2种干预方法疗效相当，艾灸组与热敏灸组、盐酸西替利嗪组比较，差异有统计学意义，盐酸西替利嗪和热敏灸对减轻AR的发病症状比艾灸效果更为显著。从AR大鼠鼻黏膜组织病理形态学看，盐酸西替利嗪、热敏灸干预后的效果也好于艾灸治疗，均能够抑制组织形态学改变，明显减轻大鼠鼻黏膜充血、水肿症状，减少炎症细胞浸润及腺体增生，而艾灸后大鼠鼻黏膜还可见明显充血、水肿，并且大量炎症细胞浸润，腺体增生明显。从大鼠血清中的IgE、IL-4含量看，模型组较正常组升高，说明IgE、IL-4在AR发病机制中扮演着重要角色，这也与已发表的相关文献研究一致[12-16]。经过盐酸西替利嗪、热敏灸及艾灸治疗干预后，可以使异常升高的IL-4下降，从而使IgE的合成明显下降，3组大鼠血清IgE含量与模型组比较差异有统计学意义，盐酸西替利嗪组、热敏灸组与模型组大鼠血清IL-4含量比较，差异有统计学意义，艾灸组与模型组间差异有统计学意义。比较3种干预手段，盐酸西替利嗪降低IgE、IL-4含量的效果最好，血清IgE含量与热敏灸组比较差异有统计学意义，与艾灸组比较差异有统计学意义；血清IL-4含量与热敏组比较差异有统计学意义；与艾灸组比较差异有统计学意义。

综合分析实验结果，对于AR的治疗效果，盐酸西替利嗪组是最好的，热敏灸组总体疗效虽然不如盐酸西替利嗪组，但从AR大鼠的鼻部症状积分降低情况及鼻黏膜组织病变的控制效果来看均与盐酸西替利嗪组相似，从总体治疗效果看，较艾灸组更好。

综上所述，热敏灸治疗AR大鼠的机制可能是通过降低IL-4的含量，从而降低IgE的水平达到治疗目的。从AR大鼠发病症状等的改善效果看，热敏灸明显优于艾灸，虽然热敏灸总体疗效较盐酸西替利嗪稍差，但可避免因长期药物治疗引起的一系列不良反应，因此治疗意义仍非常重大。临床上热敏灸作为一种操作简单、安全有效、绿色经济的治疗方法，值得更好地研究发展与推广。

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（张西倩 编辑）

Effects of heat-sensitive moxibustion on serum IgE and IL-4 content in rat with allergic rhinitis*

Pan-bi Chen,Jin Xuan,Lin-wei Shi,Jun-jun Li,Cong Cheng, Peng-ze Kang,Zi-yu Lin,Xiao-fang Yang
(College of Acupuncture and Massage,Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang,Guizhou 550002,China)

Objective To explore the effect of heat-sensitive moxibustion on serum IgE and IL-4 levels in rats with allergic rhinitis.Methods Fifty Wistar male rats were randomly divided into 5 groups with 10 rats in each group,i.e.normal group,model group,Cetirizine group,moxibustion group and heat-sensitive moxibustion group. The rat model of allergic rhinitis was established by egg-albumin systemic sensitization combined with local attacks. The symptoms in different groups were observed and the scores were calculated.The serum IgE and IL-4 levels were determined by ELISA.Results Compared with the normal group the symptom scores of the model group were significantly high(P＜0.05).The symptom scores of the treatment groups were significantly lower than those of the model group(P＜0.05).There were no significant differences in the symptom scores between the heat-sensitive moxibustion group and the Cetirizine group(P＞0.05).The Cetirizine group and the heat-sensitive moxibustion group were better than the moxibustion group(P＜0.05).Compared with the normal group,the levels of IgE and IL-4 in the model group were significantly increased (P＜0.05);however,the heat-sensitive moxibustion evidently decreased the levels of IgE and IL-4(P＜0.05).Conclusions Heat-sensitive moxibustion can reduce the serum content of IgE and IL-4 in AR rat,and reduce allergic inflammation of nasal mucosa.

heat-sensitive moxibustion;allergic rhinitis;IgE;interleukin-4

R-332

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.04.004

1005-8982（2017）04-0017-05

2016-06-13

2014年地方高校国家级大学生创新创业训练计划项目[No：201410662002；贵中医大学创合字（2014）02]；2014年贵阳中医学院院内科研基金项目[No：贵中医科院内（2014）63]；贵州省普通高等学校中医络病学基础研究与临床新技术开发创新人才团队[No：黔教合人才团队字（2014）63]

杨孝芳，E-mail：363110152@qq.com；Tel：13984096366