辽宁省猪弓形虫血清抗体检测与分析

杨 娜，邢蒙恩，王大为，李红魁，李德臣，吴元华*

(1.沈阳农业大学，辽宁沈阳 110866；2.辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁沈阳 110164；3.本溪市动物疫病预防控制中心，辽宁本溪 117000)



辽宁省猪弓形虫血清抗体检测与分析

杨 娜1，邢蒙恩1，王大为1，李红魁2，李德臣3，吴元华1*

(1.沈阳农业大学，辽宁沈阳 110866；2.辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁沈阳 110164；3.本溪市动物疫病预防控制中心，辽宁本溪 117000)

弓形虫病是一种呈世界性流行的人兽共患寄生虫病，可在人和动物中相互传播，全球约有50%的人感染，不仅给畜牧业生产带来严重危害和重大经济损失，而且对食品安全构成巨大威胁。采用改良凝集试验(MAT)定性检测从辽宁省沈阳、辽阳、大连等14市采集的共计2 152份血清，结果共有368份阳性血清，总阳性率为17.1%(368/2 152)，辽阳市和本溪市阳性率最高和最低，分别为26.3%和6.12%；其中繁殖母猪为33.9%，普遍高于育肥猪的13.4%；成年猪为20.9%，普遍高于仔猪的7.59%。结果表明，辽宁省14市猪均有不同程度的弓形虫感染，且各市感染率有差异。

弓形虫；猪；血清抗体；检测

弓形虫病(Toxoplasmosis) 是由刚地弓形虫(Toxoplasmagondii) 感染引起的一种重要的人兽共患寄生虫病， 对孕妇和免疫力低下的人造成严重危害[1-2]。已经确定弓形虫的终末宿主是猫，所有的恒温动物都是其中间宿主。食用被猫粪便中卵囊污染的食物或者饮水会引起中间宿主的感染，食用含弓形虫包囊的生肉或者未煮熟的肉类也会引起感染。弓形虫病会给人类的健康和畜牧业发展带来很大危害[3-5]。因此，本试验采用改良凝集试验(MAT)对采集辽宁省14市的猪血清样品进行检测，得到其相应的弓形虫感染率，并结合饲养管理水平和地理环境、气候等因素分析其感染原因，为动物弓形虫病的防控提供一定的理论依据，同时也对降低人类感染弓形虫的风险具有一定意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 MAT检测试剂和器械 弓形虫全虫抗原(货号EH2001)，美国Kera FAST公司产品;96孔U型板，北京华康同创生物技术有限公司产品。

1.1.2 待检血清 从辽宁省各市采集猪血清样本2 152份，其中沈阳市1 036份，辽阳市76份，丹东市102份，葫芦岛市56份，锦州市266份，盘锦市95份，阜新市50份，铁岭市85份，抚顺市40份，鞍山市82份，大连市120份，本溪市49份，营口市25份，朝阳市70份。2 000 r/min离心10 min分离血清，置-20℃保存备用。

1.2 方法

①血清稀释液38 μL/孔，待检血清2 μL/孔，充分混匀，并设置阴性对照和阳性对照。②第1孔加入血清稀释液48 μL，第2～8孔分别加入血清稀释液25 μL，吸取待检血清2 μL至第1孔，充分混匀后吸出25 μL加到第2孔并混匀，依次加到第8孔，效价为1∶25～1∶3 200[6]。③吸取抗原稀释液2.5 mL、 β巯基乙醇35 μL、台盼蓝50 μL和抗原液150 μL， 充分混匀后立即加到96孔U型板中，25 μL/孔，再吸取稀释好的血清25 μL加到对应的孔中，轻轻吹打混匀。④用封口膜封好96孔U型板，37℃过夜。⑤镜下观察，若底部透明，则为阳性；若底部出现蓝色沉淀，则为阴性[7]。

2 结果

2.1 各市猪血清抗体阳性率检测结果

辽宁省采集的2 152份猪血清总阳性率为17.1%(368/2 152)，其中辽阳市阳性率最高为26.3%，本溪市阳性率最低为6.12%(表1)。

2.2 繁殖母猪与育肥猪血清抗体阳性率检测结果

繁殖母猪检测阳性率为33.9%(131/386)，育肥猪阳性率为13.4%(237/1 766)；其中育肥猪阳性率最高的出现在抚顺市为21.9%，本溪市最低为0.23%；朝阳市繁殖母猪阳性率最高为58.3%，锦州市最低为15.3%(表2)。

表1 辽宁省各市猪弓形虫血清总体阳性率

2.3 仔猪与成年猪血清抗体阳性率检测结果

仔猪阳性率为7.59%(47/619)，成年猪阳性率为20.9%(321/1 533)；其中仔猪阳性率最高，出现在抚顺市为22.2%，葫芦岛、阜新、鞍山、本溪、营口则未检出仔猪抗体阳性；辽阳市成年猪阳性率最高(31.4%)，本溪市最低(7.69%)(表3)。

3 讨论

3.1 繁殖母猪与育肥猪的比较

检测结果显示，辽宁省内各市感染率差异明显，其中朝阳繁殖母猪感染率最高，锦州感染率最低；抚顺育肥猪感染率最高，本溪感染率仅为0.23%，且各市繁殖母猪感染率都明显高于育肥猪。

与育肥猪相比，繁殖母猪饲养周期更长，导致其与弓形虫卵囊的接触几率增加。气候原因也会产生影响，辽宁省内各市气温不同，若气温偏低，气候干燥，则不利于弓形虫的发育，其感染率也随之降低。放养猪接触野猫或卵囊的几率要远高于圈养猪，其感染率也相对较高。另外，若场区周边有流浪猫等流窜动物频繁活动，则该养殖场的感染率会明显高于其他场。同时，猪舍内的环境卫生，日常消毒工作、饲料存放环境等，都可能是影响其感染的原因[8]。

表2 辽宁省育肥猪和繁殖母猪弓形虫血清抗体检测结果

表3 辽宁省仔猪和成年猪血清抗体检测结果

3.2 成年猪与仔猪的比较

检测结果显示，辽阳成年猪感染率最高(31.4%)，本溪最低(7.69%)；抚顺仔猪感染率最高(22.2%)，而本溪、葫芦岛、鞍山等地仔猪均未检出阳性。且各市成年猪感染率都明显高于仔猪，其中葫芦岛市差异最大，铁岭市相差最小；饲养周期和饲养环境是影响其感染率的重要原因。此外，仔猪到成年猪的成长过程中要多次换圈可能也是影响感染率的一个原因。

3.3 辽宁省各市间的比较

检测结果显示辽宁省各市猪弓形虫感染率有明显的差别，辽阳市感染率最高(26.3%)，本溪市感染率最低(6.12%)。另外，本试验测得的辽宁省猪弓形虫感染率与崔平等[9]所报道的河北省猪平均感染率35.69%相比较，要明显低于其平均值；同时低于徐斌等[10]报道的重庆地区对猪血清检测的阳性率71.85%。但是却远高于董永森[11]所报道的青海省猪弓形虫感染率6.64%。综合本试验中辽宁省各市猪弓形虫感染率的高低，可推测影响弓形虫感染率的因素中，气候因素是极其重要的。青海省和辽宁省都属于气温偏低、空气干燥的气候特点，显然不利于弓形虫的发育和传播，其弓形虫感染率也就远低于气候适宜弓形虫发育的河北、重庆等地。当然也可能与检测方法有关，崔平和徐斌等采用的是间接血凝试验(IHA)，而本研究采用的是改良凝集试验(MAT)，已有学者报道在检测血清弓形虫阳性抗体时，MAT的敏感性要高于IHA，但由于MAT成本高，操作复杂，应用受到一定限制[12]。

本研究对辽宁省14市猪弓形虫感染的调查结果提示，猪感染弓形虫情况十分严重，特别是繁殖母猪，弓形虫病已对养猪业构成了严重的威胁，这不仅造成了巨大的经济损失，还可能进一步威胁到人类的健康，应引起广大市民和相关部门的高度重视，加强对弓形虫病的防控。

[1] 张居作,陈汉忠,徐君飞.我国弓形虫的感染现状[J].动物医学进展,2008,29(7):101-104.

[2] 刘 侠,阚松鹤,林 青.弓形虫病研究进展[J].动物医学进展,2015,36(1):101-105.

[3] 刘建枝,陈裕祥,夏晨阳,等.弓形虫病危害性及其诊断与防治研究进展[J].西藏科技,2010(11):52-55.

[4] 王大为,韩小虎,慕名扬,等.中国东北地区部分动物弓形虫病的流行病学调查[J].黑龙江畜牧兽医,2014(23):129-131.

[5] 张焰峰,马超锋,孙何云,等.猪弓形虫病的危害及综合防制[J].山东畜牧兽医,2013(4):37-38.

[6] 王贝贝,刘 帅,崔丽丽,等.改良凝集试验(MAT)检测动物弓形虫血清抗体[J].中国兽医杂志,2012,48(6):25-27.

[7] 王凤阳.弓形虫改良凝集试验的建立及我国部分地区犬、鸡弓形虫病流行病学调查[D].吉林长春:吉林农业大学,2012.

[8] Wang M,Meng P,Ye Q,et al.Detection ofToxoplasmagondiioocysts in soils in Northwestern China using a new semi-nested PCR assay[J].BMC Vet Res,2014,10:238.

[9] 崔 平,方素芳,武治云,等.河北省家畜弓形虫病的流行病学调查[J].中国兽医科技,2004(11)35-36.

[10] 徐 斌.重庆地区猪弓形虫病流行病学调查研究[J].动物医学进展,2013,34(3):37-40.

[11] 董永森.青海省猪弓形虫病血清流行病学调查[J].黑龙江畜牧兽医,2010(12):83.

[12] Gerald W,Esch.Toxoplasmosis of animals and humans[J].J Parasitol,2010,96(5):940.

Detection and Analysis ofToxoplasmagondiiAntibody from Pig Sera in Liaoning Province

YANG Na1，XING Meng-en1，WANG Da-wei1，LI Hong-kui2，LI De-chen3，WU Yuan-hua1

(1.ShenyangAgriculturalUniversity，Shenyang,Liaoning,110866，China；2.LiaoningCenterforAnimalDiseaseControlandPrevention，Shenyang,Liaoning,110164，China；3.BenxiCenterforAnimalDiseaseControlandPrevention，Benxi,Liaoning,117000，China)

Toxoplasmosis is a popular worldwide zoonotic parasitic disease.It is reported that about half of the world's population infected withT.gondiiand the disease can spread between human and animals.This disease brings serious harm and great economic losses not only for human and animals as well as livestock production,but also for a great threaten to food safety.2 152 serum samples collected from Shenyang,Liaoyang,Dalian and other 14 cities in Liaoning province were detected by modified agglutination test (MAT),and results showed that 368 serum samples are positive.Total positive rate is 17.1% (368/2 152),the highest rate is 26.3% in Liaoyang,and the lowest rate is 6.12% in Benxi.The positive rate of breeding sows is 33.9%,which is higher than 13.4% of fattening pigs.The positive rate of adult pigs(20.9%) is higher than that of piglets(7.59%).The results showed that all the 14 cities have positive sera againstToxoplasmagondiiand the positive rates are different in different cities of Liaoning province.

Toxoplasmagondii;pig;serum antibody;detection

2016-07-06

国家自然科学基金青年基金项目(31201894)；中国博士后科学基金面上项目(2014M561252)

杨 娜(1981-)，女，山东烟台人，博士，主要从事弓形虫病研究。

S852.729

B

1007-5038(2017)04-0125-04

*通讯作者