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猪毛滴虫病病原及诊治的研究进展

2017-04-10吴胜会张世忠福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013

福建畜牧兽医 2017年2期
关键词:猪毛滴虫病毛滴虫

江 斌 吴胜会 林 琳 张世忠 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 福州 350013

猪毛滴虫病病原及诊治的研究进展

江 斌 吴胜会 林 琳 张世忠 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 福州 350013

猪毛滴虫病的历史较短,关于该病的研究和病例报道也较少。近年来,随着该病导致保育猪腹泻病例日益增多,猪毛滴虫病对养猪业的危害日益显现。本文就该病的病原、危害性、致病机理、流行病学、临床症状、病理变化、诊断以及防治作一综述,旨在为猪毛滴虫病的研究和防控提供参考。

猪毛滴虫病病原诊治进展

猪毛滴虫病(Trichomoniasis)是由原生动物门、肉足鞭毛亚门、鞭毛虫总纲、动物鞭毛虫纲、毛滴虫目、毛滴虫科、毛滴虫属中某些毛滴虫感染猪导致的一类原虫性疾病的总称[1]。目前,已报道的猪毛滴虫有3种,分别是猪三毛滴虫(T.suis)、巴特里毛滴虫(T.nutteryi)和圆形毛滴虫(T.rotirnda)[2],但研究和病例报道主要集中在猪三毛滴虫,该病原可导致仔猪出现肠炎腹泻、母猪出现阴道炎等病症,其中导致仔猪出现肠炎腹泻病例有越来越多的迹象。因此,重视并加强对三毛滴虫的研究和防控具有重要意义。

1 病原

目前,已报道的猪毛滴虫有3种,分别是猪三毛滴虫、巴特里毛滴虫和圆形毛滴虫,它们之间的形态结构差异较大,见表1。此外,单振民等从一例猪病呼吸道内分离出1株毛滴虫并命名为德安八里毛滴虫,后证实也属于猪三毛滴虫[3]。

1.1 猪三毛滴虫虫体呈纺锤形或梨形,当虫体运动快速时多呈纺锤形,当虫体运动缓慢时多呈梨形,虫体伸缩性强,易改变形态以穿过障碍物。虫体长度为9~16μm,宽度为2~6μm,虫体前段有3根等长的前鞭毛,长度为7~17μm,在虫体一侧可见波动膜纵贯虫体全身,并形成4~6个近似相等的折叠,波动膜宽度约1.6μm,波动膜的波动模式从轻微的波动到大的起伏变化。虫体中央有1根纵行的透明轴柱,轴柱的头端呈棒状,直径为1.71μm,后面逐渐狭小并形成圆锥状,平均直径为0.6μm,轴柱末端突出虫体的后端,形成短尖状,长度为0.6~1.7μm。细胞核1个,呈长椭圆形,大小为(2~5)μm×(1~3)μm,位于虫体前1/3处。在吉姆萨染色标本中,可见胞浆呈淡紫色,胞核呈深蓝色。胞核排列与轴柱平行,胞核内还包含6~8个大小相近的染色质颗粒和1个核仁。副基体1个,位于核的背侧或右侧,长度为2~5μm,呈细长管状结构或呈“J”形结构。猪三毛滴虫常寄生于猪的鼻道、胃、盲肠、结肠,偶见于小肠和母猪阴道[2-3]。由于猪三毛滴虫的形态结构及其它生物学特征与寄生于母牛生殖道中的胎儿三毛滴虫(T.foetus)非常相似,不少专家学者认为这两者之间应该是同物异名[4]。

1.2 巴特里毛滴虫巴特里毛滴虫形态比较小,呈圆形或椭圆形,体长4~7μm,体宽2~5μm,运动速度快,非定向,常做圆圈运动,形态易变。虫体前端有3~4根不等长的前鞭毛,其中1根很短,另2~3根较长(约为体长的2倍),3根起源于同一基体,而另一根则由另一基体出发。在虫体的另一端有1根后鞭毛,与主体细胞形成明显的波动膜,其末端游离于体外。波动膜有3~5个波浪。在虫体中央有1根轴柱,长度为虫体的2/3,轴柱头端呈匙状,较狭窄,末端突出体外3~6μm。细胞核呈椭圆形,大小为(2~3)μm×(1~2)μm,位于虫体前部,与轴柱平行。副基体为圆盘形结构,直径为0.3~1.1μm,位于细胞核的外侧,颜色较深。主要寄生于猪的盲肠、结肠,偶见于小肠[2-3]。

1.3 圆形毛滴虫圆形毛滴虫的形态通常呈梨形,偶见卵圆形或椭圆形,体长7~11μm,体宽5~7μm,虫体运动较缓慢,且形态不易改变。虫体前段有3根近于等长的前鞭毛,长度为10~17μm,每根鞭毛都起源于同一基体,在虫体另一端有1根后鞭毛,与主体细胞在一侧形成波动膜,后鞭毛较短。在虫体一侧可见波动膜,呈平滑或波样曲卷,其长度是体长的1/ 2或2/3,有1根较长的轴柱,头端呈月牙形或镰刀形,整个轴柱狭长而平直,不透明,末端突出长度为0.6~6.3μm。细胞核较大,近球形,位于虫体前端的中央或背侧。副基体由2个分支组成,在基底部连接形成“V”字形,大小为(2.3~3.4)μm×(0.4~1.3)μm。主要寄生于猪的盲肠和结肠[2-3]。

2 危害性和致病机理

2.1 危害性到目前为止,已报道的猪毛滴虫对猪场的危害性集中体现在三个方面:第一,猪毛滴虫导致仔猪下痢。早在1993年,日本学者北野良夫等首先报道了猪三毛滴虫导致仔猪下痢的病例报道[5]。2007年,吴胜会等在国内首次证实了由猪三毛滴虫导致小猪腹泻[6]。近年来,由猪三毛滴虫导致仔猪腹泻的病例呈现逐渐增多的趋势,据吴胜会等调查[7],在所调查的426例猪腹泻病例中,由猪三毛滴虫感染导致的占10.6%,其中保育猪感染率高达18.9%。第二,猪三毛滴虫导致母猪阴道炎。由于猪三毛滴虫的形态结构以及其它生物学特性与寄生在母牛生殖道内的胎儿三毛滴虫非常相似,不少专家学者认为两者应该是同物异名。胎儿三毛滴虫会导致母牛不孕和流产,在世界范围内对养牛业影响较大,目前已被世界动物卫生组织(OIE)列为B类疾病[4]。目前猪三毛滴虫感染母猪导致母猪出现阴道炎、屡配不孕的病例时有发生,如1999年张全成等报道5例母猪毛滴虫病的诊断和防治[8];2005年商常发等也发表了类似的病例报道[9]。第三,猪毛滴虫的隐性感染。据调查,猪只鼻腔、上呼吸道内毛滴虫检出率极高,有的学者认为猪三毛滴虫可能参与了猪萎缩性鼻炎的致病过程,但是目前猪萎缩性鼻炎的病因已查明,表明呼吸道内检出的毛滴虫只是隐性带虫[3]。此外,有些学者在健康猪的胃、大肠、小肠内均检出猪三毛滴虫,表明毛滴虫在猪群的消化道和呼吸道内隐性带虫现象十分普遍,这些隐性带虫猪在饲养管理不良时,有可能进一步发展为猪毛滴虫病。

2.2 致病机理毛滴虫的生活史比较简单,通常以二分裂繁殖为主,有时也可见多分裂法繁殖,这种情况可见于急性病例的肠道内或培养虫体的培养基中[10]。滋养体既是本虫的繁殖阶段,也是感染阶段,在不利环境条件下,毛滴虫的滋养体会变圆,鞭毛内化,形成一个球形结构的伪包囊。最近研究表明,伪包囊是虫体对应激做出的一种反应,与滋养体之间的变化是可逆的[11]。当环境适合毛滴虫生长时,毛滴虫滋养体会以二分裂或多分裂大量繁殖,毛滴虫的生存温度为25~42℃,其中最适宜的生存和繁殖温度为32~35℃,适宜在略酸或略碱环境中生长繁殖,在厌氧条件下生长和繁殖较好。业已证明,毛滴虫对宿主靶器官的黏膜上皮细胞具有黏附和毒性破坏作用,包括分泌各种水解酶类,改变或破坏局部靶器官的酶系统[12],导致靶器官(如盲肠或结肠)出现卡他性炎症,易导致大肠杆菌病或沙门氏菌病等疾病的继发感染。

表1 三种猪毛滴虫形态结构鉴别表

3 流行病学

毛滴虫的来源目前还不十分明确,据观察在以山泉水或井水作为水源的猪场,猪群中毛滴虫病的发病率比较高,可能与这些猪场水源中存在毛滴虫有关,这一观点有待进一步证实。经调查,猪毛滴虫在猪场的隐性感染率比较高[2]。Hammond D M等对美国西部猪群调查发现,约56.3%(36/64)调查猪鼻腔、10.2%(33/329)调查猪胃、73%(314/431)调查猪盲肠中均有毛滴虫寄生。Jensen E A等调查14头猪的盲肠内容物,100%有毛滴虫感染,其中12头有感染猪三毛滴虫,7头有感染巴特里毛滴虫,4头有感染圆形毛滴虫。PakamdlM等检查842头家猪和91头野猪,发现除哺乳仔猪外,其它阶段猪均有三毛滴虫感染。SolaymaniM S等对伊朗西部的12头野猪进行调查,猪三毛滴虫感染率达25%。吴胜会等对426例猪腹泻病例进行调查,结果表明有45例猪腹泻病例是由猪三毛滴虫引起的,比例占10.3%。其中保育猪的病例最高,占18.9%(34/179);其次为中大猪,占6.5%(4/62);而哺乳仔猪最低,占3.8%(7/ 185)。而且绝大多数病例(97.7%)出现在饲养条件较差的中小型猪场。由此可见,该病的传染源很可能是水源,在健康或亚健康猪群中毛滴虫的隐性感染率较高,毛滴虫病的发病率高低与饲养管理条件以及猪日龄关系较大。

4 临床症状和病理变化

猪毛滴虫病的发现历史较短,从目前研究和病例报道来看主要集中在2个病症,即仔猪腹泻和母猪阴道炎。此外,也有病例报道毛滴虫可导致猪出现呼吸道症状,但这一现象尚未得到进一步证实。

4.1 仔猪腹泻病症据北野良夫、吴胜会等的病例介绍,猪三毛滴虫病多发生于饲养管理水平相对较差的中小型猪场,发病率可达74.46%,死亡率可达27.6%。主要表现为患猪出现排水样稀粪,消瘦,眼球凹陷,全身脱水,精神萎靡,被毛粗乱,肛门口皮肤因顽固性腹泻导致红肿。急性病例一般2~3 d即出现脱水死亡,慢性病例可持续10 d以上,最后因腹泻衰竭死亡。剖检病死猪可见结肠和盲肠肿大明显,切开大肠壁,内容物充满空气和黄绿色液体,大肠壁出现卡他性肠炎,胃内容物空虚,小肠出现轻度卡他性肠炎,肠淋巴结肿大,其它脏器病变不明显。在这些病例中,结肠和盲肠肿大明显,内容物充满空气和黄绿色液体的病变均有特征性,在临床诊断上具有重要参考意义。

4.2 母猪阴道炎病症据张全成、商常发等的病例介绍,该病例主要感染母猪,其中有些母猪是配种后7~49 d(自然本交)后发病,有些则是妊娠后45 d或屡配不孕的母猪出现病症。主要表现母猪精神不安,体温升高,排尿次数增多,阴户红肿,每天可见从阴道内排出带有豆腐渣样絮状物的尿液或分泌物,阴道黏膜粗糙,被覆有大小不同、数量不等的小结节,有些母猪阴道内出现弥漫性白色絮状物,气味恶臭,结果导致这些母猪屡配不孕。通过公猪的本交可导致不同母猪间交叉感染。

5 诊断

鉴于该病在猪场中的隐性带虫情况比较多,在临床上除了在保育猪腹泻病例中检查到结肠和盲肠肿大明显、内容物充满空气和黄绿色液体具有特征性病变外,其它病症无明显的特征性。因此,借助实验室方法检查虫体是目前最主要的诊断方法。

5.1 直接镜检采集活猪或病死猪相关内容物(如粪便、盲肠、结肠、胃、鼻腔、阴道分泌物等)以及相应器官的黏膜刮取物少许放在载玻片上,滴加1~2滴生理盐水,盖上盖玻片直接镜检。先在中倍镜(10× 10)下观察,找到梭形或梨形会游动的虫体后,再转到高倍镜(40×10)进一步观测虫体形态结构。1~3 h后待虫体游动变缓慢时,在盖玻片上滴加镜油,转到油镜(100×10)进一步观察虫体的形态结构。猪三毛滴虫的前端有3根前鞭毛,虫体一侧有波动膜,后端有1根后鞭毛,虫体大小为(9~16)μm×(2~6)μm。必要时还可涂片,选用碘液染色、吉姆萨染色、苏木素染色后镜检。在吉姆萨染色标本中,原生质呈蓝色,胞核呈红色,轴柱色浅透明,鞭毛为黑色或深蓝色,毛基体呈红色。

5.2 体外培养目前,用于培养毛滴虫的培养基有肝浸液和蛋黄浸液两种培养基[10]。此外,据报道Diamend设计的TY1-S-33培养基也有较好的培养效果[2],单振民等采用鸡蛋白柠檬酸钠培养基(2.32%柠檬酸钠水溶液20 mL,加等量鸡蛋白,充分摇荡混匀后,以5 mL管分装备用)也有很好的培养效果[3]。培养毛滴虫的温度控制在37~38℃,培养时间为48~72 h,若要继代需培养3~4 d后再移种。

5.3 分子生物学检测为了弥补镜检方法的不足,近年来,用基于毛滴虫5.8s rRNA、ITS等序列设计的PCR或RAPD等分子生物学方法鉴别毛滴虫种已取得一定进展[2],这为未来不同种类毛滴虫的鉴别诊断提供了一种新方法。

6 防治

6.1 预防预防措施应从源头上减少毛滴虫的污染以及加强饲养管理入手。首先,要加强水源管理,对猪场的水源(特别是山泉水和井水)采用过滤处理或漂白粉消毒处理,减少或杀灭饮水中的毛滴虫、真正做到预防病从口入,才能有效地防范猪毛滴虫病的发生。第二。要加强猪场的饲养管理,做好猪舍环境卫生,特别是注重食槽的卫生,做到及时清理食槽的残余剩料。做好猪舍的保温和通风干燥工作,防止因温差大或湿度大诱发毛滴虫病的发生。猪场内的水塔和蓄水池要经常消毒和清理,防止病原菌滋生。此外,对繁殖母猪要实施人工授精,杜绝自然交配,防范母猪毛滴虫性阴道炎。必要时可在饲料中添加一些中西药进行预防。

6.2 治疗长期以来,甲硝唑一直是用于治疗毛滴虫的首选药物,使用剂量为每千克饲料添加300~500mg,连用3~5 d。但鉴于甲硝唑存在致畸和致癌作用以及容易产生耐药性问题,目前已禁止所有食品动物使用甲硝唑用于促生长,只允许用作治疗使用,且在肉品中不能检出[13]。2011年李文超等采用替硝唑、甲硝唑、硝唑尼特、制霉菌素等4种药物对猪三毛滴虫进行体外药敏试验[14],结果4种药物均具有不同程度抑制或杀灭猪三毛滴虫的效果,其中以硝唑尼特杀灭效果较好,24 h MIC为12.50mg/L,替硝唑和甲硝唑24 h MIC均为25.0 mg/L,其中替硝唑杀虫曲线优于甲硝唑,制霉菌素的杀虫效果较差。该试验选用的药品均为人用药,目前我国兽药典批准使用的抗毛滴虫药物有甲硝唑和地美硝唑(替硝唑衍生物),地美硝唑的使用剂量为每千克饲料添加300~400mg,连用3~5 d。2012年,李赫等采用白头翁提取物对猪三毛滴虫进行体外抑虫试验[15],结果表明,白头翁水浸膏和乙酸乙酯成分对猪三毛滴虫有较强的抑制作用。在生产实践中,可以考虑采用地美硝唑、甲硝唑以及中药白头翁等药物来治疗猪毛滴虫病。

7 展望

猪毛滴虫病的发现历史较短,关于猪毛滴虫病相关研究和病例报道也都比较少。近年来,随着猪毛滴虫病导致保育猪腹泻病例日益增多,该病对养猪业的危害也日益显现。应加强对猪毛滴虫病的深入研究,搞清楚该病的传染源、动物感染谱、病原结构、致病机理、免疫特性、传播途径、生物学诊断、防治措施以及兽医公共卫生等问题,这对防控猪毛滴虫病乃至动物毛滴虫病都具有重要意义。

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(本刊编辑部)

The pathogeny of sw ine trichom oniasis and the research progress of the diagnosis and treatm ent

Jiang Bin Wu Shenghui Lin Lin Zhang Shizhong
(Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,Fujian Academy of Agricultural Sciences,Fuzhou 350013)

The history of swine trichomoniasis is relatively short,the studies and case reports about this disease is also less.In recent years,along with the increasing of the disease caused diarrhea cases in nursery pigs,the harm of the trichomoniasis to the swine industry becomes increasingly apparent.In this article,the pathogeny,harm fulness,pathogenesis,epidemiology,clinical symptoms, pathological changes,diagnosis and treatment of this disease were reviewed,in order to provide reference to the research and the prevention and control of swine trichomoniasis.

Swine Trichomoniasis Pathogeny Diagnosis and treatment Progress

A

1003-4331(2017)02-0021-04

福建省科技计划项目-省属公益类科研院所科研专项(2015R1023-6、2016R 1022-7);福建省重大科技研发平台(2014N 2003-6)资助。

江斌(1964-),男,高级兽医师。主要从事临床兽医与畜禽寄生虫病研究,E-mail:jiangbin83429588@163.com。

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