液质联用检测白酒中的微量甜蜜素

王凤芹　伊芳　汪秀月

摘要 采用液质联用建立了分析白酒中微量甜蜜素的方法，以0.1%甲酸和甲醇（80∶20）为流动相，样品用水直接稀释2倍测定，采用多反应方式（MRM）进行检测。最低检出限为2 ng/mL，最低定量限为10 ng/mL，在10～1 000 ng/mL时相关系数为0.999 9，平均回收率为102.9%～106.6%，最大相对标准偏差为2.5%。采用2种类型白酒做加标回收，重复性良好，且能在3 min内完成一次进样分析，该方法简单快捷，结果可靠，可用于白酒中微量甜蜜素的檢测。

关键词 液质联用；白酒；甜蜜素

中图分类号 TS202.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）04-0246-02

Abstract A method for trance sodium cyclamate in liquor was established by HPLC-MS/MS.The solvent system was composed of water with 0.1% methane acid and methanol by 80∶20.Samples diluted 2 times with water were detected by multiple reaction monitoring mode（MRM）.The minimum detection limit was 2 ng/mL and the minimum quantification limit was 10 ng/mL.The correlation coefficient was higher than 0.999 9 from 10 ng/mL to 1 000 ng/mL，and the average recoveries were range from 102.9% to 106.6%.Maximum relative standard deviation was 2.5%.Using two types liquor for doing standard addition recoveries showed good reproducibility and finished a sample analysis within 3 min.The method is simple，quick and reliable，and can be used for analysis of trance sodium cyclamate in types of liquor.

Key words UPLC-MS/MS；liquor；sodium cyclamate

甜蜜素是一种人工合成甜味剂，具有高效的甜味特性。不法商家为改善酒的口味，欺骗消费者，存在违法添加的可能[1-3]。打击违法添加，保障酒的饮用安全是监管部门的职责。因此，建立一种快捷、可靠的检测甜蜜素的方法很有必要[4-5]。现在参照执行的检测方法是《进出口食品中环己基氨基磺酸钠的检测方法液相色谱-质谱/质谱法》（SN/T 1948—2007）[6]，蒸馏白酒中甜蜜素的测定并没有相应的国标检测方法。因此，本试验探究白酒中微量甜蜜素的检测方法，以期为白酒中微量甜蜜素检测国标方法的建立提供参考。甜蜜素检测运用比较多的是气相色谱法，但检出限偏高，容易出现假阳性[7-9]。而液质联用方法以其准确、检测限低的特点正在白酒中微量甜蜜素的检测中发挥重要作用[10-12]。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备

1260型超高液相色谱/6460三重四级杆质谱联用仪（美国Agilent公司），液相色谱仪配备Agilent G4226A自动进样器，Agilent G1316C柱温箱，Agilent G4220B泵，质谱仪配备电喷雾离子源（ESI，美国Agilent公司），数据处理采用Agilent MassHunter工作站进行，分析天平（型号：AL204/01，美国梅特勒-托利多公司）。

1.2 材料与试剂

酒样：50种成品白酒，市售。甜蜜素标准品GBW（E）100173样品编号为15090173，标准值10.00 mg/mL，相对扩展不确定度为1%；甲醇（色谱级，DIKMA公司），甲酸（色谱级，aladdin公司），蒸馏水（屈臣氏公司）。

1.3 试验方法

1.3.1 贮备液。用移液枪精密移取100 μL标准品于10 mL容量瓶中，蒸馏水定容，配制出为100 μg/mL的贮备液。

1.3.2 标准使用溶液。用移液枪精密移取1 mL贮备液于10 mL容量瓶中，蒸馏水稀释定容制成10 μg/mL的中间标准工作液。精密吸取10、25、50 μL的中间标准工作液于50 mL容量瓶中，制成2、5、10 ng/mL的标准工作溶液，精密吸取50、200、400、500 μL贮备液于50 mL容量瓶中，制成100、400、800、1 000 ng/mL的标准工作溶液，过0.45 μm滤膜，滤液待机分析。

1.3.3 色谱条件。色谱柱：ZORBAX SB-C18（21 mm×50 mm，1.8 μm），柱温30 ℃，进样量5 μL，流动相：A为0.1%（v/v）甲酸，B为甲醇，两者比例为80∶20，流速0.2 mL/min。

1.3.4 质谱条件。离子源：ESI负离子模式，雾化器压力45 psi，干燥器温度350 ℃，干燥气流速5 L/min，鞘气流温度350 ℃，鞘气流流速11 L/min，毛细管电压4 500 V，最优裂解电压130 V，最优碰撞能30 V，多重反应监测（MRM），母离子178.1，子离子79.8，分析时长3 min，载气为氮气发生器制取的氮气，碰撞气为高纯氮。

1.3.5 样品的处理方法。用分析天平准确称取1 mL均匀白酒于10 mL塑料离心管内，加1 mL水，盖塞混匀，倒进一次性注射器内过0.45 μm滤膜（水相），滤液待机分析。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

本试验采用甲醇-0.1%（v/v）甲酸水体系作为流动相，体积比为20∶80时，甜蜜素响应值最高。流动相未引入铵盐，对质谱起到一定的保护[13]。

2.2 质谱条件的选择

选用400 ng/mL标准品溶液进行质谱条件的优化。首先在ESI负离子模式下进行全扫描（Scan），得到甜蜜素的一级质谱图，确认178.1为其母离子；其次运行选择离子监测模式（SIM）得到其最优裂解电压为130 V；最后运行子离子扫描模式（PIS）优化其碰撞能，并得到二级质谱图，最优碰撞能为30 V，定量子离子为79.8。再采用MRM方式监测178.1/79.8离子对，并根据优化数据调节质谱参数，进行定量分析。

2.3 样品处理条件的选择

将白酒样品直接稀释2倍，过0.45 μm滤膜（水相）过滤，直接上机分析，处理方法便捷[14-15]。

2.4 线性范围与检出限

配制浓度在2～1 000 ng/mL范围的系列标准溶液，按文中所述方法测定。当甜蜜素标准溶液浓度为2 ng/mL时，S/N为3.26>3；当为10 ng/mL时，S/N为11.92>10，故此方法甜蜜素检出限为2 ng/mL，定量限为10 ng/mL。甜蜜素在10～1 000 ng/mL有良好的线性关系，浓度点分别为10、100、400、800、1 000 ng/mL，标准曲线为y=11.054 2x+50.272 3，相关系数R2为0.999 9（图1）。

2.5 方法精密度与加标回收率

选用2种类型白酒作为加标样品（A和B），以验证其重复性，稀释2倍后作为加标基质（甜蜜素含量为0），每种均加标3个质量浓度，加标水平分别为100、400、800 ng/mL，采用上述建立的方法，每个添加水平重复测定6次，计算添加平均回收率和相对标准偏差，甜蜜素的平均回收率在102.9%～106.6%之间，相对标准偏差为0.2%～2.5%。方法精密度和加标回收率均符合残留分析的要求。2种类型的白酒重复性良好，结果见表1。

2.6 样品含量测定

运用本试验建立的方法，测定市售白酒50个，每个样品做2个平行，其中检出2个白酒甜蜜素有响应值，但样品260因S/N<3，未达到检出限，视为未检出，结果见表2，样品261测定图谱见图2。

3 结论

本试验使用超高压液相-质谱联用仪，以0.1%甲酸和甲醇为流动相建立的方法可以成功检测出白酒中的微量甜蜜素。该方法样品处理简单，只需将酒样稀释2倍[16]。最低检出限为2 ng/mL，最低定量限为10 ng/mL，在10～1 000 ng/mL时相关系數R2为0.999 9，平均回收率为102.9%～106.6%，最大相对标准偏差为2.5%（<5%）。方法精密度和加标回收率均符合残留分析的要求，且能在3 min内完成一次进样分析，方法快捷，结果可靠。该方法的建立可满足监管部门的大规模监督抽验任务，并能提供及时可靠的检测数据，以期为白酒中甜蜜素检测国家标准的建立提供参考。

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