肝癌高发家族成员血清IL-23水平变化

李慧，吴继周，吴健林，宁秋悦，胡蝶飞，刘若时

(广西医科大学第一附属医院，南宁530021)

·临床研究·

肝癌高发家族成员血清IL-23水平变化

李慧，吴继周，吴健林，宁秋悦，胡蝶飞，刘若时

(广西医科大学第一附属医院，南宁530021)

目的观察肝癌高发家族成员血清白细胞介素23(IL-23)水平变化，并探讨其临床意义。方法在广西肝癌高发区选取肝癌高发家族成员103例为观察组，以生活环境、性别、民族、HBV携带状况、年龄作为配对条件选取无癌家族成员103例为对照组。采用ELISA法检测两组受检者血清IL-23。结果观察组、对照组血清IL-23水平分别为3.980(2.350，9.504)、3.548(2.087，7.925)ng/mL，两组相比，P<0.05。观察组女性、HBsAg阳性、年龄≤25岁、壮族成员血清IL-23水平均高于对照组(P均<0.05)。观察组中先证者三级及以上亲属血清IL-23水平高于先证者一级亲属、二级亲属(P均<0.05)。观察组中家族有2～3个先证者、4个以上先证者血清IL-23水平相比，P>0.05。结论肝癌高发家族成员血清IL-23水平高于无癌家族成员。

白细胞介素23；肝细胞肝癌；家族聚集性

原发性肝细胞肝癌(简称肝癌)是全球最常见的恶性肿瘤之一，具有侵袭性强、病死率高、生存率低等特点。中国是肝癌大国，相关流行病学调查资料显示，中国肝癌高发地区主要为江苏、福建、浙江、山东、广西、广东等东南沿海一带[1～3]。前期本课题组前往广西少数民族居住地深入调查发现，在某些村子，同一个家族中可有数名成员罹患肝癌。肝癌发病呈现明显的家族聚集性。目前相关研究表明，肝脏免疫微环境的变化参与肿瘤的发生及发展过程。白细胞介素23(IL-23)是肝脏免疫微环境中的重要细胞因子。本研究观察了肝癌高发家族成员血清IL-23水平变化，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择103例肝癌高发家族成员为观察组，其中男61例、女42例。年龄2～78(27.1±10.4)岁，年龄≤25岁53例、>25岁50例。壮族74例、瑶族29例。HBsAg阳性25例、阴性78例。均来自广西肝癌高发地，未患肝癌，HCV抗体均为阴性。来自15个肝癌高发家族，每个家族中有两例或两例以上成员有肝癌病史。包含肝癌高发家族中先证者的一级亲属(父母、子女、兄弟姐妹)56例，二级亲属(叔伯、姑舅、姨、祖父母、外祖父母)16例，三级及以上亲属(表兄妹、堂兄妹等)31例；家族成员中有2～3个先证者46例，家族成员中有4个以上先证者57例。另根据生活环境相同、水源相同、性别相同、民族相同、HBV携带状况相同、年龄±5岁的配对原则纳入103例无癌家族成员为对照组。

1.2 血清IL-23检测方法 抽取两组受试者空腹外周静脉血3 mL于肝素钠抗凝管中。室温静置1 h后，3 000 r/min常温离心5 min分离血清，用移液枪抽取上清液20 mL置入EP管内进行分装、标序号，放入-80 ℃低温冰箱中保存待测。采用ELISA法检测血清IL-23，试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司，严格按照试剂盒说明书操作。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。先对各组血清IL-23数据行正态性检验，不符合正态分布的数据用中位数和四分位数[M(P25，P75)]表示。配对资料比较采用配对设计Wilcoxon秩和检验，非配对资料比较采用独立样本Mann-WhitneyU秩和检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

观察组、对照组血清IL-23水平分别为3.980(2.350，9.504)、3.548(2.087，7.925)ng/mL,两组相比，P<0.05。观察组、对照组男性成员血清IL-23水平分别为3.428(2.086，8.086)、3.919(2.391，8.374)ng/mL，两组男性成员血清IL-23水平相比，P>0.05。观察组、对照组女性成员血清IL-23水平分别为5.775(2.759，11.401)、3.110(1.865，6.383)ng/mL，两组女性成员血清IL-23水平相比，P<0.05。观察组、对照组HBsAg阳性成员血清IL-23水平分别为4.265(2.702,8.313)、3.251(2.481,6.202)ng/mL，两组HBsAg阳性成员血清IL-23水平相比，P<0.05。观察组、对照组HBsAg阴性成员血清IL-23水平分别为3.945(2.209,10.942)、3.712(1.903,8.681)ng/mL，两组HBsAg阴性成员血清IL-23水平相比，P>0.05。观察组、对照组年龄>25岁成员血清IL-23水平分别为3.372(2.130,9.181)、3.203(1.852,7.468)ng/mL，两组年龄>25岁成员血清IL-23水平相比，P>0.05。观察组、对照组年龄≤25岁成员血清IL-23水平分别为4.715(2.847,11.183)、4.118(2.491,8.374)ng/mL，两组年龄≤25岁成员血清IL-23水平相比，P<0.05。观察组、对照组壮族成员血清IL-23水平分别为4.403(2.185,9.563)、3.426(1.878,8.243)ng/mL，两组壮族成员血清IL-23水平相比，P<0.05。观察组、对照组瑶族成员血清IL-23水平分别为3.827(2.807,10.414)、4.118(2.447,7.028)ng/mL，两组瑶族成员血清IL-23水平相比，P>0.05。

观察组中先证者一级亲属、二级亲属、三级及以上亲属血清IL-23水平分别为3.980(2.350,9.504)、3.436(2.132,14.073)、6.896(3.315,13.510)ng/mL。观察组中先证者三级及以上亲属血清IL-23水平与先证者一级亲属、二级亲属相比，P均<0.05；先证者一级亲属血清IL-23水平与先证者二级亲属相比，P>0.05。

观察组中家族有2～3个先证者、4个以上先证者血清IL-23水平分别为3.642(2.353 ,6.757)、5.587(2.281，11.183)ng/mL，P>0.05。

3 讨论

Oppmann等[4]在搜索IL-6家族序列数据库时发现了一个类似于IL-12的p35亚基的新序列，并命名为p19。p19本身无活性，但与IL-12的p40亚基通过二硫键连接后可结合形成具有生物活性的异源二聚体，即IL-23。IL-23是IL-12家族中的一员，主要由活化的巨噬细胞、树突状细胞及单核细胞分泌。近年来多项研究发现IL-23在肿瘤免疫、炎症反应、感染及自身免疫性疾病过程中发挥生物学效应，尤其在肿瘤免疫微环境中是一种重要的中介和调节器。有研究表明IL-23在结直肠癌[5]、黑色素瘤[6]、乳腺癌[7]和纤维肉瘤[8]中起到了抑制肿瘤生长和转移的作用。但Langowski等[9]对人类不同类型肿瘤组织中IL-23 p19 mRNA的表达情况进行了全面检测，发现与正常组织相比，p19 mRNA在不同器官肿瘤组织样本中的表达量均显著上调，且其表达定位于肿瘤组织中，提示IL-23具有潜在的促肿瘤效应。Ghilardi等[10]在对IL-23 p19缺失及IL-23 p40-/-小鼠的研究中证明IL-23可通过抑制杀伤性T细胞浸润来促进肿瘤的发生。Jantschischi等[11]也发现暴露于紫外线下的IL-23 p19-/-的小鼠与野生小鼠相比，更易发生肿瘤。刘永浩等[12]报道IL-23能显著促进肝癌细胞的增殖，IL-23在体内外均能直接促进肝癌的发展。由此充分说明，IL-23具有促进肿瘤生长的效应，并且与肝细胞肝癌的发生、发展有着密切的关系，但其与肝癌家族聚集性是否存在一定的相关性，国内外均没有相关报道。

CD4+T细胞对肿瘤的免疫应答起着重要的辅助作用，可分为不同亚型，如Th1、Th2、Th17及调节性T细胞(Treg)；其中Th17/Treg失衡与肝癌的发生发展密切相关[13]，且Th17占比越高，肝癌的恶性程度也越大[14]。IL-17由Th17细胞分泌，且IL-17的升高与乙肝患者从慢性乙肝到肝纤维化的进展有关[15]。Langrish等[16]研究发现IL-23可通过与受体IL-23R结合来诱导T细胞分化为Th17细胞，继而分泌IL-17。郑慧丽等[17]证明只有当IL-23与启动因子TGF-β同时存在时才能进一步使CD4+T细胞分化为Th17细胞，并分泌IL-17。进一步说明了IL-23可通过增强和刺激Th17细胞分泌IL-17来促进肝癌的发生。本研究结果显示，肝癌高发家族组中未患肝癌成员的IL-23表达水平高于无癌家族组，提示处于肝癌高发家族无癌成员血清中IL-23水平已升高，据此推测在癌变发生前，肝癌高发家族成员的免疫状态发生了微弱变化，Th17与Treg的平衡被打破，增加了罹患肝癌的风险。分层比较中还发现IL-23表达水平升高者以女性、年龄≤25岁、壮族成员为主。这提示肝癌高发家族组中女性、年龄≤25岁、壮族成员血清中IL-23变化相对显著。壮族成员IL-23明显升高符合广西壮族人群肝癌发病率较高的研究结论[18]，不过也可能是由于本次研究中壮族成员样本量偏大所致，还需进一步研究。

HBV感染是促使肝癌发生的重要危险因素[19]。本研究结果显示，肝癌高发家族中HBsAg阳性成员血清IL-23的表达水平高于无癌家族，两组HBsAg阴性成员血清IL-23水平差异无统计学意义，提示感染HBV的成员体内Th17/Treg已出现失衡，机体的免疫微环境稳态遭到破坏；但HBV感染和Th17/Treg失衡的先后、因果关系并不清楚，究竟是HBV感染后出现机体免疫失衡，还是免疫平衡紊乱致使机体更易受到HBV感染，还需深入研究。

此外，我们将肝癌高发家族组中不同亲属级别成员的IL-23水平进行两两比较，得出先证者三级及以上亲属血清IL-23水平显著高于一、二级亲属血清IL-23水平，但可能由于二级亲属样本量偏少，一级亲属与二级亲属血清IL-23水平无统计学差异。同时，肝癌高发家族中伴随着先证者例数的增加，血清IL-23水平有所升高，但差异无统计学意义。因此，我们推测肝癌高发家族出现家族聚集性，可能与遗传因素和先证者例数无关，需扩大样本量或延伸至基因层面进行更深一步的研究。

综上所述，肝癌高发家族成员血清IL-23水平高于无癌家族，提示IL-23与肝癌高发家族聚集性存在着一定的相关性。推测在肝癌高发家族中，无癌成员的免疫系统已经在癌前发生了微弱的变化，但具体的免疫系统调节机制还需进一步研究与讨论。

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10.3969/j.issn.1002-266X.2017.39.012

R735.7

B

1002-266X(2017)39-0042-03

国家自然科学基金资助项目(30960170)；广西高等学校重点资助科研项目(桂教201202ZD021)。

吴继周(E-mail： wjz925@163.com)

2017-05-31)