合并高危型HPV感染的宫颈癌患者肿瘤组织FHIT、C-myc蛋白表达观察

吴晓燕，谷冀晖

(连云港市第一人民医院，江苏连云港222000)

合并高危型HPV感染的宫颈癌患者肿瘤组织FHIT、C-myc蛋白表达观察

吴晓燕，谷冀晖

(连云港市第一人民医院，江苏连云港222000)

目的 观察合并高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的宫颈癌患者宫颈癌组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)、C-myc蛋白的表达情况。方法 选择84例宫颈癌患者的手术切除宫颈组织标本，采用快速导流杂交技术检测HR-HPV，并根据检测结果分为有HR-HPV感染的感染组和无HR-HPV感染的对照组。采用免疫组化SP法检测两组宫颈癌组织中的FHIT、C-myc蛋白。结果 84例宫颈癌患者宫颈癌组织中71例存在HR-HPV感染，为感染组；13例无HR-HPV感染，为对照组。感染组宫颈癌组织中FHIT蛋白阳性表达比例低于对照组，C-myc蛋白阳性表达比例高于对照组。Spearman等级相关分析结果显示，84例宫颈癌患者肿瘤组织中FHIT蛋白表达与C-myc蛋白表达呈负相关(Rs=-5.428，P<0.05)，FHIT蛋白表达与HR-HPV感染呈负相关(Rs=-2.478，P<0.05)，C-myc蛋白表达与HR-HPV感染呈正相关(Rs=3.098，P<0.05)。结论 合并高危HR-HPV感染的宫颈癌组织中FHIT蛋白表达下调、C-myc蛋白表达升高；在宫颈癌发生发展过程中，HR-HPV感染可能与FHIT、C-myc蛋白表达异常存在一定联系。

宫颈癌；人乳头瘤病毒；脆性组氨酸三联体蛋白；C-myc蛋白

宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，近年来发病率呈逐年升高趋势，发病年龄呈年轻化[1]。目前我国每年新发宫颈癌病例13.15万，占全世界新发宫颈癌的28%，宫颈癌成为影响女性健康的重要问题[2]。宫颈癌的发病机制较为复杂，与病毒感染、性行为及分娩、癌基因激活和抑癌基因失活等多种因素有关。其中高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染是宫颈癌发病的重要危险因素。有报道显示，90%以上的宫颈癌患者伴HR-HPV感染，但HR-HPV促进宫颈癌发生发展的机制不明[3]。脆性组氨酸三联体(FHIT)基因是一种重要的抑癌基因，位于人类染色体3P14.2，该基因跨越了人类染色体脆性部位FRA3B，在细胞凋亡和细胞周期调控中起到重要作用，其异常激活可使细胞获得无限增殖能力[4]。C-myc基因是一种癌基因，其异常激活能促进细胞分裂和无限增殖，导致宫颈癌发生[5]。目前研究发现，FHIT、C-myc蛋白在多种肿瘤组织中呈现异常表达[6]，而在宫颈癌中二者表达情况及相关性仍有待证实。为此，本研究观察了合并HR-HPV感染的宫颈癌患者宫颈癌组织中HIT、C-myc蛋白表达情况，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2013年1月～2016年12月手术切除的宫颈癌组织石蜡标本84例份，来自84例患者，患者年龄24～56岁。所有患者均经两名高年资病理医师诊断为宫颈癌。排除复发性宫颈癌和已接受放化疗患者。按照FIGO临床分期标准，Ⅰ期16例Ⅱ、期26例、Ⅲ期27例、Ⅳ期15例。肿瘤分化程度为低分化25例、中分化36例、高分化23例。无淋巴结转移53例、有淋巴结转移31例。

1.2 HR-HPV检测方法 采用快速导流杂交技术检测所有标本中的HR-HPV，试剂盒购自凯普科技公司，该试剂盒可以一次性检测16、18、31、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8034型共16种HR-HPV以及6、11、43型共3种低危型HPV。检出任意一种HR-HPV即列入感染组，无HR-HPV感染为对照组。

1.3 FHIT、C-myc蛋白检测方法 采用免疫组化SP法检测所有标本中的FHIT、C-myc蛋白。采用武汉博士德生物科技有限公司生产的免疫组化SP试剂盒，实验步骤严格按照试剂盒说明书操作。以已知阳性切片作为阳性对照，PBS替代一抗作为阴性对照。FHIT蛋白定位于细胞质，C-myc蛋白定位于细胞核，细胞中出现棕黄色颗粒为蛋白表达阳性。综合染色强度和阳性细胞百分比判定结果：染色强度为无色计0分，淡黄色计1分，黄色计2分，棕黄色计3分；阳性细胞百分比≤10%计0分，>10%～25%计1分，>25%～50%计2分，>50%～75%计3分，>75%计4分；将以上两项得分相乘，乘积为0判定为-，1～4为+，5～8为++，9～12为+++，将+、++、+++视为阳性表达，计算阳性表达率[7]。

1.4 统计学方法 采用SPSS18.0统计软件。计数资料组间比较采用χ2检验；相关性分析采用Spearman等级相关分析法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

84例宫颈癌患者宫颈癌组织中71例存在HR-HPV感染，为感染组；13例无HR-HPV感染，为对照组。

感染组宫颈癌组织中FHIT蛋白表达- 50例、+ 11例、++ 9例、+++ 1例；对照组FHIT蛋白表达表达- 4例、+ 4例、++ 3例、+++ 2例。感染组宫颈癌组织中FHIT蛋白阳性表达比例低于对照组(P<0.05)。

感染组患者宫颈癌组织中C-myc蛋白表达- 15例、+ 18例、++ 22例、+++ 16例；对照组C-myc蛋白表达- 8例、+ 3例、++ 2例、+++ 0例。感染组宫颈癌组织C-myc蛋白阳性表达比例高于对照组(P<0.05)。

Spearman等级相关分析结果显示，84例宫颈癌患者宫颈癌组织中FHIT蛋白阳性表达与C-myc蛋白阳性表达呈负相关(Rs=-5.428，P=0.000)，FHIT蛋白阳性表达与HR-HPV感染呈负相关(Rs=-2.478，P=0.017)，C-myc蛋白阳性表达与HR-HPV感染呈正相关(Rs=3.098，P=0.003)。

3 讨论

宫颈癌具有较长的癌前病变期，从宫颈上皮内瘤变(CIN)到原位癌到宫颈癌是一个长时期的连续病变过程，患者最终能否发展为宫颈癌取决于三方面因素：生物学因素(病毒)、宿主因素和环境因素。其中HPV是目前已知的能够引起宫颈癌的重要因素。HPV属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是一种无包膜的球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，目前已分离出200多个亚型[8]。研究发现，近90%的CIN和宫颈癌患者存在HR-HPV感染，其中16型和18型是两种最重要的HR-HPV，也是目前宫颈癌病例中最常见的两种[9]。研究[10]发现，16型和18型HPV可以将自身E6、E7基因整合到宿主基因组中，其表达产物可使原癌基因激活、抑癌基因失活，促进肿瘤发病。

本研究应用快速导流杂交技术检测各组HR-HPV感染情况，该方法可以一次性检测包括16型和18型在内的16种HR-HPV，3种低危型HPV。我们发现84例宫颈癌组织中71例存在HR-HPV感染，13例无HR-HPV感染，HR-HPV感染率为84.52%，与报道基本相符，证实宫颈癌患者HR-HPV感染率较高[11]。

FHIT是组氨酸三联体基因家族的重要成员，是新发现的一种抑癌基因[12]，该基因位于染色体3p14.2上，对细胞周期调控、DNA损伤修复有重要作用[13]。研究[14]发现，在肺癌、乳腺癌、皮肤癌、胃癌等多种恶性肿瘤中存在FHIT表达下调和缺失。一项关于宫颈癌的研究[15]表明，宫颈癌中存在FHIT基因甲基化，FHIT基因失活可能与宫颈癌的发生有密切关系。有学者[16]发现，宫颈癌组织中存在FHIT基因低表达，其表达水平与宫颈癌的临床分期、病理分级、肿瘤转移有关，并认为FHIT基因的低表达与宫颈癌患者的预后有密切关系。C-myc基因是myc基因家族的重要成员，主要对细胞增殖和细胞分裂有调控作用，也是一种重要的癌基因[17]。C-myc可通过染色体异位、基因扩增、插入增强子等方式获得过表达能力。在大多数恶性肿瘤中存在C-myc基因的高表达。有学者[18]发现C-myc基因表达与宫颈癌的临床分期、病理分级、肿瘤转移和预后有密切关系。

本研究结果显示，感染组宫颈癌组织中FHIT蛋白阳性表达比例低于对照组，C-myc蛋白阳性表达比例高于对照组，提示FHIT蛋白、C-myc蛋白表达异常与HR-HPV感染有密切关系，同时也表明FHIT蛋白和C-myc蛋白在宫颈癌的发生、发展中起到了重要作用。Spearman等级相关分析结果显示，84例宫颈癌患者肿瘤组织中FHIT蛋白表达与C-myc蛋白表达呈负相关，FHIT蛋白表达与HR-HPV感染呈负相关，C-myc蛋白表达与HR-HPV感染呈正相关，说明HR-HPV感染可能影响宫颈癌组织中FHIT、C-myc蛋白的表达。我们推测HR-HPV将自身E6、E7基因整合到宿主基因组后，其表达产物可使FHIT失活、C-myc激活，从而促进肿瘤进展。上述结果为宫颈癌发病机制及分子靶向治疗药物相关研究提供了新思路。同时，临床上有望通过FHIT、C-myc与HR-HPV联合检测进一步提高宫颈癌的早期确诊率。

综上所述，合并高危HR-HPV感染的宫颈癌组织中FHIT蛋白表达下调、C-myc蛋白表达升高；在宫颈癌发生发展过程中，HR-HPV感染与FHIT、C-myc蛋白表达异常之间可能存在一定联系。

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