自体分选造血干细胞移植治疗神经系统变性疾病的可行性分析

汪杰，李宏增，杨璐，赵待第，郭俊

自体分选造血干细胞移植治疗神经系统变性疾病的可行性分析

汪杰，李宏增，杨璐，赵待第，郭俊

目的：分析自体分选造血干细胞移植治疗神经系统变性疾病（NDD）的疗效。方法收集我院收治的NDD患者68例，给予自体分选造血干细胞治疗。于治疗前及治疗后3、12月，采用世界神经病联合会国际合作共济失调量表（ICARS）、日常生活活动能力量表-巴氏指数（BI）、欧洲生活质量评分表（EQOL）、ALS功能分级量表（ALSFRS）功能分级量表评价治疗效果，并观察随访1年内的复发情况。结果治疗有效率为88.24%；与治疗前相比，治疗3、12月后ICARS评分均逐渐降低（P＜0.05）；BI和ALSFRS评分均升高，EQOL评分降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与治疗3个月相比，治疗12个月BI和ALSFRS评分均升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。经过移植治疗后，出现短暂性低热1例，轻度低压性头痛2例，经过对症处理后好转。5例患者分别于移植后15、16、21、24、25个月死于复发或进展。结论自体分选造血干细胞移植治疗NDD具有一定的效果。

自体分选造血干细胞；细胞移植；神经系统变性疾病

神经系统变性疾病（neurodegenerative diseases，NDD）指由于神经元变性、凋亡所导致的神经系统退行性疾病[1]，病理改变主要以神经细胞变性为主。治疗措施主要为药物治疗[2]，但疗效不佳。目前干细胞移植治疗神经系统疾病的研究不断深入，并且效果明显。本课题组收集NDD患者68例，分析自体分选造血干细胞移植治疗NDD的疗效。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择我院2013年4月至2015年12月收治的NDD患者68例，男41例，女27例；年龄（59.78±3.78）岁；病程（3.23±0.34）年；经过骨髓细胞学分析，其细胞增生程度、计数、比例均正常。

纳入标准：均符合NDD的临床诊断标准[3]，相应疾病类型具有相应的临床表现；患者经过前期支持治疗，生命体征平稳，符合干细胞治疗条件；可收集到完整的检查和治疗资料；经过本院伦理委员会批准同意，并且患者知情同意。排除标准：累及小脑、脑干的变性疾病；患有心、肝、肾等重要器官衰竭性疾病，或合并肺炎或严重感染患者；过敏体质不适合干细胞移植患者；患有脑部其他严重疾病，可能影响本次研究结果者；血清人类免疫缺陷病毒和肿瘤指标阳性者；精神疾病或意识障碍者；妊娠或哺乳期患者；依从性差或拒绝参加研究者。

1.2 方法

1.2.1 造血干细胞制备 取患者自身骨髓40 mL，肝素抗凝，按照1:1与PBS混合，3000 rpm离心10 min，弃上清，留取细胞沉淀；再次加入1 mL PBS重悬，同时加入1 mL Percoll细胞分离液（购于南京建成生物工程研究所），3000 rpm离心10 min；离心后用PBS洗涤3次，最后采用DMEM/F12低糖培养基（10%）接种于25 m2培养瓶，置于37℃，5%CO2培养箱中培养24 h后倒置显微镜观察细胞形态，进行第1次换液，标记为原代。细胞生长重叠＞80%时，0.125%胰蛋白酶（含有0.02%EDTA）消化传代，传到第3代，细胞状态、性状良好时，可行细胞移植。

1.2.2 造血干细胞移植 取培养和分选好的造血干细胞悬液4 mL（细胞数1×107个），采用腰椎穿刺鞘内注射，注射前抽取脑脊液4 mL，1次/周，4次/疗程，每次注射时给予地塞米松防止排异反应，详细记录患者生命体征及并发症情况等。

1.2.3 观察指标 治疗前和治疗后3、12月采用世界神经病联合会国际合作共济失调量表（International Cooperative Ataxia Rating Scale，ICARS），巴氏指数（Barthel Index，BI），欧洲生活质量评分表（European，quality of life，EQOL），ALS功能分级量表（ALS functional rating scale，ALSFRS）对患者进行评分。

ICARS：包括19项，主要评定姿势和步态、动态功能、语言障碍、眼球运动障碍等；0～100分，0分为正常，100分共济失调最严重，其中≤20分为轻度、20～50分为中度、≥50分为重度[4]。BI：主要应用于生活活动能力评价，主要为进食、洗澡、修饰、穿衣、控制大小便、如厕、床椅转移、平地行走、上下楼梯等方面评分；分值0～100分，其中0～40分为重度依赖，41～60分为中度依赖，61～99分为轻度依赖，100分为无需依赖[5]。ALSFRS：包括10项，其中4项评价延髓和呼吸功能，2项评价上肢功能，2项评价下肢功能，2项评价其他能力；每项分为1～4等级，分别为1～4分，总分为40份，分值越低越严重[6]。

治疗效果评价：①痊愈：患者症状体征均消失，肌电图正常，可以正常生活及工作；②显效：患者症状体征基本消失，肌电图正常，可以正常生活及工作；③进步：患者症状体征好转，肌电图改善，生活基本自理；④无效：患者临床症状或体征无变化或者加重。有效率/%=（痊愈例数+显效例数+进步例数）/总例数×100%。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 治疗效果

本组患者12个月随访率为100%。痊愈12例（17.65%），显效32例（47.06%），进步16例（23.53%），无效8例（11.76%）；总有效率88.24%。

2.2 治疗前、后3、12个月ICARS评分比较

本组治疗前、治疗3、12个月的ICARS评分分别为（42.12±2.31）分、（33.45±2.45）分及（24.14±2.31）分，评分逐渐降低，差异有统计学意义（F=5.773，P=0.023）。

2.3 治疗前、后BS、EQOL、ALSFRS评分比较

本组治疗前、治疗3、12个月的BS评分分别为（37.89±2.34）分、（45.27±5.23）分及（50.36±4.49）分，治疗后3、12月的评分均高于治疗前（P＜0.05），且治疗后12个月高于治疗后3个月（P＜0.05）；EQOL评分分别为（13.23±1.24）分、（11.24±1.89）分及（10.21±2.17）分，治疗后 3、12月的评分均低于治疗前（P＜0.05）；ALSFRS评分分别为（23.78±2.34）分、（25.29±3.67）分及（26.84±2.58）分，治疗后 3、12月的评分均高于治疗前（P＜0.05），且治疗后12个月高于治疗后3个月（P＜0.05）。

2.4 安全性观察

经过移植治疗后，出现短暂性低热1例，轻度低压性头痛2例，经过对症处理后好转。5例患者分别于移植后15、16、21、24、25个月死于复发或进展。

3 讨论

临床常见的NDD有帕金森病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿舞蹈病和阿尔茨海默病等[7,8]。这些疾病病因各异，但病理上均有中枢神经不同部位及不同程度的神经元脱失和功能异常，且具有两个共同特点：神经系统机能一个或几个选择性受累，而其它系统不被侵犯；一般以中枢神经系统左右对称，进行性受累为特征[9,10]。不同疾病损伤神经系统不同部位，在临床上有特定受累部位的相应症状：如累积大脑皮质神经细胞的病变，主要表现为痴呆；累及基底核、锥体外运动神经系统引起运动障碍；累及小脑可导致共济失调[11]。

目前，国内外均有骨髓间充质干细胞治疗NDD的相关报道[12]，但是对于自体分选造血干细胞移植治疗NDD的报道较少。NDD传统治疗方式以神经递质、影响代谢的药物及离子通道药物主，但因机制复杂、病因繁多，同一种药物治疗不同病因的神经系统变性疾病疗效差异很大[13]。研究发现干细胞能在局部微环境的影响下分化成相应的受损细胞，重建神经环路，同时产生神经保护因子，抑制神经变性或促进神经再生。本研究结果显示，治疗总有效率为88.24%，治疗有效。干细胞移植后或可整合神经通路，刺激新的神经元和胶质细胞，成为受损神经通路的枢纽，对于重建神经循环至关重要[14]。治疗3、12月后ICARS评分均逐渐降低，BS和ALSFRS评分均升高，EQOL评分降低，并且治疗12个月较治疗3月BS和ALSFRS评分变化幅度大。治疗后短期均未发生严重副反应或并发症[15]；随访过程中，5例患者分别于移植后15、16、21、24、25个月死于复发或进展。

综上所述，自体分选造血干细胞移植治疗NDD有一定的效果，安全可行，但是该治疗方式正处于临床研究阶段，还需要长期的观察和探索。

[1]张晓婷,段连宁,丁丽,等.非血缘供者异基因外周血造血干细胞联合脐带间充质干细胞移植治疗恶性血液病临床研究[J].中国实验血液学杂志,2015,23:1445-1450.

[2]Maia L,Taffarel MO,Moraes CND,et al.Feasibility and safety of intrathecal transplantation of autologous bone marrow mesenchymal stem cells in horses[J].BMC Vet Res,2015,11:36-42.

[3]王玲,王恒湘,朱玲,等.HLA相合无关供者造血干细胞移植联合脐带间充质干细胞输注治疗儿童重型再生障碍性贫血19例疗效及安全性研究[J].中华血液学杂志,2016,37:453-457.

[4]王友君,李栋梁.脐带间充质干细胞对人类白细胞抗原不全相合造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血效果的影响[J].临床误诊误治,2015,23:85-89.

[5]王黎明,周建军,白雯,等.自体分选造血干细胞和异体脐带间充质干细胞移植治疗神经系统变性疾病[J].中国组织工程研究与临床康复,2011,15:1889-1892.

[6]岳燕,罗荣牡,司英健.外周血造血干细胞移植联合间充质干细胞输注治疗范可尼贫血患儿1例并文献复习[J].中国小儿血液与肿瘤杂志,2015,20:139-144.

[7]Rajput BS,Chakrabarti SK,Dongare VS,et al.Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells in the Treatment of Duchenne Muscular Dystrophy:Safety and Feasibility Study in India[J].J Stem Cells,2015,10:141-156.

[8]张莹,王静.一例单倍体相合造血干细胞联合间充质干细胞共移植治疗重型再生障碍性贫血患者的护理[J].中华现代护理杂志,2015,21:3459-3460.

[9]Woodworth TG,Furst DE.Safety and feasibility of umbilical cord mesenchymal stem cells in treatment-refractory systemic lupus erythematosus nephritis:time for a double-blind placebo-controlled trial to determine efficacy[J].Arthritis Res Ther,2014,16:113-120.

[10]蒋曲,张红宾.间充质干细胞在造血干细胞移植中的作用[J].重庆医学,2015,36:5164-5167.

[11]郭小伟,关晨霞.骨髓间充质干细胞在致敏与非致敏BALB/c小鼠造血干细胞移植中的应用[J].中国组织工程研究,2015,19:5215-5219.

[12]罗红春,张红宾,辛小娟,等.SDF-1/HGF融合蛋白介导的大鼠间充质干细胞对造血干细胞增殖和趋化作用的影响[J].重庆医科大学学报,2015,12:1223-1227.

[13]沈华超,丁海霞,李晓波,等.自体骨髓间充质干细胞移植治疗神经系统疾病的临床研究[J].神经损伤与功能重建,2016,11:196-199.

[14]Rajput BS,Chakrabarti SK,Dongare VS,et al.Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells in the Treatment of Duchenne Muscular Dystrophy:Safety and Feasibility Study in India[J].J Stem Cells,2015,10:141-156.[15]Wang L,Ji H,Zhou J,et al.Therapeutic Potential of Umbilical Cord Mesenchymal Stromal Cells Transplantation for Cerebral PALSFRSy:A Case Report[J].Case Rep Transplant,2013,2013:146347.

R741；R741.05；R742

ADOI10.16780/j.cnki.sjssgncj.2017.06.029

第四军医大学唐都医院神经内科西安710032

2017-06-12

汪杰wangjie_0339@163.com

（本文编辑：唐颖馨）