杏鲍菇多肽对铅致大鼠氧化损伤的干预作用

吴艳丽 魏艳丽 冯翠萍 常明昌 孟俊龙 刘靖宇

（山西农业大学食品科学与工程学院，山西太谷030801）

国内外研究表明铅可通过攻击生物大分子，产生自由基，对机体的抗氧化防御系统造成影响，引发机体各系统及脏器的氧化损伤[1-3]，而膳食中蛋白质、多肽、维生素、多糖类和酚类化合物等对铅引起的氧化损伤具有一定的干预作用[4-8]。

杏鲍菇含有丰富的蛋白质，经碱性蛋白酶水解后制得500～3000 Da的杏鲍菇多肽，体外试验表明其有清除DPPH·、O2-·及抑制脂质过氧化的作用[9-11]，而杏鲍菇多肽对铅的氧化损伤是否具有干预作用鲜见报道。因此，笔者通过建立动物模型研究杏鲍菇多肽对铅的氧化损伤的干预作用，从而为确定杏鲍菇多肽是否能作为排铅功能食品原料提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 供试材料①原料：杏鲍菇由山西农业大学食用菌中心提供。杏鲍菇多肽采用文献[9]的方法进行制备。采用碱提酸沉法，50℃、pH 12、料液比1∶55的条件下提取2.5 h得到蛋白质，经过Sephadex G-100凝胶纯化后，利用碱性蛋白酶在pH 10.5、45℃、料水比1∶25、酶用量1.0%的条件下水解12 h，得到杏鲍菇多肽。②试验动物：21日龄雄性SD大鼠，体重（55± 5）g，共27只，购于北京维通利华有限公司。③主要试剂：超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒、过氧化氢酶（CAT）试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）测定试剂盒、丙二醛（MAD）测定试剂盒、蛋白定量试剂盒（南京建成生物工程研究所），醋酸铅、冰醋酸、无水乙醇均为国产分析纯。④主要仪器与设备：HH-8数显恒温水浴锅（国华电器有限公司），2100型可见光分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司），5417R冷冻离心机（德国艾本德股份公司），漩涡混匀器（上海精科实业有限公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 试验动物分组及样品采集 将27只21日龄雄性SD大鼠适应性喂养7 d后，随机分为三组，每组9只，分别为对照组（基础饲料+蒸馏水）、染铅组（基础饲料+0.2%醋酸铅水溶液）和试验组（基础饲料添加2%多肽+0.2%醋酸铅水溶液），连续饲养60 d。

喂养结束后，采眼球血，静置，4℃、4000 r/min离心10 min得血清，分装后冷藏保存；取心脏、肝脏、肾脏0.5 g，加入4.5 mL的生理盐水（按照组织与生理盐水为1∶9的比例）进行匀浆，匀浆之后，4℃、4000 r/min离心10 min，取上清保存于-20℃中备用。

1.2.2 蛋白质含量的测定 取血清及组织匀浆上清液，参照试剂盒说明测定其蛋白质含量。

1.2.3 SOD、CAT、GSH-Px和MDA活性的测定 取血清及组织匀浆上清液，参照试剂盒说明进行测定。

1.3 试验数据处理数据采用Graphpad Prism 5软件进行处理，以均数±标准差（X±S）表示，并经t检验。

2 结果与分析

2.1 杏鲍菇多肽对染铅大鼠血清和脏器SOD活性的影响

图1 杏鲍菇多肽对染铅大鼠血清SOD活性的影响

图2 杏鲍菇多肽对染铅大鼠脏器SOD活性的影响

图3 杏鲍菇多肽对染铅大鼠血清CAT活性的影响

图4 杏鲍菇多肽对染铅大鼠脏器CAT活性的影响

图5 杏鲍菇多肽对染铅大鼠血清GSH-Px活性的影响

图6 杏鲍菇多肽对染铅大鼠脏器GSH-Px活性的影响

2.1.1 对染铅大鼠血清SOD活性的影响 由图1可知，与对照组相比，染铅组大鼠血清SOD活性极显著下降（P＜0.01）。与染铅组相比，试验组大鼠的血清SOD活性显著升高（P＜0.05）。

2.1.2 对染铅大鼠脏器SOD活性的影响 由图2可知，与对照组相比，染铅组肝脏、肾脏和心脏中SOD活性均显著下降（P＜0.05或P＜0.01）。与染铅组相比，试验组各脏器中SOD活性均有所升高，其中心脏SOD活性显著升高（P＜0.05），其它脏器的SOD活性差异不显著。

2.2 杏鲍菇多肽对染铅大鼠血清和脏器CAT活性的影响

2.2.1 对染铅大鼠血清的CAT活性的影响 由图3可知，与对照组相比，染铅组大鼠血清CAT活性显著下降（P＜0.05）。与染铅组相比，试验组加入杏鲍菇多肽后，血清CAT活性显著升高（P＜0.05）。

2.2.2 对染铅大鼠脏器CAT活性的影响 由图4可知，与对照组比较，染铅组中各脏器中CAT活性均下降，其中肝脏与心脏中CAT活性显著下降（P＜0.05或P＜0.01）。与染铅组相比，试验组各脏器CAT活性均升高，其中肝脏和心脏中CAT活性显著升高（P＜0.05）。

2.3 杏鲍菇多肽对染铅大鼠血清和脏器GSH-Px活性的影响

2.3.1 对染铅大鼠血清GSH-Px活性的影响 由图5可知，与对照组相比，染铅组大鼠血清GSH-Px活性极显著下降（P＜0.01）。与染铅组相比，试验组血清GSH-Px活性显著升高（P＜0.05）。

图7 杏鲍菇多肽对染铅大鼠血清MDA水平的影响

图8 杏鲍菇多肽对染铅大鼠脏器MDA水平的影响

2.3.2 对染铅大鼠脏器GSH-Px活性的影响 由图6可知，与对照组相比，染铅组各脏器中GSH-Px活性均下降，其中肝脏和肾脏中GSH-Px活性显著下降（P＜0.05）。与染铅组相比，试验组各脏器中GSH-Px活性均升高，其中肝脏GSH-Px活性显著升高（P＜0.05）。

2.4 杏鲍菇多肽对染铅大鼠血清和脏器MDA水平的影响

2.4.1 对染铅大鼠血清MDA水平的影响 由图7可知，与对照组相比，染铅组大鼠血清MDA水平显著升高（P＜0.05）。与染铅组相比，试验组血清MDA水平显著下降（P＜0.05）。

2.4.2 对染铅大鼠脏器MDA水平的影响 由图8可知，与对照组比，染铅组各脏器中MDA水平均极显著升高（P＜0.01）。与染铅组相比，试验组各脏器MDA水平均下降，其中肝脏和肾脏的MDA水平显著下降（P＜0.05或P＜0.01）。

3 小结与讨论

生物活性肽是介于蛋白质和氨基酸之间的分子聚合物，当机体以肽的形式摄入时，能够被肠道直接吸收[12]。试验所制备的杏鲍菇多肽经过测定分子量在500～3000 Da[10]，属于低分子聚合物。当给大鼠补充杏鲍菇多肽后，血清和脏器抗氧化酶的活性升高，MDA含量下降，差异显著，说明杏鲍菇多肽可调节铅引起的氧化酶和丙二醛的变化，缓解铅造成的氧化损伤。其可能的机制一是杏鲍菇多肽作为外源抗氧化剂可直接清除自由基或调动机体内源性抗氧化活性，增强机体抗氧化能力，从而缓解氧化损伤；二是杏鲍菇多肽能够提供氨基、巯基或羧基与铅发生络合作用进而排出体外，使铅的氧化损伤降低[13]。但详细的机制还需要进一步研究。

大鼠染铅后血清及各组织中抗氧化酶活性降低，丙二醛含量升高，抗氧化能力降低；而添加杏鲍菇多肽食料饲养大鼠，可提高其血清和脏器中抗氧化物酶活性和降低丙二醛的含量，缓解铅造成的氧化损伤。