柴达木盆地野生大肥菇营养生理研究

徐鸿雁 刘海林 罗春燕

（青海大学农林科学院青藏高原野生植物资源研究所，青海西宁810016）

大肥菇（Agaricus bitorquis）又名柴达木沙菇、沙滩蘑菇、大蘑菇，在青海主要分布于柴达木盆地、诺木洪、格尔木以及天峻、共和、兴海、乌兰县部分芦苇草滩等地，具有个体肥大、味道细嫩鲜美、耐低温、抗性强等特点[1-3]。在柴达木大肥菇中，必需氨基酸含量占氨基酸总量的35.84%，粗蛋白、粗脂肪、粗纤维含量分别为24.0%，2.10%和17.32%，每100 g鲜菇含8.168 mg维生素B3，此外还含有较高含量的维生素B2和钾、磷、钙、镁等矿质元素[4]。现阶段对大肥菇的研究报道主要在其形态特性、人工驯化栽培方面，有关柴达木大肥菇菌丝生长规律的报道较少[5，6]。因此研究柴达木大肥菇的营养生理特性，探讨柴达木大肥菇菌丝生长发育的规律，可为开发利用柴达木野生大肥菇、发展当地盆地经济提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 供试材料

1.1.1 菌株 供试菌种由青海大学农林科学院青藏高原野生植物资源研究所提供，菌株编号柴达木大肥菇1号。

1.1.2 培养基 母种培养基：葡萄糖20 g，蛋白胨5 g，磷酸二氢钾1 g，硫酸镁0.5 g，琼脂粉14 g，加去离子水1000 mL。

碳源基础培养基：蛋白胨5 g，磷酸二氢钾1 g，硫酸镁0.5 g，琼脂粉14 g，加去离子水1000 mL。

氮源基础培养基：葡萄糖20 g，磷酸二氢钾1 g，硫酸镁0.5 g，琼脂粉14 g，加去离子水1000 mL。

无机盐基础培养基：葡萄糖20 g，硝酸铵5 g，琼脂粉14 g，加去离子水1000 mL。

维生素基础培养基：半乳糖20 g，牛肉膏5 g，磷酸二氢钾1 g，硫酸镁0.5 g，琼脂粉14 g，加去离子水1000 mL。

植物生长因子基础培养基：半乳糖20 g，牛肉膏5 g，磷酸二氢钾1 g，硫酸镁0.5 g，琼脂粉14 g，加去离子水1000 mL。

1.2 培养和测量方法活化培养：母种培养基平板中央接入活化的斜面菌种柴达木大肥菇1号，制备母种培养基，（20±1）℃黑暗培养，待菌丝长满平板后备用。

采用平板培养法[7]，测定不同培养基上柴达木大肥菇菌落直径大小，考察不同碳、氮源及无机盐、维生素、植物生长因子对柴达木大肥菇菌丝生长的影响。每皿装供试培养基20 mL，每个平板中央接入柴达木大肥菇活化菌饼（直径5 mm）一块，在温度（20±1）℃、空气相对湿度70%～75%培养。采用划线法每隔4 d标记菌落直径，共培养30 d，测量菌落直径，计算菌丝生长速率，并对其菌落长势进行评分。

菌丝生长速率=菌落直径/培养天数

菌落长势评分标准：5-菌丝长势浓密、颜色为纯白色；4-菌丝长势较浓密、颜色为白色；3-菌丝长势较浓密、颜色白色不明显；2-菌丝长势较稀疏、菌丝有少许黄色；1-菌丝长势稀疏、颜色为淡黄色。

1.3 试验设计

1.3.1 碳源试验 分别将20 g果糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖、核糖、木糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、几丁质和可溶性淀粉加入到碳源基础培养基中，研究不同碳源对柴达木大肥菇菌丝生长的影响。每个处理重复3次。

1.3.2 氮源试验 分别将5 g硫酸铵、氯化铵、硝酸钙、硝酸钾、硝酸钠、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸、精氨酸、丙氨酸、丝氨酸、组氨酸、天门冬酰胺、麦芽浸粉、蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、牛肉蛋白胨和胰蛋白胨加入到氮源基础培养基中，考察不同氮源对柴达木大肥菇菌丝生长的影响。每个处理重复3次。

1.3.3 无机盐试验 分别将0.5、1.0、1.5、2.0 g/L和2.5 g/L的氯化钠、氯化钾、硫酸镁、氯化钙、磷酸二氢钾，0.02、0.04、0.06、0.08 g/L的硫酸铜、硫酸锰、硫酸铁、硫酸锌、氯化钴加入到无机盐基础培养基中，考察不同无机盐对柴达木大肥菇菌丝生长的影响。每个处理重复3次。

1.3.4 维生素试验 分别将2、4、6、8、10 mg/L的维生素 B1、B3、B6、B9加入到维生素基础培养基中，考察不同维生素对柴达木大肥菇菌丝生长的影响。每个处理重复3次。

1.3.5 植物生长因子试验 分别将2、6、8、10、15、20、25 mg/L赤霉素、6-BA、激动素、2，4-D加入到植物生长剂基础培养基中，考察不同植物生长因子对柴达木大肥菇菌丝生长的影响。每个处理重复3次。

1.4 数据处理试验数据采用DPS（Version 7.05）统计软件进行分析。

2 结果与分析

2.1 不同碳源对柴达木大肥菇菌丝生长的影响

不同碳源对柴达木大肥菇菌丝生长的影响结果见表1。

表1 不同碳源对柴达木大肥菇菌丝生长的影响

由表1可见，供试14种碳源柴达木大肥菇均能利用，但在不同碳源培养基上，菌丝生长速率、菌落直径有较大差异，其中以半乳糖为碳源时效果最佳，菌落长势最好，菌丝生长最快（7.15 mm/d），显著高于其他供试碳源；其次为鼠李糖和阿拉伯糖，甘露醇的效果最差。因此半乳糖为柴达木大肥菇菌丝生长的最优碳源。

2.2 不同氮源对柴达木大肥菇菌丝生长的影响不同氮源对柴达木大肥菇菌丝生长的影响结果见表2。

表2 不同氮源对柴达木大肥菇菌丝生长的影响

由表2可见，柴达木大肥菇具有较广的氮源谱，19种供试氮源都可利用。在不同氮源培养基上，柴达木大肥菇菌丝生长速率及菌落直径有较大差异。柴达木大肥菇对复合氮源利用最好，对无机氮源和氨基酸氮源利用相对较差；以牛肉膏为氮源时，柴达木大肥菇菌丝生长效果最好，菌丝生长旺盛；蛋白胨和牛肉蛋白胨次之；无机氮源中，柴达木大肥菇对硫酸铵的利用较好；氨基酸类氮源中，除天门冬酰胺外，其他氨基酸对柴达木大肥菇菌丝生长作用不明显。

2.3 无机盐对柴达木大肥菇菌丝生长的影响由图 1 可见，K+、Ca2+、Na+、Mg2+等常量无机盐离子在0.5～2.5 g/L内均能促进柴达木大肥菇菌丝体生长，但菌落直径存在较大差异。当氯化钾、氯化钠、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾的添加量分别为2.0、1.0、1.0、1.5、0.5 g/L时，柴达木大肥菇菌落直径最大。另外，培养基中常量无机盐离子浓度较高时都会不同程度地抑制菌丝体的生长，如Ca2+、Na+、Mg2+无机盐离子。

图1 常量无机盐离子对柴达木大肥菇菌丝生长的影响

图2 微量无机盐离子对柴达木大肥菇菌丝生长的影响

图3 维生素对柴达木大肥菇菌丝生长的影响

图4 植物生长调节剂对柴达木大肥菇菌丝生长的影响

由图2可知，添加量为0.02～0.08 g/L范围内Fe2+、Mn2+、Zn2+、Cu2+、Co2+微量无机盐离子均能促进柴达木大肥菇菌丝体生长。其中Fe2+的促进作用最明显，当硫酸亚铁添加量为0.06 g/L时，柴达木大肥菇菌落直径可达45.45 mm；Zn2+在浓度较大时会抑制菌丝体生长。在试验范围内Co2+对柴达木大肥菇菌丝体的促生作用较弱，且抑制作用比较明显，氯化钴添加量超过0.02 g/L时，就会对菌丝体生长产生抑制作用；Cu2+在试验浓度范围内表现出对柴达木大肥菇菌丝体的促进作用。

2.4 维生素对柴达木大肥菇菌丝生长的影响由图3可知，添加量在2.0～10.0 mg/L时，除VB9以外VB1、VB3、VB6均可在试验浓度范围内促进柴达木大肥菇菌丝生长。VB3添加量超过6 mg/L时，对柴达木大肥菇菌丝生长有明显抑制作用；基础培养基中添加8 mg/L的VB1或VB6时，柴达木大肥菇菌落直径较大。

2.5 植物生长因子对柴达木大肥菇菌丝生长的影响由图4可见，在添加量为2.0～26.0 mg/L时2，4-D、赤霉素、6-BA、激动素均可促进柴达木大肥菇菌丝生长。其中2，4-D和赤霉素的作用较为明显，尤其2，4-D添加量超过6 mg/L时能明显抑制柴达木大肥菇菌丝生长；激动素添加量为8 mg/L时柴达木大肥菇菌丝生长较快。另外，赤霉素在添加量10～25 mg/L内对柴达木大肥菇菌丝生长的影响差异不太显著。

3 小结与讨论

试验结果表明，以半乳糖为碳源，牛肉膏为氮源时，柴达木大肥菇菌丝生长最好。这与杨琴[8]、马国良[9]报道的大肥菇最佳碳源为果糖不一致，可能因菌株来源不同有关，具体原因还需进一步试验。试验中，添加低浓度的VB3相比添加高浓度VB3对柴达木大肥菇菌丝体生长有明显促进作用，尤其当VB3添加量为6 mg/L时菌丝生长量达到最大值，这表明柴达木大肥菇菌丝在生长时需要外源烟酸的供给。有报道指出，赤霉素和2，4-D能很好的促进猴头菇、杏鲍菇、蛹虫草的菌丝生长[8-10]。试验中，添加少量（6 mg/L）的赤霉素和2，4-D即可促进柴达木大肥菇菌丝体生长，而高浓度的植物生长因子对柴达木大肥菇的菌丝生长存在抑制作用，但其抑制机理与其对植物的抑制机理是否相似，还有待进一步深入研究。