嗜酸性粒细胞趋化因子-1、类风湿因子和抗环瓜氨酸肽抗体与类风湿关节炎活动度的相关性分析

2017-03-29李传利王延群郭淼

临床检验杂志 2017年1期

李传利，王延群，郭淼

(1.淄博矿业集团有限责任公司中心医院检验科，山东淄博 255120；2.济南军区总医院实验诊断科，济南 250000；3.锦州医科大学附属第一医院检验科，辽宁锦州 121001)

李传利1，王延群2，郭淼3

目的研究嗜酸性粒细胞趋化因子-1(Eotaxin-1)、类风湿因子(RF)和抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体与类风湿关节炎活动度的相关性。方法将淄博矿业集团中心医院2014年12月至2015年12月就诊的早期类风湿关节炎患者58名，同时期非类风湿关节炎患者46名，健康人对照者53名纳入本研究。收集其肿胀关节计数、压痛关节计数和DAS28评分评价RA的活动度。免疫透射比浊法检测其血清RF水平，ELISA检测Eotaxin-1和抗CCP抗体的水平，不同组间因子水平的比较采用方差分析，其水平与临床评分的相关性采用Spearman相关分析。结果 RA组Eotaxin-1、RF和抗CCP抗体的水平分别为(96.02±21.07) pg/mL、(183.42±87.45) U/mL、(119.09±62.30) RU/mL，较非RA组和健康人对照组均高，差异有统计学意义(P<0.01)。RA患者血清Eotaxin-1水平与其肿胀关节计数、压痛关节计数和DAS28评分有显著相关性(P<0.01)；抗CCP抗体的水平与其压痛关节计数和DAS28评分有相关性；RF仅与DAS28评分有相关性。结论 RA患者血清Eotaxin-1和抗CCP抗体的水平与患者的疾病活动度相关，有望发展成为监测RA疾病活动度的新的血清学指标。

类风湿关节炎；嗜酸性粒细胞趋化因子-1；抗环瓜氨酸肽抗体；肿胀关节计数；压痛关节计数

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)主要表现为慢性持续的关节炎症，发病早期即可出现关节侵害和骨侵蚀，并伴有高水平的自身抗体和系统性炎症[1-2]。近年来，虽然RA的治疗手段有了一系列进展，但其病因及病理过程仍不清楚，RA一旦发生，疾病进展迅速,影响患者的生存质量。因此，对于RA 的疾病进展的监测，对其治疗和预后有着重要意义。嗜酸性粒细胞趋化因子-1(Eotaxin-1)作为趋化因子家族的一员，被发现在RA患者血清中水平升高。本研究采用肿胀关节计数(swollen joint count,SJC)、压痛关节计数(tender joint count,TJC)和DAS28评分评价RA的活动度，通过分析RA患者血清Eotaxin-1、类风湿因子(rheumatoid factor, RF)和抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide, CCP)抗体与以上临床评分的相关性，探究这3个指标对RA的疾病活动度的监测作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料将2014年12月至2015年12月于淄博矿业集团中心医院就诊的58名早期类风湿关节炎患者(RA组)、46名非类风湿关节炎患者(非RA组)以及53名体检健康者(健康人对照组)纳入本研究。RA组所有患者均符合2010年美国风湿病学会(ACR)/欧洲抗风湿病联盟(EULAR)分类诊断标准，且根据EULAR 2003年会议，以病程2年内为RA早期。其中，女性42名，男性16名，年龄(47.6±11.7)岁，病程为(11.3±7.5)个月。非RA组患者包括反应性关节炎15例，腰椎间盘突出6例，非RA弥漫性结缔组织病16例，骨关节炎9例。非RA组女性34名，男性12名，年龄(44.2±10.3)岁。健康人对照组女性40名，男性13名，年龄(48.1±12.5)岁。3组人群性别和年龄比差异无统计学意义，对于参加本研究项目均知情同意。

1.2 疾病活动程度评分方法由同一名风湿免疫科医生按照简化的28个关节部位(双肩、肘、腕、膝、掌指、近端指间关节)进行轻压触诊，分别记录有肿胀和压痛的关节个数。根据SJC、TJC和血沉(ESR)数值计算出DAS28，以DAS28评分评价疾病的活动程度。

1.3 标本采集空腹采集静脉血2～4 mL，1 h内分离血清，2 h内完成RF的检测。剩余血清分装至EP管中，每管120 μL，-80 ℃冻存，用于Eotaxin-1和抗CCP抗体的检测。

1.4 主要仪器和试剂 RF检测试剂盒(日本和光纯药工业株式会社),Eotaxin-1检测试剂盒(美国R&D公司)，抗CCP抗体试剂盒(上海科新生物公司)；7600-110全自动生化分析仪(日本日立公司)，酶联仪(美国Thermo Fisher Scientific公司)。

1.5 方法 RF采用免疫透射比浊法检测，RF≥20 U/mL判为阳性。血清Eotaxin-1和抗CCP抗体的浓度用ELISA检测，均严格按照说明书操作，设置标准曲线孔、阴性对照孔和空白孔。根据每板的标准曲线计算样本浓度。抗CCP抗体≥25 RU/mL判为阳性。

1.6 统计学分析用SPSS 13.0软件进行。3组计量资料比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD法，各指标间进行Spearman相关分析。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同人群血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗体水平 RA组患者血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗体水平均高于非RA组和健康人对照组，且差异具有统计学意义。见表1。

表1 不同人群血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗体水平

注：*，与对应非RA组及健康人对照组数据比较，P均<0.01；△，与对应健康人对照组比较，P均<0.01。

2.2 RA患者血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗体与临床SJC、TJC和DAS28评分的相关性 RA患者SJC、TJC和DAS28评分的中位数分别为6.35、9.77、3.12。其血清Eotaxin-1的浓度与其SJC、TJC和DAS28评分呈显著相关。RF水平仅与DAS28评分相关。抗CCP抗体与TJC和DAS28评分均相关。见表2。

表2 RA患者血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗体水平与临床肿胀关节计数、压痛关节计数和DAS28评分的相关性

项目SJCrPTJCrPDAS28评分rPEotaxin-1(pg/mL)0.482<0.010.508<0.010.806<0.01RF(U/mL)0.0290.8130.1240.3550.2680.042抗CCP抗体(RU/mL)0.1070.4250.2630.0460.486<0.01

3 讨论

Eotaxin-1又称CCL11，是嗜酸性粒细胞趋化因子家族中的一员，由成纤维细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、单核/巨噬细胞等一系列组织和炎症细胞分泌产生，对嗜酸性粒细胞有较强的趋化作用[3]。其受体为CCR3，广泛表达在T淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、树突状细胞表面。

Zhebrun等[4]发现，在RA的病理过程中血清Eotaxin-1浓度升高，这与本研究结果一致。其原因很可能是IL-1β对血清Eotaxin-1的调节作用。目前，IL-1β参与到RA的病理过程已被广泛接受[5]，而成纤维细胞是Eotaxin-1重要的细胞来源[6]。研究发现IL-1β可以促进RA的病理过程中的成纤维细胞释放Eotaxin-1[7]。

上调的Eotaxin-1结合关节组织细胞的CCR3受体，产生一系列的促炎症反应。作为具有较高特异性的嗜酸性粒细胞的趋化因子，Eotaxin-1诱导嗜酸性粒细胞移行、浸润到关节组织内并活化，释放大量的炎性因子，引发关节的渗出增加、肿胀、疼痛等临床症状。此外，Eotaxin-1还可以活化肥大细胞、嗜碱性粒细胞和T淋巴细胞[8]，释放的白三烯、花生四烯酸等炎性介质会进一步损伤关节组织细胞，加重关节的炎症反应。

最新的研究表明，在RA患者的血清和病变的关节滑膜液中，Eotaxin-1的浓度均升高，且升高的Eotaxin-1会进一步上调关节内成纤维样滑膜细胞的Eotaxin-1受体CCR3的表达，而这无疑放大了Eotaxin-1/CCR3系统在RA中的促炎效应[7]。此外，近年来发现在破骨细胞表面也表达CCR3受体[9-10]，Eotaxin-1很可能通过结合其表面的CCR3受体而激活破骨细胞，从而进一步促进RA的疾病活动。

目前，国外有研究已经关注到升高的血清Eotaxin-1水平对RA发作和活动度的提示作用。瑞典学者Kokkonen等[11]研究发现，在RA患者表现出临床症状之前，其血清Eotaxin-1水平已经开始升高，且这种升高对其风险评估有可靠的预测作用。此外，随着疾病的进展，血清Eotaxin-1水平会进一步升高[11]。此结果提示Eotaxin-1水平很可能对RA的疾病活动度有预测作用，与本文得出的结果一致。

抗CCP抗体作为RA诊断的血清学指标已广泛应用于临床，目前大部分研究认为，其水平与RA的疾病活动不存在相关性。然而，也有研究表明，抗CCP抗体的水平与RA中的诸多炎性因子(如IL-1β、IL-4、IL-17等)的水平相关，而这些炎性因子直接或间接发挥着促炎性作用，参与到RA的疾病发展中[11]。本研究发现抗CCP抗体水平与TJC和DAS28评分有相关性。要得出确切结论还需要大量的基础和临床研究。

综上所述，血清Eotaxin-1水平与RA的疾病活动度存在相关性。因此，RA患者的血清Eotaxin-1水平很可能作为监测RA活动度的新的血清学指标，为RA的诊疗提供新的研究视角和实践方向。

[1]Willemze A, Toes RE, Huizinga TW,etal. New biomarkers in rheumatoid arthritis[J]. Neth J Med, 2012, 70(9):392-399.

[2]Catrina AI, Deane KD, Scher JU. Gene, environment, microbiome and mucosal immune tolerance in rheumatoid arthritis[J]. Rheumatology(Oxford), 2016, 55(3): 391-402.

[3]Wu D, Zhou J, Bi H,etal. CCL11 as a potential diagnostic marker for asthma?[J]. J Asthma, 2014, 51(8): 847-854.

[4]Zhebrun DA, Totolyan AA, Maslyanskii AL,etal. Synthesis of some CC chemokines and their receptors in the synovium in rheumatoid arthritis[J]. Bull Exp Biol Med, 2014, 158(2): 192-196.

[5]Ruscitti P, Cipriani P, Carubbi F,etal. The role of IL-1beta in the bone loss during rheumatic diseases[J]. Mediators Inflamm, 2015, 2015: 782382.

[6]Diny NL, Hou X, Barin JG,etal. Macrophages and cardiac fibroblasts are the main producers of eotaxins and regulate eosinophil trafficking to the heart[J]. Eur J Immunol, 2016, 46(12): 2749-2760.

[7]Liu X, Zhang H, Chang X,etal. Upregulated expression of CCR3 in rheumatoid arthritis and CCR3-dependent activation of fibroblast-like synoviocytes[J]. Cell Biol Toxicol, 2016.

[8]Amerio P, Frezzolini A, Feliciani C,etal. Eotaxins and CCR3 receptor in inflammatory and allergic skin diseases: therapeutical implications[J]. Curr Drug Targets Inflamm Allergy, 2003, 2(1):81-94.

[9]Lean JM, Murphy C, Fuller K,etal. CCL9/MIP-1 gamma and its receptor CCR1 are the major chemokine ligand/receptor species expressed by osteoclasts[J]. J Cell Biochem, 2002, 87(4): 386-393.

[10]Liu YZ, Dvornyk V, Lu Y,etal. A novel pathophysiological mechanism for osteoporosis suggested by an in vivo gene expression study of circulating monocytes[J]. J Biol Chem, 2005, 280(32): 29011-29016.

[11]Kokkonen H, Soderstrom I, Rocklov J,etal. Up-regulation of cytokines and chemokines predates the onset of rheumatoid arthritis[J]. Arthritis Rheum, 2010, 62(2):383-391.

(本文编辑：刘群)

Correlations of Eotaxin-1, rheumatoid factor and anti-cyclic citrullinated peptide antibody with the activity of rheumatoid arthritis

LIChuan-li1,WANGYan-qun2,GUOMiao3

(1.DepartmentofLaboratoryMedicine,ZiboMiningGroupCo.,LTD.CentralHospital,Zibo255120,Shandong; 2.DepartmentofLaboratoryMedicine,JinanMilitaryGeneralHospital,Jinan250000,Shandong; 3.DepartmentofLaboratoryMedicine,theFirstAffiliatedHospitalofJinzhouMedicalUniversity,Jinzhou121001,Liaoning,China)

Objective To investigate the correlations of Eotaxin-1, rheumatoid factor (RF) and anti-cyclic citrullinated peptide (CCP) antibody with the activity of rheumatoid arthritis (RA). Methods A total of 58 patients with early RA, 46 patients without RA and 53 healthy controls from our hospital during December 2014 and December 2015 were enrolled in our study. The activity of RA was evaluated by the swollen joint count (SJC), tender joint count (TJC) and DAS28 score. The levels of serum Eotaxin-1 and anti-CCP antibody were detected by ELISA and serum RF levels were determined by the immunological turbidimetry. The comparisons of serum Eotaxin-1, anti-CCP antibody and RF levels between different groups were performed with ANOVA and their correlations with SJC, TJC and DAS28 score were analyzed by Spearman rank correlation. Results The levels of Eotaxin-1, anti-CCP antibody and RF in RA patients were (96.02±21.07) pg/mL, (183.42±87.45) U/mL and (119.09±62.30) RU/mL, respectively, which were significantly higher than those in the patients without RA and healthy controls (P<0.01). The levels of serum Eotaxin-1 in RA patients were significantly related to TJC, SJC and DAS28 score (P<0.01), while the levels of anti-CCP antibody were related to TJC and DAS28 score. The levels of RF were only related to DAS28 score. Conclusion The levels of serum Eotaxin-1 and anti-CCP antibody in RA patients are significantly correlated with the activity of RA, which may be new serum markers to monitor the activity of RA.

rheumatoid arthritis; Eotaxin-1; anti-cyclic citrullinated peptide antibody; swollen joint count; tender joint count

10.13602/j.cnki.jcls.2017.01.07

李传利，1985年生，男，主管技师，大学本科，从事免疫学检验工作，E-mail:lichuanli972@126.com。

R446.6

2016-10-21)