山椒子中化学成分的研究

杜鹏　胡杨枝荣　张万畅

[摘要] 目的 研究山椒子叶子中的化学成分。 方法 采用95%乙醇对山椒子叶子进行提取，乙醇浸膏以水稀释后分别用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，得到石油醚和乙酸乙酯萃取部位。各萃取部位采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶过滤等多种色谱方法进行化学成分的分离、纯化，化合物结构鉴定采用核磁数据分析及与文献数据对比。 结果 从山椒子的叶子中共分离得到8个化合物，经鉴定为：β-谷甾醇（Ⅰ）、glut-5-en-3-ol（Ⅱ）、蒲公英赛醇（Ⅲ）、spathulenol（Ⅳ）、人参炔醇（Ⅴ）、苯甲酸（Ⅵ）、山柰酚（Ⅶ）和（-）-clovane-2，9-diol（Ⅷ）。 结论 化合物Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ为首次从该植物中分离得到。

[关键词] 山椒子；番荔枝科；化学成分；倍半萜

[中图分类号] R931.71 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）01（c）-0020-03

[Abstract] Objective To investigate the chemical constituents of Uvaria grandiflora. Methods The leaves of Uvaria grandiflora was extracted with 95% EtOH to give ethanol extracts， which was further diluted by H2O and extracted with petroleum ether and EtOAc， respectively. The petroleum ether and EtOAc extracts afforded by extraction were isolated and purified by different chromatography， such as silica gel and Sephadex LH-20 column chromatography. The structures of isolated compounds were identified by NMR data analysis and comparison. Results Eight known compounds were obtained and identified as β-sitosterol （Ⅰ）， glut-5-en-3-ol （Ⅱ）， taraxerol （Ⅲ）， spathulenol （Ⅳ）， panaxynol （Ⅴ）， benzoic acid （Ⅵ）， kaempferol （Ⅶ） and （-）-clovane-2，9-diol （Ⅷ）. Conclusion CompoundsⅡ， Ⅳ， Ⅴ， Ⅶ， Ⅷ are isolated from this plant for the first time.

[Key words] Uvaria grandiflora； Annonaceae； Chemical composition； Sesquiterpenoids

山椒子（Uvaria grandiflora Roxb.），别名川血乌、大花紫玉盘、葡萄木等，为番荔枝科紫玉盘属植物攀援灌木，主要分布于我国广东南部和海南等地[1]，广西亦有分布[2]。番荔枝科植物因含有一类结构新颖的抗肿瘤化学成分番荔枝内酯（annonaceous acetogenins）而受到广泛关注，已有多种该科植物进行了化学成分及生物活性的研究[3-5]。山椒子的根在民间常被用于咽喉肿痛的治疗，之前的药理活性筛选则发现该植物具有较好的抗肿瘤活性，在随后对该植物的化学成分研究中分离得到番荔枝内酯类、多氧取代环己烯类、芳香类和酰胺类等多种类型化合物[6-16]。本课题组进一步对其化学成分进行研究，从山椒子叶中分离得到8个化合物（图1），分别鉴定为β-谷甾醇（Ⅰ）、glut-5-en-3-ol（Ⅱ）、蒲公英赛醇（Ⅲ）、spathulenol（Ⅳ）、人参炔醇（Ⅴ）、苯甲酸（Ⅵ）、山柰酚（Ⅶ）和（-）-clovane-2，9-diol（Ⅷ），其中，化合物Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

核磁共振仪（美国Varian公司，Unity INOVA 400/54）。色谱用硅胶G和H（青岛海洋化工厂），Sephadex LH-20（美国GE）。

山椒子叶于2013年6月采自广西，由贵州医科大学药学院生药学教研室韦欣副教授鉴定为紫玉盘属山椒子（U.grandiflora）。

2 方法与结果

2.1 提取与分离

山椒子树叶8.8 kg，用95%乙醇回流提取3次，每次30 L，减压浓缩得到乙醇浸膏。将浸膏悬浮于水中得混悬液13 L，依次用等体积石油醚（13 L）﹑乙酸乙酯（13 L）分别萃取3次，减压浓缩得到石油醚浸膏A（108 g）和乙酸乙酯浸膏B（150 g）。

A部分经硅胶柱层析，石油醚∶乙酸乙酯（50∶1～1∶1）梯度洗脱得到10个组分（A1～A10）。A5经硅胶柱层析得到组分A5-1和A5-2。A5-1经乙酸乙酯重结晶得到化合物Ⅱ（38 mg），A5-2经硅胶柱层析和制备薄层层析得到化合物Ⅴ（50 mg）。A6经硅胶柱层析（石油醚∶丙酮为20∶1）得到组分A6-1和A6-2。A6-1经制备薄层层析（氯仿∶丙酮为60∶1）和Sephadex LH-20葡聚糖层析（氯仿∶甲醇为2∶1）得到化合物Ⅳ（17 mg）。A7直接析出化合物Ⅲ（18 mg）。A8经反复硅胶柱层析及Sephadex LH-20葡聚糖层析得到化合物Ⅵ（9 mg）。A10直接析出化合物Ⅰ（40 mg）。

B部分经硅胶柱层析，氯仿∶甲醇（90∶1～2∶1）梯度洗脱得到13个组分（B1～B13）。B5经过反复硅胶柱层析，Sephadex LH-20葡聚糖层析及环己烷重结晶得到化合物Ⅷ（3 mg）；B6再經过反复硅胶柱层析（环己烷∶乙酸乙酯为4∶1），Sephadex LH-20葡聚糖层析（氯仿∶甲醇为2∶1）得到化合物Ⅶ（12 mg）。

2.2 结构鉴定

2.2.1 化合物Ⅰ 白色针状结晶（石油醚-乙酸乙酯）。mp 141～143℃。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：0.67（3H，s，H-18），0.79（3H，d，J = 6.6 Hz，H-27），0.81（3H，d，J = 7.9 Hz，H-26），0.84（3H，t，J = 7.8 Hz，H-29），0.92（3H，d，J = 6.1 Hz，H-21），1.00（3H，s，H-19），3.51（1H，m，H-3），5.33（1H，br s，H-6），数据与文献[17]一致。化合物Ⅰ与β-谷甾醇标准品共薄层，Rf值相同，与β-谷甾醇标准品混合后熔点未发生变化，故鉴定化合物Ⅰ为β-谷甾醇。

2.2.2 化合物Ⅱ 白色针状晶体（乙酸乙酯）。1H-NMR（400 MHz，CDCl3） δ：0.84，0.95，0.98，1.00，1.04，1.09， 1.14，1.16（each 3H，s，Me×8），3.46（1H，br s，H-3），5.62（1H，d，J = 5.8 Hz，H-6）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3） δ：23.6（C-1），18.2（C-2），76.3（C-3），39.3（C-4），141.6（C-5），122.0（C-6），27.8（C-7），43.0（C-8），34.8（C-9），49.7（C-10），34.6（C-11），30.3（C-12），37.8（C-13），40.8（C-14），32.0（C-15），36.0（C-16），30.0（C-17），47.4（C-18），35.0（C-19），28.2（C-20），33.1（C-21），38.9（C-22），28.9（C-23），25.4（C-24），16.2（C-25），18.4（C-26），19.6（C-27），32.4（C-28），34.5（C-29），32.0（C-30）。以上数据与文献[18]对照一致，故鉴定化合物Ⅱ为glut-5-en-3-ol。

2.2.3 化合物Ⅲ 白色粉末。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：0.80，0.82，0.90，0.90，0.92，0.95，0.97，1.08（each 3H，s，Me×8），1.89-2.04（2H，m，H-2），3.19（1H，dd，J = 4.4，10.8 Hz，H-3），5.53（1H，dd，J = 3.0，8.0 Hz，H-15）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3） δ：37.7（C-1），27.1（C-2），79.0（C-3），38.9（C-4），55.5（C-5），18.8（C-6），35.1（C-7），38.7（C-8），49.2（C-9），37.5（C-10），17.5（C-11），36.6（C-12），38.0（C-13），158.0（C-14），116.8（C-15），37.7（C-16），38.9（C-17），48.7（C-18），41.3（C-19），28.0（C-20），33.7（C-21），33.1（C-22），28.8（C-23），15.4（C-24），15.4（C-25），29.9（C-26），25.9（C-27），29.8（C-28），33.3（C-29），21.3（C-30）。以上数据与文献[19]对照一致，故鉴定化合物Ⅲ为蒲公英赛醇（taraxerol）。

2.2.4 化合物Ⅳ 无色油状物。1H-NMR（400 MHz，CDCl3） δ：0.46（1H，dd，J = 9.5，11.2 Hz，H-1），0.71（1H，m，H-2），1.04（3H，s，H-13），1.05（3H，s，H-12），1.28（3H，s，H-15），4.66（1H，br s，H-14a），4.69（1H，br s，H-14b）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3） δ：29.9（C-1），27.4（C-2），24.7（C-3），38.8（C-4），153.4（C-5），53.4（C-6），26.7（C-7），41.7（C-8），80.9（C-9），54.3（C-10），20.2（C-11），28.6（C-12），16.3（C-13），106.2（C-14），26.0（C-15）。數据与文献[20]一致，故鉴定化合物Ⅳ为spathulenol。

2.2.5 化合物Ⅴ 无色油状物。1H NMR（400 MHz，CDCl3） δ：0.88（1H，t，J = 6.5 Hz，H-17），2.02（2H，q，J = 7.1 Hz，H-11），3.03（2H，d，J = 6.8 Hz，H-8），4.91（1H，d，J = 5.2 Hz，H-3），5.23（1H，d，J = 10.1 Hz，H-1），5.34-5.40（1H，m，H-9），5.46（1H，d，J = 17.0 Hz，H-1），5.49-5.54（1H，m，H-10），5.93（1H，ddd，J = 5.3，10.1，16.8 Hz，H-2）。13C NMR（100 MHz，CDCl3） δ：117.0（C-1），136.1（C-2），63.5（C-3），74.2（C-4），71.2（C-5），64.0（C-6），80.2（C-7），17.6（C-8），121.9（C-9），133.0（C-10），27.1（C-11），29.2（C-12），29.1（C-13），29.1（C-14），31.8（C-15），22.6（C-16），14.0（C-17）。数据与文献[21]一致，故鉴定化合物Ⅴ为人参炔醇（panaxynol）。

2.2.6 化合物Ⅵ 白色粉末。mp 122～124℃。1H-NMR（400 MHz，CDCl3） δ：7.47（2H，t，J = 7.3 Hz，H-2和H-6），7.61（1H，t，J = 7.3 Hz，H-4），8.12（2H，d，J = 7.3 Hz，H-3和H-5），数据与文献[22]一致。与苯甲酸对照品共薄层Rf值相同，与苯甲酸标准品混合后熔点未发生变化，故鉴定化合物Ⅵ为苯甲酸。

2.2.7 化合物Ⅶ 黄色粉末。1H NMR（400 MHz，CD3OD）δ：6.16（1H，s，H-6），6.38（1H，s，H-8），6.89（1H，d，J = 8.2 Hz，H-3'，5'），8.07（2H，d，J = 8.1 Hz，H-2'，6'）。13C NMR（100 MHz，CD3OD） δ：148.0（C-2），137.1（C-3），177.3（C-4），162.5（C-5），99.2（C-6），165.5（H-7），94.4（C-8），160.5（C-9），104.5（C-10），123.7（C-1'），130.6（C-2'），116.3（C-3'），158.2（C-4'），116.3（C-5'），130.6（C-6'）。数据与文献[23]一致，故鉴定化合物Ⅶ为山柰酚（kaempferol）。

2.2.8 化合物Ⅷ 白色粉末。1H-NMR（400 MHz，CDCl3） δ：0.86（3H，s，H-13），0.96（3H，s，H-15），1.04（3H，s，H-14），1.05（3H，s，H-12），1.28（3H，s，H-15），3.33（1H，br s，H-9），3.79（1H，dd，J = 5.7，10.0 Hz，H-2）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3） δ： 44.2（C-1），80.9（C-2），47.6（C-3），37.2（C-4），50.4（C-5），20.6（C-6），33.1（C-7），34.7（C-8），75.0（C-9），26.0（C-10），26.3（C-11），35.5（C-12），25.4（C-13），31.4（C-14），28.3（C-15）。数据与文献[24]一致，故鉴定化合物Ⅷ为（-）-clovane-2，9-diol。

3 讨论

本研究从山椒子叶子的乙醇提取液中分离得到了8个化合物，涉及三萜、倍半萜、黄酮及聚炔醇类，结构类型多样，其中化合物Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ为首次从该植物中分离得到。人参炔醇是聚炔醇类化合物的一种，具有抗癌、抗菌和神经保护等作用，广泛分布于五加科、伞形科、菊科、桔梗科、木犀科等植物中[25]，此次是首次从番荔枝科植物中分离得到该化合物。此外，倍半萜类化合物也是首次从山椒子中分离得到。此次实验结果丰富了山椒子所含化学成分的类型，有利于对山椒子的深入了解。

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（收稿日期：2016-10-11 本文编辑：程 铭）