高效液相色谱法测定阿卡波糖口崩片的含量

杨国伟

（山西省食品药品检验所，山西 太原 030001）

阿卡波糖是一种新型口服降糖药[1]。在肠道内竞争性抑制葡萄糖甙水解酶。降低多糖及蔗糖分解成葡萄糖，使糖的吸收相应减缓，因此可具有使饭后血糖降低的作用。中国药典2015二部年版仅收载了原料、普通片剂[2]。本文采用高效液相色谱法测定阿卡波糖口崩片含量，方法简便，重复性好。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津20A高效液相色谱仪，带二极管阵列检测器；梅特勒MS105du型十万分一电子天平

1.2 试药

阿卡波糖对照品（批号100808-201203，含量95.8%，中国食品药品检定研究院）；阿卡波糖口崩片（三批，规格为100 mg）；乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾、无水磷酸氢二钠为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

用氨基硅烷键合硅胶为填充剂（Welch Ultimate XB-NH2柱，250 mm×4.6 mm×5 μm）；以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾600 mg与无水磷酸氢二钠279 mg，加水溶解并稀释至1000 ml）-乙腈（30∶70）为流动相；流速为每分钟2.0 ml；检测波长为210 nm；柱温35℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取阿卡波糖对照品适量，加水溶解并定量稀释至每1 ml含1 mg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

取阿卡波糖口崩片20片，研细，取适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1 ml中约含1 mg的溶液，即得。

2.3 系统适用性实验

取阿卡波糖原料200 mg，置10 ml量瓶中，加水少量使溶解，加0.1 mol/L氢氧化钠溶液1 ml，混匀，室温放置1小时，加0.1 mol/L盐酸溶液1 ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。

精密量取上述溶液10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1、2、3

2.4 线性关系

精密称取阿卡波糖对照品100 mg，置10 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 ml，分别置10 ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，照含量测定色谱条件，精密量取10 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明阿卡波糖质量浓度（C）在0.2～1.4 mg·mL-1范围内，与色谱峰面积（A）呈良好的线性关系，回归方程：A=907526C+3681.1，r=0.9995。

图1 系统适用性色谱图

图2 阿卡波糖对照品色谱图

图3 阿卡波糖口崩片样品图

2.5 精密度实验

取线性试验项下浓度为1.0 mg/ml的对照品溶液，平行进样6针，记录色谱图，结果表明对照品溶液平行进样6针，主峰峰面积的RSD=0.36%，进样精密度良好。

2.6 稳定性实验

照含量测定方法配制对照品溶液与供试品溶液，室温放置，于0、2、4、8、12小时分别精密量取10 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。计算主峰峰面积的RSD值，结果表明对照品溶液与供试品溶液室温放置12小时，主峰峰面积的RSD均小于1.0%，对照品溶液与供试品溶液室温12小时内稳定。

2.7 检出限实验

取阿卡波糖对照品适量，用水制成浓度约10 µg/ml的溶液进行预试验，结果主药信噪比约为20∶1，根据预试验结果，1.5 µg/ml的阿卡波糖对照品溶液，信噪比（S/N）＞3∶1，检测线为0.015 µg。

2.8 回收率实验

按标示量的80%、100%、120%制备样品供试溶液，实验中称取阿卡波糖对照品40 mg、50 mg、60 mg各3份，分别精密称定，分别置50 ml量瓶中，分别加入空白辅料150 mg，加水适量，振摇使阿卡波糖溶解，用水稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试品溶液；照含量测量方法测定供试品溶液中阿卡波糖的量，计算回收率，结果见表1。

表1 含量测定回收率试验结果

2.9 耐用性实验

为了研究液相色谱条件的微笑变化对实验结果的影响程度，进行耐用性实验考察因素有流速、柱温、流动相pH值，精密量取对照品溶液、供试品溶液与系统适用性溶液分别在不同条件下注入色谱仪，按外标法计算以阿卡波糖为标示量的百分含量。结果见表2。

2.10 样品含量测定

取三批样品，照含量测定方法进行测定，结果见表3。

表2 含量测定耐用性试验结果表

表3 中试批样品含量测定结果表

结果，本品中试样品含量测定结果均在95%～105%，符合规定。

3 讨 论

由于阿卡波糖分子式中存在多个羟基，极性较强，采用传统的十八烷基键合硅胶色谱柱，保留能力较差，故选择氨基柱，以增强阿卡波糖在色谱柱的保留能力，提高分离能力和理论塔板数[3]。阿卡波糖只有紫外末端吸收，选择210 nm波长进行检测。在实验过程中我们选择不同比例的流动相进行分析，磷酸盐缓冲液：乙腈（30∶70）既满足系统适用性实验的要求，同时分析时间最短。该方法可以应用与阿卡波糖口崩片的质量控制。

[1] 尹灵富.阿卡波糖含量检测方法的试验分析[J].湖南农机,2012,(09).

[2] 梁现蕊,张会晨,何小嫒,等.阿卡波糖中杂质的分离富集方法研究[J].浙江工业大学学报,2017,(03).

[3] 耿银银,许丽晓,欧定莲,等.亲水作用色谱法测定阿卡波糖含量[J].药物分析杂志,2017(05).