前列腺素受体亚型FP—V2与早孕药物流产结局的分析

马超　冯文华　韩维田

[摘要]目的 比较FP、FP-V1和FP-V2在完全流产患者与不完全流产患者早孕蜕膜中mRNA的表达差异。方法 选取2013年6月～2015年3月辽宁省计划生育科研院门诊主动要求药物流产终止正常妊娠的50例患者作为研究对象，根据流产是否完全分为完全组（30例）和不完全组（20例）。采用实时定量PCR方法检测两组早孕蜕膜中FP、FP-V1和FP-V2的表达差异。结果 不完全组早孕蜕膜中的FP和FP-V2的mRNA表达显著高于完全组，差异有统计学意义（P<0.05）。两组的FP-V1表达比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 人早孕蜕膜FP-V2 mRNA高表达可能与不完全流产相关。

[关键词]FP-V2亚型；药物流产；蜕膜；不完全流产；早孕

[中图分类号] R719.3+1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）01（a）-0009-04

米非司酮配伍米索前列醇终止早孕最早应用于1988年并且已经在31个国家广泛开展[1]。在中国，米非司酮配伍米索前列醇的完全流产率可以达到93%左右[2]，但是仍有部分妇女遭受流产不全带来的困扰，存在着流血时间长、生殖系统感染和贫血等一系列问题[3]。米非司酮是一种合成类醇，具有抗孕酮、糖皮质激素和轻度抗雄激素特性，其靶结合位点是孕激素受体PR[4]。较早的研究认为，米非司酮抗早孕的机制是绒毛膜和蜕膜组织细胞失去孕激素的支持，使得蜕膜组织和绒毛滋养细胞发生变性、坏死，最终导致胚胎死亡而终止妊娠[5]。最近的研究发現，米非司酮可以使蜕膜组织中孕激素受体（PR）表达下降[6]，人绒毛促性腺激素（β-HCG）[7]、雌二醇（E2）和睾酮（T）均持续增加；同时米非司酮还可以下调蜕膜中的转化生长因子-β（TGF-β）与其受体的转录，提高血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平[8]。卢士燕等[9]报道，应用米非司酮后，CD56+特别是CD16+表达明显增高，提示NK细胞表达增高，杀伤活性增强，在药物流产中发挥一定作用。

总结以上的研究来看，药物流产是一个多方面、多因素参与的过程。药物流产虽然已经在临床开展了三十余年，但其终止早孕的机制仍不清楚。前列腺素受体在哺乳动物生殖过程中发挥着关键而复杂的调节作用。前列腺素参与卵泡排出的过程[10]，在胚胎植入过程中发挥重要作用[11]，在生产过程中多种前列腺素受体分别表达于子宫和子宫肌层来发挥各自不同的生物学作用[12]。虽然前列腺素受体在生殖领域发挥复杂的作用，但是前列素受体在药物流产过程中的作用未见有报道。本研究选取我院的正常早孕、且主动要求选择药物流产终止妊娠的健康妇女作为研究对象，采用实时定量PCR技术检测早孕蜕膜中FP、FP-V1和FP-V2表达的差异，探讨其与药物流产结局的关系，以便进一步为研究药物流产的机制提供思路，为流产不全患者减少痛苦和困扰。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2013年6月～2015年3月辽宁省计划生育科学研究院门诊主动要求药物流产终止正常妊娠的50例患者作为研究对象，所有患者在组织收集前均签署知情同意书。蜕膜取自正常妊娠<49 d、经B超诊断为宫内妊娠、尿液妊娠试验确诊为阳性的健康药物流产患者。根据流产是否完全分为完全组（30例）和不完全组（20例），两组的一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2分组

1.2.1完全组 在米非司酮和米索前列醇用药6 h内，孕囊能够完全排出。

1.2.2不完全组 在6 h内不能排出孕囊或孕囊排出不完整。

1.3仪器及试剂

PCR仪（美国应用系统生物公司，Veriti 9902）；实时定量PCR仪（美国应用系统生物公司，ABI7000）；组织RNA提取试剂盒（北京艾德莱生物科技有限公司，RN05）；逆转录酶（TAKARA公司，DRR047S）；SYBR Premix Ex TagTMⅡ（TAKARA公司，DRR037A）。

1.4组织RNA提取

按照艾德莱组织RNA试剂盒的操作流程进行提取，提取的RNA置于-80℃冰箱备用。

1.5反转录及实时定量

反转录以组织RNA为模板，反应体系为：5×Buffer 2 μl，Oligo dT Primer 0.5 μl，Random 6 mers 0.5 μl，RT Enzyme 0.5 μl，RNA 500 ng，RNase Free dH2O补足至10 μl。37℃ 30 min，85℃ 15 s。

以反转录的cDNA为模板，实时定量PCR的反应体系为：SYBR Prime Ex TaqTM 10 μl，PCR正反向引物各0.8 μl，ROXⅡ 0.4 μl，ddH2O 7 μl。反应参数为95℃ 30 s，95℃ 15 s，60℃ 31 s，共40个循环。GAPDH为内参，采用2-△△CT相对定量的方法进行计算。

1.6统计学分析

采用SPSS 17.0 统计学软件对数据进行分析，对定量PCR结果采用单因素ANOVA分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 FP-V2在人早孕蜕膜中的表达

随机选取4例患者蜕膜组织，采用RT-PCR检测方法检测到FP-V2在人早孕蜕膜组织均有表达（图1）。

2.2 FP、FP-V1和FP-V2在完全组和不完全组药物流产蜕膜组织中的表达

不完全流产组蜕膜中FPmRNA（8.35±0.28）的表达明显升高，是完全组（3.17±0.22）的2.63倍（P<0.05）（图2A）。FP-V1 mRNA在完全组和不完全组蜕膜中的表达比较，差异无统计学意义（P>0.05）（图2B）。不完全流产组蜕膜中FP-V2 mRNA（11.32±0.88）的表达明显升高，是完全组（4.51±0.46）的2.51倍（P<0.05）（图2C）。

3讨论

米非司酮配伍米索前列醇是一个成熟、有效的终止早孕的方法，但是仍有部分妇女承受药物流产不完全（5%）、流血过多（3%）和继续妊娠（1%）的困扰[13]。在米非司酮配伍米索前列醇流产过程中，阴道出血的风险也在升高[14]。虽然药物流产在临床中被广泛应用，但是其是一个多因素参与的过程，主要机制仍不明确。此外，也有多种临床标准如子宫内膜厚度、药物流产次数和β-hCG[15]等来判断和预测流产的结局，但是，仍未找到一个准确、可靠的指标来指导临床，因此，寻找一个明确的因素来预测药物流产的结局至关重要。本研究拟从药物流产的敏感性出发，来研究与药物流产敏感性相关的因子，探索药物流产的机制，更好地为临床解决实际问题。

蜕膜是母-胎界面来自母体的重要组成部分，具有广泛的生物学功能，除了具有营养支持作用外，还具有合成分泌、免疫调节等生物学功能，在妊娠过程中具有重要意义。同时蜕膜是PGF2α合成和代谢的主要场所，并且蜕膜也是其发挥作用的场所[16]。在早期妊娠过程中，米非司酮可以使PGF2α的合成增多，代谢减少。前列腺素FP受体子宫内膜异位症的血管生成增加[17]，生产过程中的子宫肌层增加[18]，前列腺素PGF2α在生产过程中是一个重要的生产启动因素，但是在药物流产方面未见报道。妊娠生产过程和药物流产都是妊娠终止过程，前列腺素FP受体在生产过程有重要作用，那么从前列腺素FP受体入手，找到一个可以预知药物流产结局的因素，可以为更好地研究和理解药物流产机制提供思路。

前列腺素受體FP包含FP-V1和FP-V2两个亚型，FP-V1亚型是传统亚型，目前对其研究比较透彻；但是FP-V2亚型是一个新发现亚型，其功能几乎未见报道。本研究选取4例早孕蜕膜，采用RT-PCR方法检测到早孕蜕膜中均有FP-V2的表达，这与Hay等[19]的研究结果一致，提示FP-V2在人早孕蜕膜组织中有表达。其在蜕膜中大量特异性表达提示FP-V2可能参与妊娠的一些生理过程。此外，本研究还检测到FP和FP-V2在不完全流产组蜕膜中的表达要明显高于完全流产组，而FP-V1在两组中无明显差别，提示FP-V2在蜕膜中表达的升高与药物流产的不完全有一定关联性，这可能是影响药物流产结局的一个因素。同时，总体的前列腺素FP受体在不完全组中的表达也升高，而FP-V1亚型的表达则无明显变化，提示FP受体在不完全流产蜕膜中的这个升高可能也是由FP-V2的升高引起。

综上所述，米非司酮配伍米索前列醇终止早孕是一个多因素参与的过程，在药物流产的不完全组蜕膜中FP-V2表达升高，在完全组蜕膜中表达下降，提示FP-V2对于药物流产过程是一个负向调节因素，其升高不利于药物流产的完全性。关于FP-V2与药物流产结局的关联可以为更好地研究药物流产机制提供思路和方向，同时对于FP-V2功能的进一步探究可能会药物流产不完全提供一个潜在的分子靶点和诊疗依据。

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（收稿日期：2016-10-15 本文編辑：祁海文）