气相色谱法测定薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂中薄荷脑的含量

康安锋，李新方，乐李敬，詹洁琼，马志强，张欣荣，杨 峰

·基础医学·

·论著·

气相色谱法测定薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂中薄荷脑的含量

康安锋，李新方，乐李敬，詹洁琼，马志强，张欣荣，杨 峰

目的建立薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂中薄荷脑含量的测定方法。方法采用气相色谱法测定。色谱柱为AgilentDB-WAX毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，柱温为120 ℃，检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为260 ℃，进样口温度为220 ℃，进样量为1 μl，载气为氮气，柱流速为1.0 ml/min。结果薄荷脑质量浓度在0.02～0.20 mg/ml范围内具有良好的线性关系(r=0.999 1)；精密度、重复性、稳定性试验的RSD<2%；加样回收率为95.1%～103.4%，RSD为2.3%(n=6)。结论该方法操作简便、结果可靠、重复性好，可用于测定薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂中薄荷脑含量。

气相色谱法；原位凝胶；薄荷脑；含量测定

目前国内上市的专门针对干燥性鼻炎和鼻出血的治疗药物比较少。薄荷脑又名薄荷冰，是由唇形科植物薄荷中提取的白色晶体，作用于皮肤黏膜，具有清凉、止痒、抗菌的作用[1]。西北高原地区部队医院如解放军第一五医院等，临床治疗上经常使用院内制剂复方薄荷脑滴鼻液治疗干燥性鼻炎和鼻出血，治疗效果良好，深受官兵欢迎。但是该复方滴鼻液的溶剂是石蜡油，使用不便，不良反应较大，而且滴鼻液难以定量、生物利用度低，这些缺点限制了它的使用。原位凝胶具有溶液剂和凝胶剂双重优点[2]，本文选用离子型原位凝胶去乙酰结冷胶[3](DGG)为载体材料，薄荷脑为主要有效药物，制备了薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂。为了检测制备的薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂的质量，笔者参考相关文献[4-6]，确定采用气相色谱法(GC)测定薄荷脑的含量，以期为提高我军官兵生活质量及卫勤保障能力提供有力支持。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Thermofish Trace GC Ultra气相色谱仪(美国赛默飞世尔公司)；气相色谱柱(Agilent DB-WAX 30 m×0.25 mm×0.25 μm毛细管柱)；自动进样器(Agilent technologies)；FID检测器(Agilent technologies)；Xcalibur色谱工作站；电子分析天平(万分之一，瑞士梅特勒—托利多仪器有限公司)；超纯水系统Nanopure(美国赛默飞科技公司)。

1.2 药品与试剂

薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂(批号：160901，160902，160903，实验室自制)；薄荷脑对照品(批号：110728，中国药品生物制品检定所)；去离子水(18.2 MΩ，自制)；对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯(国药集团化学试剂公司)；低乙酰结冷胶(Sigma公司)；吐温-80(中国医药集团上海化学试剂公司)；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Agilent DB-WAX毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，柱温为120 ℃，进样口温度为220 ℃，检测器为FID，检测器温度为260 ℃，载气为氮气，柱流速为1.0 ml/min，进样量为1 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 取薄荷脑对照品10 mg，精密称定，置10 ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀即得。

2.2.2 供试品溶液 精密量取薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂1 ml，置于10 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀即得。

2.2.3 阴性对照溶液 按照薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂处方，不加薄荷脑，用相同制备工艺制成不含薄荷脑喷雾剂样品，再按“2.2.2”方法，制得阴性对照溶液。

2.3 专属性考察

取2.2.1项下对照品溶液，精密吸取1.0 ml，置于10 ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度并混匀。精密吸取上述稀释后的对照品储备液，“2.2.2”和“2.2.3”项下溶液各1 μl，按照“2.1”项下色谱条件测定，结果见图1。对照品(图1A)与供试品(图1B)在相同保留时间(t=3.8 min)有色谱峰出现，而阴性对照(图1C)在此保留时间无色谱峰。

注：A、B、C分别为3种溶液

2.4 线性关系考察

精密吸取“2.2.1”项下对照品贮备液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。按“2.1”项下色谱条件，精密吸取上述不同浓度的稀释液各1 μl，进样测定。以对照品浓度(X，μg/ml)为横坐标，对照品峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y=78 769X-363 024，r=0.999 1。结果表明薄荷脑在0.02～0.20 mg/ml质量浓度范围内具有良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取“2.2.1”项下对照品贮备液1.0 ml，置于10 ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取1 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，连续操作5次。薄荷脑峰面积的RSD为1.15%(n=5)，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密量取“2.2.2”项下供试品溶液适量，室温放置，按“2.1”项下色谱条件分别于0、2、4、6、12 h进样测定。薄荷脑峰面积的RSD为1.5%(n=6)，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

精密量取批号为20160901样品适量，按“2.2.2”项下方法制备5份供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件，精密吸取1 μl，分别进样测定，计算薄荷脑的含量，结果RSD为1.59%(n=5)，表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密量取批号为20160901的薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂0.5 ml，共6份，分别置于10 ml量瓶中，精密加入“2.2.1”项下对照品溶液0.5 ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下色谱条件进样测定并计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果(n=6)

2.9 样品含量测定

取3批薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂(批号分别为20160901、20160902、20160903)按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，每批配制3份，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，通过回归方程计算样品含量，结果分别为0.947、0.972、0.976 mg/ml。

3 讨论

通过前期制剂学研究，采用去乙酰结冷胶制备出适用于高原气候特点的离子敏感原位凝胶喷雾剂，解决了原来的复方薄荷脑滴鼻液存在的使用不便、难以定量等缺点，能起到局部保持鼻腔黏膜湿润，防治兼顾，有效解决高原地区由于空气干燥、寒冷、多风沙、水分蒸发过快引起的鼻黏膜毛细血管破裂出血高发的问题。制剂中的主要成分薄荷脑易挥发，在制备时需使用密闭性良好的容器，测定含量时，操作要迅速，尽量减少薄荷脑在生产、测量过程中的损失。薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂成分较简单，没有干扰成分，不存在分离干扰情况，所以本文选用固定柱温测定薄荷脑含量[7-8]。色谱图结果发现色谱峰拖尾因子在0.95～1.05范围内，峰型对称，且基线平稳。喷雾剂样品经过“2.2.2”项下操作方法处理时，会有凝胶出现，需充分超声，减少凝胶对薄荷脑的黏附。为了防止高分子材料去乙酰结冷胶对色谱柱的损害，在进气相色谱仪前，需要离心所得的稀释液，取上清液进样测定。

通过实验，建立了气相色谱法测定薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂中薄荷脑含量，该方法操作简便、结果可靠、专属性强，研究表明不同批次薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂样品中薄荷脑含量变化较小，质量稳定可控。综上所述，此方法可以作为薄荷脑鼻用原位凝胶喷雾剂的质量控制方法。

[1] 肖佩玉，卢惠敏，麦海燕，等. 复方薄荷脑滴鼻液的制备及临床应用[J].中国现代药物应用,2010,4(10):98-99. DOI:10.3969/j.issn.1673-9523.2010.10.092.

[2] Erfani JL, Rouini MR, Atyabi F, et al. In vitro and in vivo evaluation of an in situ gel forming system for the delivery of PEGylated octreotide[J]. Eur J Pharm Sci， 2013, 48(1-2): 87-96. DOI: 10.1016/j.ejps.2012.09.017.

[3] Cao SL, Ren XW, Zhang QZ, et al. In situ gel based on gellan gum as new carrier for nasal administration of mometasone furoate[J]. Int J Pharm， 2009, 365(1-2): 109-115. DOI: 10.1016/j.ijpharm.2008.08.042.

[4] 苟林宏，安宝文，王俊丽，等. GC法同时测定复方苯海拉明搽剂中樟脑和薄荷脑的含量[J].中国药房,2015,26(30):4297-4299.DOI:10.6039/j.issn.1001-0408.2015.30.43.

[5] 阳文武，郭娅，张德伟，等. GC法测定清眩片中薄荷脑的含量[J]. 药学研究， 2014，(31): 444-445. DOI:10.13506/j.cnki.jpr.2014.08.004.

[6] 柳梦婷，方婧，唐力英，等. 苍耳子鼻炎滴丸中薄荷脑和龙脑的含量测定及指纹图谱研究[J]. 中国药物警戒，2016，20(1): 16-19.

[7] 姜家书，谢其亮，李敦明，等. 气相色谱法测定通络祛痛膏中樟脑、薄荷脑和冰片含量[J]. 中国药业， 2014，14(7): 31-32.

[8] 李得堂，唐洪梅，蔡庆群，等. GC法同时测定疗筋涂膜剂中冰片和薄荷脑的含量[J].中成药,2010,32(12):2101-2103.DOI：10.3969/j.issn.1001-1528.2010.12.020.

(本文编辑：张阵阵)

更 正

作者个人原因，《海军医学杂志》2016年第6期490页“体外胃癌间质成纤维细胞模型建立和生物学特性初步研究”一文第一作者(柴华)单位更正为“第二军医大学”。

本刊编辑部

Determination of the content of menthol in the nasal in-situ gel spray by gas chromatography

KangAnfeng,LiXinfang,LeLijing,ZhanJieqiong,MaZhiqiang,ZhangXinrong,YangFeng

(SchoolofPharmacy,FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122,China)

Objective To establish a method for concentration determination of menthol in the nasal in-situ gel spray.Methods Gas chromatography (GC) was performed on the column of Agilent DB-WAX capillary column (30m×0.25 mm×0.25 μm), with the column temperature of 120 ℃. With nitrogen gas used as carrier gas, hydrogen flame ion detector (FID) was used, the detection temperature was 260 ℃, injection temperature was 220 ℃, injection volume was 1 μl and column flow rate was 1.0 ml/min.Results For menthol, there was good linear relationship within the range of mass concentration at 0.02～0.20 mg/mL (r=0.999 1). Precision, reproducibility and stability test were all lower than 2%, the sample recovery rate was 95.1%～103.4% and relative standard deviation (RSD) was 2.3% (n=6). Conclusion The established method had the following advantages: easy operation, high reliability and good reproducibility, and it could be used for the content determination of menthol in the nasal in-situ gel spray.

Gas chromatography; In-situ gel; Menthol; Content determination

全军后勤科研计划重大项目(AWS14L005)

350122 福州，福建中医药大学(康安锋、乐李敬、杨峰)；第二军医大学药学院无机化学教研室(康安锋、李新方、马志强、张欣荣、杨峰)；河北北方学院研究生部(詹洁琼)

杨峰，电子信箱：yangfeng1008@126.com

R917

A

10.3969/j.issn.1009-0754.2017.01.009

2016-12-12)