微柱凝胶法在血型鉴定中的应用

李伟敬，夏瑞雪，崔 艳

（1.解放军第266医院检验科，河北 承德 067000；2.解放军第266医院麻醉科，河北 承德 067000）

微柱凝胶法在血型鉴定中的应用

李伟敬1，夏瑞雪1，崔 艳2

（1.解放军第266医院检验科，河北 承德 067000；2.解放军第266医院麻醉科，河北 承德 067000）

微柱凝胶法；血型鉴定；应用

ABO血型系统是被发现的人类第一个血型系统，至今，现发现人类血型系统已有30多种，随着人类对血型的进一步研究，Rh血型系统是红细胞血型中最为复杂的一个血型系统，因此血型在输血前的正确鉴定，是确保安全输血的重要措施，直接关系到患者的生命安全。目前传统的ABO血型和Rh血型鉴定主要采用玻片法，其敏感度不能满足临床输血安全需求。因此，我们选择了微柱凝胶法ABO、Rh（D）血型定型检测卡在同一卡片上进行正反血型鉴定。

1 材料与方法

1.1 一般资料

检测标本为我院2016年8～12月送检的门诊及住院患者2000份EDTA抗凝新鲜血样。

1.2 试验原理

本检测卡是利用微柱凝胶过筛检测原理。若待检患者红细胞与凝胶中的单克隆IgM抗A、抗B、抗D试剂发生特异性凝集反应，或待检患者血浆与ABO试剂红细胞发生特异凝集反应，通过TD-2Y医用多功能离心机离心后，凝集的红细胞被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或凝胶颗粒间隙之中，判为阳性结果，表示待检患者红细胞含相应的血型抗原，或待检患者血浆含相应的抗体；如果RBC全部沉积于凝胶孔腔底部，则判为阴性结果，表示待检测红细胞不含相应的抗原，或待检血浆不含相应的抗体。正定型管有4管，其中蓝色A管含35%单克隆IgM抗A（效价≥128），黄色B管含35%单克隆IgM抗B（效价≥128），灰色D管含35%单克隆IgM抗D（效价≥64），白色Control管含生理盐水35%，各微柱管分别含凝胶65%，在卡片上的排列顺序从左至右由第一管起分别为兰A、黄B、灰D、白Control；反定型管有4管，白色A、B、O、自身管全部为无抗体微柱管，各管分别含生理盐水35%、凝胶65%，在卡片上排列顺序从左至右由第5管起分别为白A、白B、白O、自身。

1.3 试剂与仪器

ABO、Rh（D）血型定型检测卡（中山市生科试剂仪器有限公司），ABO血型反定型试剂盒（人红细胞）（长春博德生物技术有限责任公司），TD-2Y医用多功能离心机（中山市生科试剂仪器有限公司）。

1.4 检测方法

1.4.1 ABO、Rh（D）血型定型检测卡

观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，将卡放置平衡至室温，使用前置离心机1000 r/min离心2 min，1800r/min离心3 min。将待检全血标本离心分离红细胞与血浆（血清），取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。制备1%待检红细胞悬液（500 ul生理盐水或血型分析用稀释液对5 ul压积红细胞）与1%的A1、B、O型试剂红细胞悬液（1500 ul血型分析用稀释液对500 ul的4%A1、B、O红细胞或比例3:1稀释）。撕开卡封膜，于兰A、黄B、灰D、Control微柱管反应腔中加入1%待检RBC悬液各50 μl；于白色A、B、O、自身管分别各加入待检血浆50 μl，再分别加入对应的1.0%A1、B、O型试剂红细胞悬液、待检红细胞悬液50 μl。将检测卡，置离心机静置5 min，1000 r/min，2 min，1800 r/min，3 min离心后取出，判定结果。

1.4.2 玻片法

按照《全国临床检验操作规程》进行操作并判定结果[1]。

2 结 果

在2000例血型鉴定标本中RhD阴性5例（用玻片鉴定也为阴性），正反定型不符7例（其中红细胞抗原减弱例2例，高效价冷凝集素2例，拖尾现象3例）。

3 讨 论

红细胞血型抗原减弱2例均为肿瘤患者，由于凝集反应减弱，影响结果判定。针对此问题，我们根据凝集反应减弱程度，把肿瘤患者红细胞悬液浓度相应增加，用标准血清再鉴定一次，结果准确。血型鉴定中高冷凝集素的影响应引起我们的高度重视，高效价冷凝集素是患者体内产生了抗自身红细胞的嗜异性冷抗IgM。血型鉴定过程中由于在室温条件下进行，嗜异性冷抗IgM即可与自身红细胞发生非特异性凝集反应，出现凝集现象而导致血型判断错误。对此我们先把待检红细胞用生理盐水洗涤三次，在用37℃水浴箱温育30 min后进行检测并结合玻片法，做出正确判断。经过检查发现拖尾现象是由于实验人员在撕封条的时候用力过猛，导致抗A孔里的血清污染到抗B血清孔里，出现结果拖尾现象，给结果判读增加难度。我们的解决办法是检测卡在离心机1000 r/min，2 min；1800 r/min，3 min离心后小心撕开封条，避免用力过猛。通过实验我们总结在检测卡使用过程中，如因运输过程产生气泡，可将检测卡放置在漩涡振荡器上震荡，使气泡漂移至胶面为止，3000 r/min离心2 min。延长抗原抗体反应时间，按1000 r/min，2 min；1800 r/min，3 min离心，可提高试验灵敏度。避免因离心速度过快、时间过长导致结果假阴性。及时发现由于细菌污染、纤维蛋白析出，抗凝血不佳胶体上清液挥干导致的假阳性。玻片法作为我们常用的血型鉴定方法，其敏感度不能满足疑难血型的鉴定。微柱凝胶法成为目前血型检测的主要方法，弥补了玻片法的不足，具有血型鉴定时间短，结果准确、清楚，灵敏度高，易于保存备查等优点。因此，微柱凝胶法检测血型为临床安全输血提供了有效保障，值得推广使用。

[1] 叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程.第三版,南京:东南大学出版社.

本文编辑：吴 卫

R446.62

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ISSN.2095-8242.2017.14.2745.01