SIRT1在宫颈病变中的临床应用

吕健勇，胡永斌

(1.柳州市妇幼保健院 病理科,广西 柳州545001;2.中南大学湘雅医院,湖南 长沙410008)

SIRT1在宫颈病变中的临床应用

吕健勇1，胡永斌2

(1.柳州市妇幼保健院 病理科,广西 柳州545001;2.中南大学湘雅医院,湖南 长沙410008)

宫颈病变[1]( Cervical erosion)又名宫颈糜烂，一般由于宫颈鳞状上皮破损，被柱状上皮外露增生分化包裹鳞状上皮，由于被柱状上皮表观呈红色，被认为是“假性糜烂”。其无传染性，常发生于已婚女士，部分发生于健康女士，主要临床症状为阴道分泌物增多，少量血性白带及性交后出血。相关研究表明[2-4]，宫颈病变分为宫颈人乳头瘤病毒(HPV)感染、宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈癌(CC)，其中CIN又分为CIN I、CIN II和CIN III三级。SIRT1是近年来逐渐被发现于肿瘤组织中的能够抑制肿瘤细胞生长的因子。虽然SIRT1的研究已经达到前所未有的深度，但其在宫颈病变中的研究还处于空缺。因此本文旨在探讨分析宫颈病变者的宫颈病变组织与病变旁组织中的SIRT1的表达情况和宫颈病变的关系以及发病中的作用，探讨宫颈上皮组织线粒体功能在宫颈病变发生发展中的作用机制。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取自2014年1月至2016年1月来我院接受检查的宫颈病变患者50例作为研究对象，年龄从32岁到55岁不等，平均为(45.7±10.6)岁。所有患者均经过病理科检查、阴道镜、白带检测确认为宫颈病变并分级，由病理科保存病变组织和病变旁组织并将其制作成蜡块备检。所有患者均由两名以上的病理医师确诊，并排除合并其他肿瘤和重大疾病者，排除正在用相关药物者。

1.2 方法

采用组织病理、细胞病理、免疫组化、阴道镜、白带检测等方法判定宫颈病变程度进行分析分级，同时采用免疫组化(P16，Ki-67)方法监测50例不同病情程度的病变组织和15例病变旁组织中的SIRT1的表达情况。详细操作步骤为：①标本收集与储存，将待测组织置于烧杯中并固定48 h。本次标本选择的病变组织和病变旁组织大小为0.4 cm×0.4 cm×0.3 cm。随后将固定好的标本取出并反复应用蒸馏水进行冲洗，再将其先后加入到二甲苯Ⅰ和Ⅱ溶液里浸泡15 min随后将其放入无水C2H5OHⅠ和Ⅱ各洗涤5 min，在无水C2H5OHⅡ中5 min；95%乙醇中浸泡5 min；85%乙醇中浸泡5 min；70%乙醇中浸泡5 min；蒸溜水中浸泡5 min。②抗原修复，取一定量的0.01 M梓檬酸盐缓冲液(pH=6.0)进行加热；冷却，并用提前制备的无菌蒸馏水和PBs缓冲液洗涤3次，共15 min。③免疫组化，现用现配3%HA，密封20 min，蒸馏水洗2次，每次5 min；再用PBS洗涤2次，持续5 min；山羊血清密封1 h；取出切片，继续用PBS缓冲液进行3次洗涤，共16 min；滴加即用型快捷免疫组化MaxVision试剂，湿盒中室温静置15 min；PBS洗3次，每次5 min；将其置于DAB中维持2-8 min，实时在镜下观察。将石蜡融化后并除去杂质，并在石蜡中以1∶1的比例加入邻二甲苯制成软蜡A和软蜡B，同时制备硬蜡A和硬蜡B(含有软蜡B)，透明好的组织分别在软蜡A和软蜡B中浸泡30 min至40 min，在硬蜡A和硬蜡B中浸泡30 min。对待测样品通过石蜡做包埋，将样品与石蜡结合待凝固后应用石蜡切片机将待测组织切成4 μm厚度芯片，将组织芯片置于65℃恒温中5 h待测。

2 结果

2.1 宫颈病变分类分级情况 本组50例患者中有HPV感染者8例、宫颈上皮内瘤变32例、宫颈癌10例，其中CIN I者10例，CIN II者10例，CIN III者12例。各病变分类之间在年龄上差异不显著(P>0.05)。可以进行比较。

2.2 SIRT1在宫颈病变组织和病变旁组织中的表达情况 SIRT1在病变旁组织中阳性表达率和表达水平均较低，均明显的低于HPV感染组织、CIN组织和宫颈癌组织(P<0.05)。根据Dunnet-t检验可知，宫颈癌组织中SIRT1阳性表达率高达100%，显著高于病变旁组织，差异具有统计学意义(P<0.05)。说明SIRT1在宫颈病变组织中均有表达，但癌前病变中表达低于癌组织,见表1。

表1 SIRT1在宫颈病变组织和病变旁组织中的表达情况 [%(n)]

注：χ2值各组与病变旁组织比较

2.3 SIRT1在宫颈病变中表达水平 随着病变程度加重SIRT1的阳性表达水平也升高，其中在CIN III和宫颈癌组织中SIRT1表达水平最高，达3+，差异具有统计学意义(P<0.05)。说明病情越严重SIRT1的阳性水平高，SIRT1的表达与病情严重程度呈现正相关,见表2。

表2 SIRT1在不同宫颈病变组织中的表达水平

3 讨论

宫颈病变主要临床表现[5-8]为阴道分泌物增多，少量血性白带及性交后出血。其分为三大类型，分别为宫颈人乳头瘤病毒(HPV)感染、宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈癌(CC)。HPV为人乳头瘤病毒，其常见于生殖器，易发生于女性外阴、阴道、宫颈和肛门周围、肛管内、尿道口，若其长期反复感染则可诱发肿瘤的发生。CIN[9]是由于HPV持续感染所致，CIN的概念最早于1967年由Richart提出，CIN又分CINI、CINII和CINIII，反映了宫颈癌发生演进的过程。1973年被确认，1988年被Bathasda(TBS)系统纳入统称。宫颈癌是目前讨论最为热烈的妇科恶性肿瘤，其发病多见于30岁到40岁之间，有年轻化趋势。宫颈癌的发生对于女性来说具有毁灭性的打击，严重影响生活质量，而传统的诊断和治疗手段存在一定的弊端。因此为了为宫颈癌的诊治提供新的思路，有人[10,11]提出了应用分子生物学进行诊治。最初有研究指出，SIRT1基本上全部位于细胞核内，随着科学技术的发展，有人发现SIRT1还存在于细胞质中，且其表达场所为细胞质。相关报道指出[12]，SIRT1在肝癌细胞中的高表达，但其所转录的信使RNA含量与正常肝组织无显著差异，说明SIRT1蛋白在细胞质中的表达有一定的限度。SIRT1能够抑制消化性肿瘤的发生以及结肠癌的形成，其是构成癌细胞修复系统的主要基因，若其缺失，则会出现修复机制破坏，肿瘤抑制机制将会出现漏洞。数篇文献表明[13]，SIRT1的高表达与血清高胆红素与低细胞分化有关，分化程度越低其表达程度越高，而本研究倾向于研究其病变程度与SIRT1的表达关系，SIRT1在病变旁组织中阳性表达率和表达水平均较低，均明显的低于HPV感染组织、CIN组织和宫颈癌组织，且该指标随着病变程度的加深而呈现阳性表达率升高的现象，即其在表达数量上逐渐升高，宫颈癌组织中SIRT1阳性表达率高达100%，显著高于病变旁组织，这也说明宫颈癌组织细胞中SIRT1高表达，进一步证实了SIRT1能够在多种肿瘤细胞中表达的推断，但其是抑制作用还是促进作用，本研究由于条件有限未能做出证实。而随着病变程度加重SIRT1的阳性表达水平也升高，其中在CIN III和宫颈癌组织中SIRT1表达水平最高，说明病情越严重，SIRT1的阳性表达水平越高。

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广西壮族自治区柳州市科学技术局科学研究与技术开发计划课题(课题编号：2014J030418)

1007-4287(2017)02-0254-03

2016-05-15)