液相色谱—质谱联用技术在水产品安全检测中的应用

王 丽 陈韩飞 王 甜

(新疆维吾尔自治区水产科学研究所 新疆 乌鲁木齐 830000 )

液相色谱—质谱联用技术在水产品安全检测中的应用

王 丽 陈韩飞 王 甜

(新疆维吾尔自治区水产科学研究所 新疆 乌鲁木齐 830000 )

液相色谱-质谱联用技术逐渐成为水产品中兽药残留检测的重要手段。本文介绍了液相色谱-质谱联用仪的基本原理和特点，以及在水产品安全检测中的应用。

液相色谱-质谱联用仪；水产品；安全检测

水产品在养殖过程所用兽药种类较为复杂，经常摄入含有低剂量药物残留的水产品，残留的药物即可在人体内慢慢蓄积而导致体内各器官的功能紊乱或病变，严重危害人体健康。水产品安全日益受到国家和有关国际组织的关注和严格控制，人们对水产品的营养性和安全性的关注均趋于理性化、科学化的同时，也对水产品中有害物质的检测水平也提出了更高的要求。液相色谱-质谱(LC-MS/MS)联用既发挥了现代色谱对复杂样品的高分离能力,其质谱具有的高选择性、高灵敏度以及能够准确提供化合物的分子量与结构信息的优点,在水产品安全检测中发挥着越来越大的作用。LC-MS/MS凭借其超低的检测限、优异的定性能力，逐渐成为水产品安全检测领域的主力军。

1 液相色谱-质谱联用仪的原理

液相色谱-质谱联用仪主要由液相色谱、接口装置(LC与MS之间的连接装置，同时也是电离源)和质谱仪组成。色谱可作为质谱的样品导入装置，并对样品进行初步分离纯化，再由质谱检测器检测依次得到化合物的分子离子及碎片信息。因为色谱可得到化合物的保留时间，质谱可给出化合物的分子量和结构信息，由此可以根据质谱峰的位置进行物质的定性和结构分析，根据峰的强度进行定量分析。因此色谱/质谱联用技术可对复杂体系进行分离分析，故对复杂体系或混合物中化合物的鉴别和测定非常有效。

2 液相色谱-质谱联用仪在水产品质量安全检测中的应用

水产品的基质相对其他食品来说，较为复杂，含有较多的蛋白质、脂肪等物质，很容易对所检测的目标化合物造成干扰。液相色谱-质谱联用技术对样品的提取、纯化和浓缩等前处理过程没有严格要求，并且它具有抑制基质干扰的特点，与液相的方法相比，样品前处理的过程更加简便。此外，水产养殖过程中使用的兽药也越来越多样化，对兽药的检测需求也从以前的单一类别兽药检测发展到现在的多种不同类别兽药同时检测，液相色谱-质谱联用技术因其良好的适用性，可同时定性、定量、高灵敏度及分析时间短等特点，已成为多种兽药残留同时检测的主要方法。

2.1 水产品抗生素残留的测定

2.1.1 硝基呋喃类

硝基呋喃类药物作为人工合成的广谱抗菌药，主要包括呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因等，因其具有抑菌性和杀菌性而广泛用于水生动物细菌性疾病预防及治疗。赵东豪等研究了利用高效液相色谱-串联质谱法检测水产品中残留的呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮等4种硝基呋喃类代谢物，优化了前处理方法及液相色谱条件。硝基呋喃类代谢物经衍生化后，调节样品pH，乙酸乙酯提取，提取液经氮气吹干后，用乙腈-甲酸(0.1%)水溶液定容，4℃高速离心后上机测定。采用梯度洗脱法，4种代谢物在C18柱中分离良好。该法有效地提高硝基呋喃类代谢物的检测效率，且检测结果准确。

2.1.2 氯霉素类

该类药物主要有氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素(氟苯尼考)，氯霉素对人的造血系统、消化系统具有严重的毒性反应，有可能引发人的再生障碍性贫血；同时还会引起视神经炎、皮疹等不良反应，现已被禁止使用。万译文等建立了水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素药物残留量同时测定的高效液相色谱-串联质谱方法。以氘代氯霉素做内标，乙酸乙酯提取，HLB固相萃取柱净化，洗脱液氮气吹干，采用负离子模式进行定性、定量分析。结果表明：氯霉素的检出限为0.01μg/kg，甲砜霉素和氟甲砜霉素检出限为0.03μg/kg，检测结果的相对标准偏差为3.3%～9.7% (n=6)，加标回收率达到78.6%～110.5%。该方法在水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素药物的残留测定中具有很好的应用前景。

2.1.3 喹诺酮类

喹诺酮类是人工合成的含4-喹诺酮基本结构的抗菌药。其因具有广谱、高效及低毒等优势而被广泛应用于水产养殖中治疗和预防多种细菌和支原体疾病。常见的喹诺酮类药物有诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星等。刘正才等建立了快速测定鳗鱼肌肉中氧氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氟甲喹和恶喹酸6种喹诺酮类药物残留的超高效液相色谱-串联质谱方法。样品经匀浆、提取、脱脂、净化后，以乙腈-乙酸铵溶液(0.2%甲酸)为流动相，用多反应监测正离子扫描方式进行质谱检测，内标法定量。结果表明，该方法对以上6种喹诺酮类药物的线性范围为0.1～50μg/kg，相关系数(r)均大于0.9976；检出限为0.03～0.25μg/kg，定量限为0.1～0.8μg/kg，在1.0、2.0、10μg/kg 3个添加水平的回收率为84.8%～97.8%，相对标准偏差为4.5%～11.3%。该法简单、灵敏、特异性强，适用于鳗鱼肌肉中喹诺酮类药物多残留的检测。

2.1.4 磺胺类

磺胺类药物是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物总称。人体中长期存在磺胺会导致许多细菌对磺胺药物产生抗药性，磺胺类残留还能破环人的造血系统，造成溶血性贫血症。孙伟红等建立水产品中18种磺胺类药物残留量的HPLC-MS/MS测定方法。以氘代试剂为内标，采用正离子模式测定，可同时对水产品中的18种磺胺类药物进行定性和定量。其检出限在0.5μg/kg以下，定量限为1.0μg/kg；在5.0～200.0μg/mL时峰强度与质量浓度的线性关系良好(r＞0.99)。方法的平均回收率范围为70%～120%。该法简便快捷，在一定程度上实现了药物残留的快速检测。

2.2 水产品禁用渔药的检测

于慧娟等建立了水产品中己烯雌酚的LC-MS/MS检测方法，样品用甲基叔丁基醚和乙酸乙酯提取，C18固相萃取柱净化，甲醇洗脱，以0.02%氨水-甲醇为流动相，在LC-MS/MS多反应监测模式下进行定性与定量分析。在鱼、虾和蟹三类样品中，己烯雌酚在2μg/kg加标水平时，批内相对标准偏差为5.3%～15%，在2μg/kg加标水平时，批内相对标准偏差为2.3%～8.2%，以上回收率均在75%以上。祝璟琳等建立了罗非鱼肌肉中甲基睾丸酮残留量的UPLC-MS/MS测定方法，以氘代试剂为内标，采用正离子监测模式测定，可对罗非鱼肌肉中甲基睾丸酮残留进行定性和定量检测，检出限为0.4μg/kg，定量限为1μg/kg。线性范围为1～60μg/kg(r＞0.999)，方法的平均回收率范围为71.06%～83.06%，相对标准偏差为7.4%～15.3%。王慧龙等优化了液相色谱-串联质谱法测定水产品中孔雀石绿和无色孔雀石绿残留量的检测方法。样品经匀浆、萃取、净化和浓缩后，用乙腈-乙酸铵溶液定容，采用液相色谱-三重四级杆串联质谱仪、多反应监测扫描模式检测和同位素内标法定量。孔雀石绿和无色孔雀石绿检测的线性范围为0.25～10.0ng/mL，检出限均为0.50μg/kg。在加标量为 2.50μg/kg时，样品加标平均回收率分别为98.1%和93.4%，相对标准偏差小于10%。

2.3 多种兽药组分同时测定

水产品中的兽药残留检测范围已逐步从单一类别的兽药检测发展为多种不同类别兽药的定性与定量分析。李仲超等运用液相色谱-质谱技术建立水产品(鱼、虾和贝)中78种兽药的同时测定方法。目标兽药在0.1～100μg/kg范围内线性良好；以基底匹配工作曲线和替代物法分别进行定量和质控，4μg/kg和20μg/kg两个加标量条件下鱼、虾、贝肉的加标回收率和相对标准偏差(n=4)分别为40.8%～125.6%和0.1%～16.0%(鱼)、42.9%～131.9%和0.1%～14.0%(虾)、及43.5%～136.4%和0.3%～15.8%(贝)，方法检测限为0.1～0.5μg/ kg。刘正才等建立鳗鱼中15种磺胺、3种喹诺酮类以及4种四环素族抗生素残留的超高效液相色谱-串联质谱同时测定方法。添加水平为 5、10、20μg/kg时各种化合物的平均回收率范围为72.4%～97.3%，相对标准偏差值均小于14.4%。该法简单、快速、灵敏，适用于鳗鱼中多磺胺组分、喹诺酮及四环素族组分残留的同时测定。

3 结语

液相色谱-质谱联用技术解决了传统液相检测器灵敏度和选择性不够的缺点，提供了可靠、精确的相对分子质量及结构信息，简化了实验步骤，节省了样品准备时间和分析时间。水产品中兽药残留也从单一类别检测发展到多种类别兽药残留的定性定量分析，但水产品基质复杂，利用现有的技术建立简单、高效、环保且低成本的分析方法仍然是水产品检测的主要发展方向。随着现代技术的发展，液相色谱-质谱联用技术将会在水产品检测分析方面发挥举足轻重的作用。

（略）

王丽（1988-），女，硕士研究生，助理工程师，主要从事水产品安全质量检测工作，E-mail: 845357500@qq.com；

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