灯盏花素对大鼠脑微血管内皮细胞OGD损伤的保护作用及机制研究

李钊飞，曹小雨，陈琼芳，王 钢，杨秀芬

(1.广西中医药大学药学院药理学教研室，广西 南宁 530001;2.陕西省第二人民医院药剂科，陕西 西安 710005)

灯盏花素对大鼠脑微血管内皮细胞OGD损伤的保护作用及机制研究

李钊飞1，2，曹小雨1，陈琼芳1，王 钢1，杨秀芬1

(1.广西中医药大学药学院药理学教研室，广西 南宁 530001;2.陕西省第二人民医院药剂科，陕西 西安 710005)

The protective effect of breviscapine on BMECs with OGD injury and mechanism study

LI Zhao-fei1,2,CAO Xiao-yu1, CHEN Qiong-fang1, WANG Gang1, YANG Xiu-fen1

(1.DeptofPharmacology,CollegeofPharmacy,GuangxiUniversityofChineseMedicine,Nanning530001,China;2.DeptofPharmacy,ShanxiSecondProvincialPeople’sHospital,Xi’an710005,China)

灯盏花素；大鼠；脑微血管内皮细胞；OGD；保护作用；机制

breviscapine; rat; BMECs; OGD; protective effect; mechanism

灯盏花素(breviscapine，Bre)是从短亭飞蓬中提取的黄酮类化合物，具有保护缺血性脑血管疾病、调节血管内皮功能、减轻炎性反应等作用[1]。本实验通过分离培养大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)，建立氧糖剥夺(OGD)BMECs模型，研究Bre对BMECs损伤是否具有保护作用，并探讨其可能的机制。相关研究尚未见报道。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD大鼠(7～10日龄，SPF级)，由广西医科大学动物实验中心提供，合格证号：SCXK(桂)2014-0002。

1.2 试剂 灯盏花素(昆明龙津药业股份有限公司)；各试剂盒购自南京建成生物工程研究所或武汉华美生物工程有限公司。

1.3 仪器 CO2恒温培养箱，酶标仪，缺氧小室。

1.4 方法 大鼠脑微血管内皮细胞的分离鉴定参考文献[2-3]，OGD模型的构建参考文献[4]。实验分为5组，即空白对照组：按照正常BMECs培养方法培养；模型组：缺糖/缺氧损伤；Bre 10、30、90 mg·L-1组。

2 结果

2.1 Bre对OGD损伤BMECs细胞的保护作用 Bre对BMECs细胞存活率在24、48、72 h均无明显影响。OGD对BMECs细胞活性有明显的抑制作用，当OGD 损伤6 h后，BMECs抑制率达到50%左右，因此，本实验采取OGD 6 h为合理的造模时间。与模型组相比， OGD 损伤后给予各浓度的Bre可使BMECs细胞抑制率下降，见Tab 1。表明Bre对BMECs没有毒性，且可保护OGD对BMECs细胞的损伤。

2.2 Bre对OGD损伤BMECs细胞释放LDH、炎症因子和其他物质的影响 Bre可以明显减少LDH和炎症因子TNF-α、IL-6 和IL-1β的释放，见Tab 2。表明Bre保护OGD损伤BMECs细胞的机制可能是通过抗炎途径来实现的。此外，Bre可以增加OGD损伤后BMECs细胞释放组织纤溶酶原激活物(t-PA)和扩血管物质PGI2(高剂量除外)，抑制组织纤溶酶原激活剂抑制物PAI-1和血管收缩物质内皮素(ET-1)的生成，见Tab 3。

GroupODInhibitoryrate/%Control0．337±0．028##OGD0．193±0．010∗∗43Bre90mg·L-10．275±0．041∗##18Bre30mg·L-10．240±0．024∗∗#29Bre10mg·L-10．219±0．021∗∗35

*P<0.05，**P<0.01vscontrol;#P<0.05，##P<0.01vsOGD

3 讨论

当细胞损伤后，LDH由细胞内溢出，导致LDH释放增加，是反映细胞损伤的重要指标。Bre可以明显减少OGD损伤BMECs LDH的释放，表明Bre可以保护OGD对BMECs的损伤。TNF-α、IL-6、IL-1β可诱导内皮细胞表达多种黏附分子及趋化因子，能激活和募集炎症细胞，加重炎症反应，是脑卒中中触发炎症反应的重要介质[5]。我们发现，OGD损伤BMECs后TNF-α、IL-1β、IL-6明显升高，当治疗性给予Bre后可有效降低这些炎症因子的产生。因此，灯盏花素对OGD所致的BMECs细胞损伤有保护作用，其机制可能与抑制炎症反应有关。Bre可以增加OGD损伤后BMECs细胞释放t-PA和PGI2(高剂量除外)，抑制PAI-1和ET-1的生成，表明Bre可能具有调节纤溶功能和扩血管作用。

Tab 2 Effects of Bre on LDH and inflammatory factors of BMECs with OGD±s,n=5)

*P<0.05，**P<0.01vscontrol;#P<0.05，##P<0.01vsOGD

Groupt⁃PAPAI⁃1t⁃PA/PAI⁃1ET⁃1/ng·L-1PGI2/μg·L-1Control0．419±0．019##2．710±0．252##0．155±0．015##4．352±0．062##2．912±0．916##OGD0．165±0．018∗∗3．307±0．142∗∗0．050±0．006∗∗12．066±1．729∗∗2．245±0．144∗∗Bre90mg·L-10．351±0．017∗∗##2．788±0．085##0．126±0．01∗∗##5．793±0．756∗##2．056±0．404∗∗Bre30mg·L-10．271±0．009∗∗##2．966±0．204∗##0．092±0．009∗∗##7．395±0．259∗∗##4．243±0．161∗∗##Bre10mg·L-10．212±0．02∗∗##3．263±0．108∗∗0．065±0．006∗∗#12．162±1．153∗∗2．456±0．393∗∗

*P<0.05，**P<0.01vscontrol;#P<0.05，##P<0.01vsOGD

[1] 李钊飞, 曹小雨, 陈琼芳, 杨秀芬. 灯盏花素对H2O2致人脐静脉内皮细胞损伤的的保护作用[J]. 时珍国医国药, 2016, 27(7): 1566-9.

[1] Li Z F, Cao X Y, Chen Q F, Yang X F. Protective effect of breviscapine on human umbilical vein endothelial cells injured by H2O2[J].LishizhenMedMaterMedRes, 2016, 27(7): 1566-9.

[2] 查雨锋, 张 顺, 苏 航,等. 一种高纯度和高活力的大鼠脑微血管内皮细胞的提取及原代培养方法[J].中国药理学通报,2014,30(11):1616-9.

[2] Zha Y F, Zhang S, Su H, et al. A highly purified and active extract and primitive culture method for rat microvascular endothelial cells(BMECs)[J].ChinPharmacolBull,2014,30(11):1616-9.

[3] Liu Y, Xue Q, Tang Q, et al. A simple method for isolating and culturing the rat brain microvascular endothelial cells[J].MicrovascRes,2013,90:199-205.

[4] Chen T, Liu W, Chao X, et al. Neuroprotective effect of osthole against oxygen and glucose deprivation in rat cortical neurons: involvement of mitogen-activated protein kinase pathway[J].NeuroSci,2011,183(2): 203-11.

[5] Iadecola C,Anrather J. The immunology of stroke: from mechanisms to translation[J].NatMed, 2011, 17(7): 796-808.

时间：2017-1-13 11:38:00

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170113.1138.060.html

2016-11-25，

2016-12-25

国家自然科学基金资助项目(No 81260652，81060353)；广西“八桂学者”中药创新理论与药效研究项目(No J13162)

李钊飞(1991-)，男，硕士，药师，研究方向: 心脑血管药理学，E-mail: 395904219@qq.com; 杨秀芬(1969-)，男，博士，教授，硕士生导师，研究方向：心脑血管药理学，通讯作者，E-mail: xiufenyang@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.02.030

A

1001-1978(2017)02-0295-02

R-332；R284.1；R322.12；R322.81；R743.31；R845.22