醋制降低京大戟对正常小鼠胃肠道氧化损伤的初步研究

曹雨诞，张楷承，张 丽，丁安伟

(南京中医药大学江苏省方剂高技术研究重点实验室，江苏省中药资源产业化过程协同创新中心，江苏 南京 210023)

醋制降低京大戟对正常小鼠胃肠道氧化损伤的初步研究

曹雨诞，张楷承，张 丽，丁安伟

(南京中医药大学江苏省方剂高技术研究重点实验室，江苏省中药资源产业化过程协同创新中心，江苏 南京 210023)

Vinegar processing attenuates gastrointestinal oxidative injury in mice caused by Euphorbia Pekinensis Radix

CAO Yu-dan, ZHANG Kai-cheng, ZHANG Li, DING An-wei

(JiangsuKeyLaboratoryforHighTechnologyResearchofTCMFormulae,JiangsuCollaborativeInnovationCenterofChineseMedicinalResourcesIndustrialization,NanjingUniversityofChineseMedicine,Nanjing210023,China)

京大戟；醋制；小鼠；胃肠道；氧化损伤；减毒

Euphorbia Pekinensis Radix; vinegar processing; mice; gastrointestinal tract; oxidative injury; detoxication

京大戟(Euphorbia Pekinensis Radix)为大戟科(Euphorbiaceace)植物大戟(EuphorbiapekinensisRupr.)的干燥根[1]，性苦、寒，有毒，始载于《神农本草经》，列为下品。近年研究发现京大戟具有双重生理活性，既具有泻下、抗肿瘤、抗病毒、抗白血病等药理活性，同时对皮肤、口腔及胃肠道黏膜有强烈的刺激性，以及细胞毒作用[2-6]，所以中医临床多用醋制降低其毒性和刺激性。本课题组前期已证实醋制能降低京大戟的肝毒性[7-8]和肠细胞毒性[9]，而对于京大戟胃肠道整体毒性研究却鲜有报道。因此，本研究拟从整体动物初步探讨醋制降低京大戟胃肠道毒性可能的作用机制，为研究京大戟醋制减毒的作用机制提供一定的依据。

1 仪器与材料

1.1 动物 ICR小鼠70只，♀♂各半，体质量18～22 g，购自浙江省实验动物中心，合格证号：SCXK(沪)2013-0006。

1.2 药物与试剂 京大戟各部位提取物提取方法见已发表文章[8]，京大戟、醋京大戟石油醚部位浸膏(得率分别为6.33%和5.26%)，乙酸乙酯部位浸膏(得率为7.53%和6.48%)。临用前，用0.5%的CMC-Na溶液和食用油(9 ∶1)分别配成所需浓度的药液。考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、微量丙二醛(MDA)测定试剂盒、微量还原型谷胱甘肽(GSH)测定试剂盒，购自南京建成生物工程研究所。

1.3 仪器 TP1020自动脱水机、RM2135型石蜡切片机、DM1000光学显微镜(均为德国LEICA公司)，CS-VI型摊片烤片机(湖北孝感宏业医用仪器有限公司)，Powerwave X340全波长酶标仪(美国Bio-Tek公司)，AY220电子分析天平(日本岛津)，MX-S混匀仪(北京大龙)，JJ-2高速组织匀浆机(江苏省金坛市友联仪器研究所)。

2 方法

2.1 动物分组 将70只ICR小鼠置于室温、通风的清洁级动物室中，自由摄食饮水，适应3 d后，按体质量、性别随机分为7组，每组10只，即空白对照组，京大戟石油醚-乙酸乙酯部位高、中、低剂量组(简称京大戟高、中、低剂量组)，醋京大戟石油醚-乙酸乙酯部位高、中、低剂量组(简称醋京大戟高、中、低剂量组)。

2.2 剂量设计 按照人临床用量的6、4、2倍，并结合本课题组前期预试结果，本实验京大戟和醋京大戟高、中、低剂量组分别灌胃给予60、40、20 mg·g-1，空白对照组灌胃等体积的0.5% CMC-Na溶液和食用油(9 ∶1)，每日2次，连续灌胃6 d。d 6灌胃1 h后，脱颈椎处死小鼠，取胃、肠组织用4%中性多聚甲醛固定，常规HE染色，光镜下观察其组织形态学变化。取胃、肠组织分别制成10%组织匀浆，以3 500 r·min-1离心15 min后，取上清液-20 ℃冻存，待测各指标。

2.3 胃、肠组织氧化损伤指标测定 取1%胃、1%肠匀浆，按考马斯亮蓝蛋白试剂盒方法测定胃、肠组织中蛋白含量。取各组小鼠的2%胃、2%肠匀浆，按SOD试剂盒方法测定胃、肠组织中SOD活性；取10%胃、10%肠匀浆，按MDA、GSH试剂盒方法测定胃、肠组织中MDA含量和GSH含量。

3 结果

3.1 京大戟对胃、肠组织HE染色结果的影响 空白对照组小鼠胃黏膜上皮结构完整，京大戟高剂量组胃黏膜表面上皮细胞坏死破碎，结构完全破坏；空白对照组小肠黏膜结构正常，京大戟高剂量组肠黏膜层组织破裂，黏膜表面覆盖大量分泌物。京大戟中、低剂量组胃、肠组织变化不明显。

Tab 1 Effects ofEuphorbiapekinensisbefore and after processing with vinegar on levels of SOD,GSH and MDA in gastric- intestinal±s，n=10)

**P<0.01vscontrol group;##P<0.01vscrude group

3.2 京大戟对胃、肠组织氧化损伤指标的影响 与空白对照组相比，京大戟各剂量组小鼠胃、肠组织中MDA含量明显增高(P<0.01)，SOD活力、GSH含量明显降低(P<0.01)。与京大戟组相比，醋京大戟各剂量组小鼠胃、肠组织中MDA含量明显降低，SOD活力、GSH含量明显增高(P<0.01)，提示醋制能降低京大戟对胃、肠组织的氧化损伤。见Tab 1。

4 讨论

现代研究发现，京大戟对皮肤、口腔及胃肠道黏膜有强烈的刺激性和致炎、促发致癌等毒性作用，其毒性部位主要集中在石油醚、乙酸乙酯部位，醋制后毒性作用降低[10-11]。京大戟产生毒性的原因主要是其对胃肠道的损伤，其中较常见的是氧自由基损伤。氧自由基所致的细胞损害是很多病理过程中组织损伤所共同的方式，胃肠黏膜在药物作用等情况下，可产生大量的氧自由基。氧自由基损伤引起的主要变化为MDA含量升高、GSH和SOD含量下降[12]。

本研究结果表明，与空白对照组比较，京大戟各剂量组对小鼠胃肠道具有明显的氧化损伤作用；与京大戟各剂量组比较，醋京大戟各剂量组能明显降低对胃肠道的氧化损伤作用。其中SOD变化最大，SOD作为生物体内重要的抗氧化酶，它在生物体内的水平高低意味着自身抗氧化能力高低。在本研究中，空白对照组SOD最高，京大戟各剂量组SOD最低，说明经过京大戟作用后提高了自由基在机体内的积存，使线粒体氧化磷酸化功能损伤加重，而醋制后氧化损伤程度则有所降低。上述结果显示，京大戟对胃肠道有较强的毒性作用，不仅严重制约着临床的用药安全，也为新药创制带来了困难。醋制后，其胃肠道毒性部位石油醚-乙酸乙酯部位可明显降低对小鼠胃肠道的氧化损伤，为后续从细胞、分子水平阐述京大戟醋制减毒的作用机制提供了一定的依据。

(致谢：本文实验在南京中医药大学药学院国家中医药管理局中药化学三级实验室以及江苏省中药资源产业化过程协同创新中心完成，在此致谢。)

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时间：2017-1-13 11:38:00

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170113.1138.056.html

2016-11-01,

2016-11-28

国家自然科学基金青年基金项目(No 81503250)；江苏省中医药局科技项目(No LZ13021)；江苏高校优势学科建设工程资助项目(No ysxk-2014)

曹雨诞(1977-)，女，博士生，讲师，研究方向:中药炮制与质量控制,E-mail：raindc@163.com； 丁安伟(1950-)，男，教授，博士生导师,研究方向：中药炮制，通讯作者,E-mail:awding105@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.02.028

A

1001-1978(2017)02-0291-03

R-332;R282.711；R322.44；R322.45；R349.1；R573.02；R574.02