HPLC法测定丹芪益肾胶囊中淫羊藿的含量
2017-02-27张年田
张年田
摘要:目的 建立HPLC法测定丹芪益肾胶囊中淫羊藿的含量。方法 样品采用超声处理的方法提取。色谱柱为CenturySIL C18-BDS(250×4.6 mm),流动相乙腈-水(30:70),检测波长为270 nm,流速为1.0 ml/min。结果 淫羊藿苷平均回收率为104.2%,RSD为1.4%(n=6)。结论 含量测定的方法简便,准确,专属性强,稳定性好,灵敏度高,能够有效的控制丹芪益肾胶囊的质量。
关键词:丹芪益肾;淫羊藿苷;高效液相色谱法
丹芪益肾胶囊为山西省中医院制剂品种。功能主治:益肾健脾,活血化瘀。用于糖尿病、肾病,属脾肾两虚者。处方为太子参、黄芪、白术、薏苡仁、芡实、地黄、金樱子、淫羊藿、丹参、葛根、当归、大黄等十二味药组成。规格为每粒0.5 g。控制质量的原有标准为薄层色谱测定大黄、黄芪、葛根三个鉴别项目。为了提高医院制剂的质量标准,山西省食品药品监督管理局规定,所有医院制剂品种,必须有含量测定项目控制质量[1]。为此,在原有测定标准的基础上新增加了淫羊藿的含量测定。并对新增加的项目进行了方法学验证。
1资料与方法
1.1仪器 Waterse2695高效液相色谱仪;检测器:Waterse 2998,柱温箱:4.2-680。AU200D型电子天平;KQ-300E型超声波清洗机(功率250 w,频率33 kHz);容量瓶、漏斗等普通玻璃器皿。
1.2試剂 乙腈、甲醇为色谱纯,水为纯净水自制,乙醇为分析纯,淫羊藿苷(供含量测定使用,中国药品生物制品检验所,批号为110737-200414)。丹芪益肾胶囊为山西省中医院医院制剂室提供,批号为20100615,20110813,20110814。
1.3方法
1.3.1色谱条件与适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(30:70)为流动相;检测波长为270 nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500[2]。
1.3.2对照品溶液的制备 取淫羊藿苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 ml含0.1 mg的溶液,即得。
1.3.3供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇20 ml,称定重量,超声处理1 h,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取1 ml置10 ml的容量瓶,加乙醇至刻度,取续滤液,即得。
1.3.4线性关系学考察 分别精密称取淫羊藿苷对照品,0.25mg,0.5 mg,1 mg,2 mg,5 mg,分别置10 ml容量瓶中加甲醇溶解并稀释至刻度摇匀即得。制成每1 ml含0.025 mg、0.05mg、0.1 mg、0.2 mg、0.5 mg的溶液,各取20 ul注入色谱仪中测定,按色谱条件测得峰面积积分值,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为Y=18685649.34X-10481727.20,r=0.9993,淫羊藿苷在0.025~0.5 mg/ml,呈良好的线性关系。
1.3.5精密度试验 精密吸取对照品溶液(0.1 mg/ml)10 ul重复进样6次,测定淫羊藿苷峰面积积峰值分别为1160509,1198036,1164502,1166923,1174455,1162996。平均值为1171236.9,RSD为1.2%。结果表明,进样与仪器检测精密度良好。
1.3.6稳定性实验 取供试样品溶液分别在0、2、4、8、12、24 h进样10 ul,测得样品峰面积积峰值为9673570,9678452,96013666,
95165892,95597162,93690956。平均值为95664653,RSD为1.2%。结果表明,24 h内供试品溶液稳定。
1.3.7重现性实验 取3个不同批号丹芪益肾胶囊,按供试品溶液制备方法制备6份,分别进样10 ul测定峰面积积峰值,结果34.55504,35.6062,34.4649,34.2312,34.8349,35.1666(mg/g)。平均值为34.8090 mg/g,RSD为1.5%。结果表明,仪器与试验方法可行。
1.3.8回收率 采用加样回收法。取已知含量的样品,批号为(2110814)6份,分别加入一定量的淫羊藿苷对照品,照含量测定项下方法制备测试溶液,按上述色谱条件测定淫羊藿苷的含量,计算回收率。
2结果
淫羊藿苷的回收率实验结果,平均回收率为104.2%,按照拟定的含量测定方法测定3批样品淫羊藿苷的含量平均值为34.7 mg。根据测定范围的限量规定[3],34.7×80%=27.7mg。本品以淫羊藿计算淫羊藿苷不得少于28.0 mg。
3讨论
3.1测定成分的选择 该品种中最大处方量为:太子参、黄芪、芡实、丹参。黄芪为补气诸药之最,逐五脏之淤血,因此原有标准上已有黄芪的薄层色谱方法控制质量。太子参、芡实、丹参,由于它们的化学成分较多,专属性不强。淫羊藿的醇浸出液及从200%淫羊藿水浸膏中提取的非氨基酸部分,能显著增加心脏的冠状动脉流量,并可促进血小板解聚,红血球积压明显减少。因此,最终选择了淫羊藿测定丹芪益肾胶囊中有效成分淫羊藿苷。
3.2流量的考察 参照相关文献[1]《中国药典》选择色谱条件适应性系统,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(30:70)为流动相;检测波长为270 nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500,使淫羊藿保留时间合适,分离效果较好。
3.3提取方法的考察 丹芪益肾胶囊中淫羊藿为水煎煮液减压压缩至浸膏状,低温干燥,粉碎成细粉。由于淫羊藿醇浸出液及从200%淫羊藿水浸膏中提取出淫羊藿苷,因此,选择了加稀乙醇超声处理,简易可行。
3.4方法探讨 在建立方法时,排除黄芪甲苷、丹参酮、葛根素、大黄素等其它成分干扰,因它们都是经过水煎液浓缩,只有淫羊藿苷直接醇浸从水浸中能完全提出,而且在270 nm波长处无法测定其它几味药。所以,经过考察,该方法可用于丹参益肾胶囊的质量控制[4-8]。
参考文献:
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