高效液相色谱法测定猪肉中五种磺胺类药物残留量

吴 敏 陈相宇

(江苏宿迁市农畜产品质量检测中心，江苏宿迁 223800)

高效液相色谱法测定猪肉中五种磺胺类药物残留量

吴 敏 陈相宇

(江苏宿迁市农畜产品质量检测中心，江苏宿迁 223800)

建立了高效液相色谱法测定猪肉中的磺胺间甲氧嘧啶（SMM），磺胺二甲基嘧啶（SM2），磺胺甲噁唑（SMZ），磺胺二甲氧嘧啶（SDM），磺胺喹噁啉（SQ）五种磺胺类药物残留检测方法，作者通过在实验中反复操作，总结出五种磺胺类药物残留的提取、净化和色谱条件。样品经乙腈提取和液-液萃取，以Eclipse XDB-C18为分离柱，乙腈-甲醇-水-乙酸（2+2+9+0.2）为流动相，于270nm波长处检测，外标法定量。实验结果表明，五种磺胺类药物能在20min内得到有效分离，峰形对称，最低检出限为5μg/kg（3倍噪声），样品的加标回收率为82.9%～97.9%。

高效液相 磺胺类 残留量 检测

磺胺类药物是人工合成的具有氨基苯磺酰胺结构的一类抗菌药物，具有抗菌谱广、抗菌力强和价廉易得等特点，在畜牧业和兽医临床上广泛用于预防和治疗畜禽细菌性疾病和球虫病。人们一旦食用了磺胺类药物残留超标的畜禽产品，在人体内作用时间和代谢时间较长，易产生过敏反应，造成尿和造血紊乱等，最终导致人体内许多细菌对其产生耐药性，危害身体健康。

目前中国、欧盟、美国等均将磺胺类药物列为动物饲养过程中限制使用的药物。我国规定猪肉中的磺胺间甲氧嘧啶，磺胺二甲基嘧啶，磺胺甲噁唑，磺胺二甲氧嘧啶，磺胺喹噁啉五种磺胺类药物残留量限量为100μg/kg。作者在检测过程中通过乙腈提取和简单的液-液萃取，有效地实现了药物的提取和净化，样品基质干扰小，通过采用高效液相色谱法同时分离测定常见的五种磺胺类药物，操作步骤简便快捷。

1 实验部分

1.1 仪器与药品、试剂

安捷伦1260高效液相色谱仪，配荧光检测器；高速匀浆机；氮吹仪；离心机；涡旋仪；振荡器；电子天平。

SMM、SM2、SMZ、SDM、SQ标准品（纯度≥99%）；乙腈（色谱纯）；甲醇；乙酸；正己烷；正丙醇；无水硫酸钠。

1.2 样品提取和纯化步骤

（1）准确称取5.0g猪肉样品，置于50ml离心管中。加入4.0g无水硫酸钠。

（2）准确加入15ml乙腈，涡旋仪上混合30s，振荡器高速振荡20min，以7000r/min的速度离心5min，倒出上清液备用。

（3）分离后的残渣用按照（2）方法再提取一次，合并两次的上清液备用。

（4）加入正己烷10ml，涡旋30s，振荡10min，以7000r/min离心5min，准确吸出下层液体，加入正丙醇5ml，于50℃条件下氮吹仪减压浓缩至近干。用2ml流动相溶解残留物，经0.45μm滤膜打进进样瓶，供HPLC测定。

1.3 标准溶液及流动相配制

1.3.1 流动相的配制

按照乙腈-甲醇-水-乙酸（2+2+9+0.2）比例配制，抽滤后备用。

1.3.2 标准曲线

用流动相稀释100μg/ml标准溶液，配制系列浓度为：0.125、0.2、0.5、1、4μg/ml的混合工作标准液，每个浓度梯度的标准液重复测定2次，取平均值，绘制色谱峰面积，采用外标法对样品进行定量。

1.4 色谱条件

Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6x250mm，粒径5μm）；柱温：40℃；流动相：乙腈-甲醇-水-乙酸（2+2+9+0.2）；流速：1.0ml/ min；检测器：紫外检测器；检测波长：270nm；进样量：20μl。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

通过实验发现，酸度过高，不易将五种磺胺类药物完全分离；酸度过低，容易产生拖尾现象。本文采用甲醇-水-乙酸（2+2+9+0.2）为流动相，等强度洗脱，实现了五种磺胺类药物分离，各峰间分离度大，峰形尖锐，峰对称性好。

2.2 色谱分离

依照上述色谱条件下，测得的五种磺胺标准溶液、猪肉样品和猪肉样品加标的色谱图中目标物得到很好的分离，并且峰形对称，保留时间缩短。

图1 五种磺胺标准溶液色谱图

1、磺胺二甲基嘧啶2、磺胺间甲氧嘧啶3、磺胺甲噁唑4、磺胺二甲氧嘧啶5、磺胺喹噁啉

图2 猪肉样品色谱图

2.3 样品添加回收率

称取猪肉样品5.0g置于50ml离心管中，样品添加浓度为10μg/ g。混匀后静置10min，按照上述实验方法进行处理和测定，五种磺胺类药物的回收率为82.9%～97.9%。

3 实验结论

通过上述实验结果表明，用乙腈提取和液-液萃取，可以很好地实现。药物的提取和净化。本方法建立了同时分离检测猪肉中五种磺胺类药物的适宜色谱条件，方法简便高效，准确度高，可以适用于磺胺类药物残留的监控。

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[2]王瑞深.肉品中残留磺胺类药的危害及其监控[J].兽医导刊，2010，（2）：50.

[3]罗成江，陈慧华，林仙军，等.UPLC和HPLC法检测猪肉中磺胺类药物残留的比较[J].中国兽药杂志，2012，46（4）：25-28.

吴敏（1980-），女，本科，农艺师、从事农畜产品药物残留检测。陈相宇（1986-），女，本科，农艺师、从事农畜产品药物残留检测。