43例白血病患者FLT3基因和NPM1基因突变的临床研究

杨晓哲

(濮阳市人民医院 血液内科 河南 濮阳 457000)

·临床研究·

43例白血病患者FLT3基因和NPM1基因突变的临床研究

杨晓哲

(濮阳市人民医院 血液内科 河南 濮阳 457000)

目的 研究43例白血病(AML)患者FLT3基因和NPM1基因突变的临床特点。方法 选取2013年1月至2015年1月濮阳市人民医院血液科收治的43例成人AML患者为研究对象，初诊时收集其骨髓单个核细胞，采用基因组DNA-PCR方法分别扩增其FLT3和NPM1基因，并用毛细管电泳方法分析NPM1基因第12外显子突变，琼脂糖凝胶电泳分析FLT3基因突变，观察患者基因突变特征并随访1 a了解其预后。结果 43例患者初诊AML患者中共检出FLT3+AML 30例(69.77%)，其中正常核型AML 22例(81.48%)显著高于异常核型AML 8例(50.00%)(P<0.05)；共检出NPM1+AML 28例(65.12%)，其中正常核型AML 21例(77.78%)显著高于异常核型AML 7例(43.75%)(P<0.05)。FLT3+AML患者完全缓解率与无复发率显著高于FLT3-AML患者(P<0.05)；NPM1+AML患者完全缓解率与总生存率显著高于NPM1-AML患者(P<0.05)。结论 AML患者FLT3和NPM1基因突变发生率较高，是较为常见的子学异常，且NPM1和FLT3基因突变与临床特点及预后密切相关。

AML；FLT3基因；NPM1基因；突变

AML是一组起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病，与遗传学的改变密切相关，具有高度异质性，其发病基础是基因突变引起细胞增殖、分化、凋亡途径的改变[1]；AML伴有严重的凝血功能障碍，极易引发致命性出血，早期死亡率极高。目前在AML患者中发现了多种基因突变，而近几年的研究发现，NPM1(核仁磷酸蛋白)突变、FLT3(FMS样酪氨酸激酶3基因内部串联重复)突变可作为成人AML患者制定治疗方案以及评估预后的分子标记物[2-3]。因此，检测FLT3基因、NPM1基因突变对AML患者治疗、预后及相关研究有重要意义。本文以濮阳市人民医院43例成人AML患者为研究对象，进一步分析FLT3基因和NPM1基因突变的临床特点，以期为AML患者的治疗、预后及相关实践提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年1月至2015年1月濮阳市人民医院血液科收治的43例成人AML患者为研究对象，均符合2007年《血液病诊断和疗效标准》(第3版)确定的AML诊断标准[4]，且经病理学确诊，所有患者及其家属对本研究知情且同意，本研究经濮阳市人民医院伦理委员会批准。其中男19例，女24例；年龄为19～53岁，平均(32.42±10.70)岁；按FAB标准进行分型：M1 9例、M2 9 例、M3 6例、M4 5例、M5 2例、M6 2例；正常核型AML 27例，异常核型AML 16例。

1.2 研究方法

1.2.1 治疗方法 43例患者均住院接受治疗，根据患者实际情况主要采用以下方案：①全反式维甲酸(ATRA)、亚砷酸(ATO)或两者联合治疗；②标准DA方案化疗；③减量DA方案化疗或CAG等预激方案化疗。

1.2.2 基因突变检测方法 ①FLT3基因突变：PCR反应扩增FLT3基因，涵盖基因外显子14和15，引物正义链：5’-GCAATTTAGGT ATGAAAGCCAGC-3’；反义链：5’-CTTTCAGCATTTTGA CGGCAACC-3’；在5 μl PCR产物于20 g/L琼脂糖凝胶上进行电泳，出现>329 bp的DNA 条带为FLT3+标本。②NPM1基因突变：扩增NPM1基因第12外显子，扩增产物长度329 bp；引物正义链：5’T YAACTCTCTGGTGGTACAATGAA-3’；反义链：5’TGITACAGAAATGAAATAAGACGG-3’；在5’端标记FAM基羧基荧光素；PCR总体系25 μl，反应条件：95 ℃预变性min，35个循环，72 ℃延伸6 min。1 μl PCR产物进行毛细管电泳，在215 bp峰之后出现额外峰为NPM1+标本。

1.2.3 随访 通过门诊、电话、视频等方式对患者进行随访，时间为1 a。

1.3 观察指标 观察患者基因突变发生情况及预后。

1.4 统计学方法 采用SPSS 10.0统计学软件进行数据处理分析，定性资料的组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 基因突变发生情况 43例患者初诊AML患者中共检出FLT3+AML 30例(69.77%)；其中正常核型AML 22例(81.48%)显著高于异常核型AML 8例(50.00%)(P<0.05)；共检出NPM1+AML 28例(65.12%)，其中正常核型AML 21例(77.78%)显著高于异常核型AML 7例(43.75%)(P<0.05)。见表1。

表1 43例患者基因突变发生情况[n(%)]

2.2 预后情况FLT3+AML患者完全缓解率与无复发率显著高于FLT3-AML患者(P<0.05)；NPM1+AML患者完全缓解率与总生存率显著高于NPM1-AML患者(P<0.05)。见表2。

表2 43例患者预后情况[n(%)]

注：与FLT3-比较，aP<0.05；与NPM1-比较，bP<0.05。

3 讨论

AML往往伴有严重的凝血功能障碍，常常引发致命性出血，颅内出血是患者出血性死亡的最主要原因，并且致命性出血通常发生在诱导治疗的早期。AML出血导致死亡的原因主要有[5-6]：血小板及其功能异常，首先表现为血小板减少及血小板生成障碍，进而表现为血小板的黏附、聚集及释放功能异常，临床表现为出血明显、止血困难等；凝血和纤溶指标均升高，血小板和凝血因子消耗，导致血栓形成和组织缺血；大量异常的白血病细胞增生浸润，使血管内皮损伤，血管通透性增高而导致大量出血；白血病细胞纤维蛋白(原)溶解及凝血因子等降解引发出血等。

FLT3和NPM1基因是AML患者突变频率较高的基因，国内外临床实践与研究中常将这两个基因推荐为基本检测项目，特别在染色体核型正常的患者，检测FLT3和NPM1基因突变是公认的可帮助判断治疗效果及预后的指标，在成人AML中，染色体核型正常的患者约占40%，其预后有明显的异质性。FLT3是Ⅲ型受体酪氨酸激酶的一种，在骨髓中仅表达于造血干细胞，正常生理情况下当配体与FLT3的细胞外结构域结合时，可诱发FLT3二聚体化，介导一系列细胞内信号传导，导致细胞增殖、活化；若FLT3基因发生突变，会发生非配体依赖性FLT3自身磷酸化，破坏正常血细胞的增殖分化、凋亡，从而引发白血病[7]。NPM1又称为核仁磷酸蛋白B23或核仁间质蛋白，是位于核仁颗粒区的主要蛋白分子之一，能穿梭于核仁、核质和胞质之间，参与核糖体前体运输和合成及中心体的复制，进而调控细胞的周期进程和增殖发育，其是白血病发生的始动因素[8]。

本文研究结果显示，43例患者初诊AML患者中共检出FLT3+AML 30例(69.77%)；其中正常核型AML 22例(81.48%)显著高于异常核型AML 8例(50.00%)；共检出NPM1+AML 28例(65.12%)，其中正常核型AML 21例(77.78%)显著高于异常核型AML 7例(43.75%)；FLT3+AML患者完全缓解率与无复发率显著高于FLT3-AML患者，NPM1+AML患者完全缓解率与总生存率显著高于NPM1-AML患者。结果数据表明，不同AML核型FLT3基因和NPM1基因突变存在差异，FLT3和NPM1基因突变对成人AML患者预后有一定的预测价值；本文结果NPM1+、FLT3-、NPM1+、NPM1-预后情况数值差异不够明显，可能与提供的例数较少有关，因此相关研究有待提供大规模数据进行深入论证。

综上所述，NPM1和FLT3基因突变是AML患者临床较为常见的基因突变，其与患者临床特点及预后有密切的相关性。

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10.3969/j.issn.1004-437X.2017.02.010

2016-06-26)