Aptima HPV联合宫颈液基细胞学筛查宫颈癌前病变的临床研究

范莹莹,张 健△,徐 冰

1.上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院妇科(上海 200123),2.北京大学第三医院妇科(北京 100191)

△通讯作者

Aptima HPV联合宫颈液基细胞学筛查宫颈癌前病变的临床研究

范莹莹1,张 健1△,徐 冰2

1.上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院妇科(上海 200123),2.北京大学第三医院妇科(北京 100191)

目的：探讨Aptima HPV联合宫颈液基细胞学在筛查宫颈癌前病变中的作用。方法：选择25～65岁有性生活史半年以上人群1506例作为研究对象，先进行TCT检查，ASC-US及以上患者均进行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus及阴道镜检查；并在宫颈细胞学阴性者中随机抽取5%行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus检测。结果：Aptima HPV E6/E7 mRNA随着宫颈病变级别的增加,其阳性率也增加且具有统计学差异(χ2=52.135,P<0.05),阳性率变动范围高于Cobas HPV DNA及CINtec-Plus，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA阳性率明显高于正常或炎症及CIN1的阳性率且具有统计学差异(χ2=49.625,P<0.05),CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA阳性率之间未发现有统计学差异(χ2=1.998,P>0.05)。灵敏度以Cobas HPV DNA最高,但其特异度仅45.45%为最低,特异度、阳性预测值、阴性预测值以Aptima HPV E6/E7 mRNA最高,Aptima HPV E6/E7 mRNA与Cobas HPV DNA的灵敏度无统计学差异(P>0.05)。结论：Aptima HPV联合宫颈液基细胞学筛查对于早期发现宫颈癌前病变具有重要的临床价值。

宫颈癌是威胁女性生命健康居第二位的恶性肿瘤,据统计全球每年新发宫颈癌达50余万例，每年有约23万的女性死于宫颈癌[1],我国每年新发宫颈癌约15万例,每年有约8万的女性死于宫颈癌,近年来,宫颈癌新发病例数逐年上升,且呈年轻化的趋势[2]。研究发现人乳头瘤病毒(Human papilloma virus, HPV)是宫颈癌发生和发展的首要因素，本研究拟以阴道镜活检病理诊断作为金标准[3]，评价宫颈液基细胞学分别联合Aptima HPV检测、Cobas HPV分型检测技术及罗氏CINtec-Plus细胞学检测，用于宫颈癌前病变筛查,期望发现更有效的宫颈癌联合筛查的方法,为宫颈癌筛查提供新策略。

材料与方法

1 一般资料 选取2014年5月至2016年5月就诊的25～65岁有性生活史半年以上人群1506例作为研究对象，纳入标准：无宫颈物理治疗及手术史，无盆腔放射史，均排除妊娠。采样前3 d无性生活、阴道冲洗及阴道炎。

2 研究方法 ①宫颈液基细胞学(TCT)检查：所有研究对象均将宫颈管内和鳞柱上皮交界处采集的细胞涮洗在TCT专用取样瓶中，经TCT专用制片机制成薄层涂片，经巴氏染色后镜检。宫颈细胞学诊断按照国际癌症协会推荐的TBS(2001)分类法[4]。所有研究对象均采用宫颈液基细胞学进行初筛，宫颈细胞学ASC-US及以上患者均进行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus及阴道镜检查；并在宫颈细胞学阴性的患者中随机抽取5%行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus检测，以评估筛查的漏检率。②Aptima HPV E6/E7 mRNA表达检测：采用TCT剩余标本，加入试剂处理后的标本采用QuantiVirus TM冷光仪检测；检测结果为光子数，经计算软件转换为拷贝数，≥1 copy/ml为阳性。③Cobas HPV DNA检测：将鳞柱上皮交界处和宫颈管采集的细胞涮洗在HPV专用取样瓶中，采用Cobas HPV(罗氏)评估HPV感染情况。④CINtec-Plus检测：采用罗氏的CINtec-Plus检测试剂盒(罗氏)，采用TCT剩余标本，进行检测，双染阳性的考虑为阳性，单染或者不染色的考虑为阴性。⑤组织病理学检查：阴道镜下宫颈活检病理作为金标准。对病检结果≥CIN2的患者行子宫颈电环切除(LEEP)或冷刀锥切术(CKC)，以获取进一步病理诊断。若不同部位有不同级别诊断，以病理级别最高者作为最后诊断。

3 统计学方法 资料采用Epi Data 3.0软件进行录入，采用SPSS 20.0统计学软件包进行统计分析，计数资料采用例数(百分比)表示，其比较采用χ2检验,评估检测结果的阳性率、阴性率、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值等，以P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 TCT、Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus检测和病理检查结果 见表1。1506例研究对象,TCT检查结果为未见上皮内病变及恶性细胞(NILM)1317例(87.45%)，≥无明确意义的非典型细胞的改变(ASC-US)189例(12.55%)，对189例≥ASC-US患者均进行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus及阴道镜检查，病理检查为CIN1、CIN2、CIN3、ICC(宫颈浸润癌)的患者，Aptima HPV E6/E7 mRNA总体阳性率为82.08%(142/173)，低于Cobas HPV DNA总体阳性率89.60%(155/173)且具有统计学差异(χ2=4.018,P<0.05),高于CINtec-Plus总体阳性率79.19%(137/173)，但无统计学差异(χ2=0.463,P>0.05)。Aptima HPV E6/E7 mRNA随着宫颈病变级别的增加，其阳性率也增加且具有统计学差异(χ2=52.135,P<0.05)，阳性率变动范围高于Cobas HPV DNA及CINtec-Plus，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA阳性率明显高于正常或炎症及CIN1的阳性率且具有统计学差异(χ2=49.625,P<0.05),CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA阳性率之间无统计学差异(χ2=1.998,P>0.05)。在1317例NILM的患者中随机抽取5%行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus检测,筛查的漏检率为1.52%(1/66)。

表1 病理检查结果与Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus检测结果关系 [例(%)]

2 Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus对CIN2诊断价值 见表2。本研究中灵敏度以Cobas HPV DNA最高,但其特异度仅45.45%为最低,特异度、阳性预测值、阴性预测值以Aptima HPV E6/E7 mRNA最高,Aptima HPV E6/E7 mRNA与Cobas HPV DNA的灵敏度无统计学差异(P>0.05),Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus特异度、阳性预测值、阴性预测值均具有统计学差异(P<0.05)。

表2 Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus对CIN2诊断价值(%)

讨 论

宫颈癌的主要致病病因为高危型的HPV,所以对女性检测是否感染高危型的HPV,对于防控宫颈癌的发病具有重要的意义[5]。宫颈液基细胞学联合HPV DNA已经在临床上广泛用于宫颈癌的普查，但是宫颈液基细胞学检查在宫颈感染HPV病毒等因素的协同作用下引起细胞核的形态学改变以后才能进行临床诊断，所以其不能早期发现疾病，HPV DNA检测只是能够对病毒感染的类型进行判断，不能够表达感染病毒的致癌基因活性[6]，所以寻找能够早期发现高危人群的筛查办法是十分必要的。

目前有研究[7]发现高危HPV感染,会引起宫颈上皮内发生病变后,导致E6、E7的表达增多,而E6、E7基因是HPV编码区中的癌基因,基因编码产物E6、E7蛋白联合发挥作用,可抑制P53蛋白功能,从而抑制细胞凋亡,E7蛋白还可通过抑制pRB使细胞周期失控。研究发现E6/E7mRNA的表达与宫颈病变程度呈正相关[8]。本研究发现Aptima HPV E6/E7 mRNA随着宫颈病变级别的增加，其阳性率也增加，阳性率变动范围高于Cobas HPV DNA及CINtec-Plus，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA阳性率明显高于正常或炎症及CIN1的阳性率，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA阳性率之间未发现具有统计学差异。灵敏度以Cobas HPV DNA最高，但其特异度仅45.45%为最低，特异度、阳性预测值、阴性预测值以Aptima HPV E6/E7 mRNA最高，未发现Aptima HPV E6/E7 mRNA与Cobas HPV DNA的灵敏度具有统计学差异。进一步验证了E6/E7 mRNA 表达是宫颈癌发生发展的必经步骤，E6/E7基因的转录产物E6/E7mRNA 反映了癌基因活性，其相比DNA，E6、E7 mRNA与病变的相关性更好。

综上所述，Aptima HPV联合宫颈液基细胞学筛查对于早期发现宫颈癌前病变具有重要的临床价值。

[1] 易利红.hTERC基因与宫颈癌前病变及宫颈癌发生发展关系的探究[J].海南医学院学报,2016,22(11)：1141-1144.

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[3] 罗 旻,谭诗生,倪婷婷,等.宫颈癌术后盆腔不同体外照射疗法的剂量学研究[J].贵州医药,2014,38(6):498-501.

[4] 潘秦镜.TBS(2001)判读要点及鉴别诊断[C].//第九届全国子宫颈癌前期病变暨子宫肿瘤高峰论坛论文集,2012：121-124.

[5] 崔亚杰,张培莲.宫颈上皮内瘤变中人乳头瘤病毒基因分型及感染状况研究[J].陕西医学杂志,2015,44(10)：1308-1309.

[6] Sarah I, Maria TS, Sara B,etal.Tissue Genotyping of 37 In Situ and Invasive Cervical Cancer With a Concomitant Negative HC2 HPV DNA Test[J].Journal of Lower Genital tract Disease, 2014,18(1):87-91.

[7] Broccolo F, Fusetti L, Rosini S,etal.Comparison of oncogenic HPV type-specific viral DNA load and E6/E7 mRNA detection in cervical samples: Results from a multicenter study[J].Journal of Medical Virology,2013,85(3):472-482.

[8] 张魏芳.高危型人乳头瘤病毒早期蛋白E6和E7调控细胞周期的机制研究[D].山东大学, 2010.

(收稿：2016-06-20)

子宫颈肿瘤 多相筛查 @Aptima HPV @液基细胞学 @罗氏CINtec-Plus细胞学检测

R737.33

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.02.009