人脐带血间充质干细胞条件培养基在白血病患儿口腔黏膜炎中的疗效观察

门倩倩 曹秀艳 卢伟 吴南海

(解放军海军总医院，北京 100048)

人脐带血间充质干细胞条件培养基在白血病患儿口腔黏膜炎中的疗效观察

门倩倩 曹秀艳 卢伟 吴南海

(解放军海军总医院，北京 100048)

目的 探讨人脐带血间充质干细胞条件培养基在白血病患儿口腔黏膜炎中的临床疗效。方法 2015年1-12月收治的白血病患儿312例，共发生口腔黏膜炎124例，随机分为两组，每组62例。对照组采用生理盐水漱口后，在溃疡面涂抹外用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子凝胶(金扶宁rhGM-CSF)；观察组采用生理盐水漱口后，在溃疡面涂抹人脐带血间充质干细胞培养基(hUCB-MSC-CM)。观察两组患儿口腔创面愈合时间及愈合率。结果 观察组口腔创面愈合时间5～14 d，愈合率91.9%；对照组口腔创面愈合时间5～14 d，愈合率67.7%，观察组明显优于对照组(P<0.05)。 结论 人脐带血间充质干细胞培养基在白血病患儿口腔黏膜炎中疗效显著。

人脐带血间充质干细胞条件培养基; 白血病患儿; 口腔黏膜炎; 护理

Human umbilical cord blood mesenchymal stem cell conditioned medium; Leukemia in children; Oral mucositis; Nursing

白血病是造血干细胞出现恶性克隆性疾病，骨髓中出现大量的原始细胞和幼稚细胞，机体正常的造血功能受到抑制。化学药物治疗是恶性肿瘤的重要治疗手段[1]，而口腔黏膜炎(Oral mucositis,OM)是白血病患儿化疗中的常见并发症之一。随着化疗方案的不断发展，大剂量化疗药物及联合用药的应用，化疗患儿并发口腔炎的发生率达66%，更高可达88%[2-3]。为了使患儿在化疗过程中，免受口腔黏膜炎所带来的痛苦，我们选用人脐带血间充质干细胞培养基(hUCB-MSC-CM)预防和治疗白血病患儿口腔黏膜炎，疗效显著。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2015年1-12月我科使用大剂量化疗后发生口腔黏膜炎的白血病患儿124例，男74例，女50例，年龄6个月至13岁，中位年龄4.75岁。将患儿随机分为对照组和观察组，每组62例。对照组患儿在口腔溃疡面涂抹外用重组人粒细胞刺激因子凝胶(rhGM-CSF),观察组患儿涂抹人脐带血间充质干细胞条件培养其(hUCB-MSC-CM)。其中，急性淋巴细胞白血病53例，急性非淋巴细胞白血病71例，两组患儿均处于粒缺期，中性粒细胞绝对值0～0.5×109/L，根据口腔黏膜受损情况，将口腔黏膜炎分0～Ⅳ级[4]。见表1。两组患儿性别、年龄及口腔黏膜炎程度比较差异无统计学意义(P>0.05) ，具有可比性。

表1 124例患儿口腔黏膜炎分级

1.2 方法

1.2.1 hUCB-MSC-CM获取 人脐带血(Human umbilical cord blood,hUCB)间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCS)条件培养基(Conditioned medium,CM)的制备方法：在无菌条件下收集足月健康新生儿的脐带血，经肝素抗凝、离心后分离、培养、传代hUCB-MSCS、用倒置显微镜观察不同时期细胞的生长情况和形态特征，并用酶标仪监测细胞增殖情况，待细胞融合达80%时更换培养基，在继续培养24 h后收集培养上清液即为人脐带间充质干细胞条件培养基(hUCB-MSC-CM)。hUCB-MSC-CM由我们儿科实验室自行研制，脐带血从废弃的脐带中获得，并经产妇同意，签署同意书。实验方案经过医院医学伦理委员会批准，不涉及伦理问题。

1.2.2 对照组 每日生理盐水漱口，不能漱口患儿或较小患儿给予无菌棉球口腔护理后，在溃疡面涂抹外用重组人粒细胞刺激因子凝胶(rhGM-CSF100 μg/cm2),3次/d。

1.2.3 观察组 每日生理盐水漱口，不能漱口患儿或较小患儿给予无菌棉球口腔护理后，用无菌棉球或无菌棉签沾取hUCB-MSC-CM，覆盖溃疡面,3次/d，方法同对照组。对于有融合性溃疡，能含漱的患儿，采用hUCB-MSC-CM，3～5 mL含漱3～5 min以上的时间，3次/d。告知患儿不要咽下，30 min内不要进食，2周为一个疗程。

1.3 评价方法 观察口腔黏膜愈合时间；2周后观察口腔黏膜的情况：有效：溃疡完全愈合或溃疡面积较前减小，有新鲜肉芽组织增生。无效：破溃无明显变化。

2 结果

两组患儿口腔黏膜创面愈合情况比较 见表2和表3。

表2 两组患儿口腔黏膜创面愈合时间对比 例

P<0.05

表3 两组患儿治疗效果比较 例

3 讨论

儿童白血病是小儿恶性肿瘤最常见的一种,化疗、放疗是急性白血病治疗的主要措施，但因化疗药物、免疫制剂、激素的应用可使粒细胞持续而严重缺乏，机体抵抗力明显下降，使感染成为白血病患儿死亡的重要原因之一[5]。而口腔感染是白血病患儿化疗后最常见的并发症[6]，采取有预见性的护理，对提高患儿的生活质量有重要意义。

目前，国内临床上常选用外用重组人粒细胞刺激因子凝胶(rhGM-CSF)[7]，主要成分为重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子，rhGM-CSF有效启动创面愈合，促进创面坏死组织脱落；具有保湿浸润作用，使创面在湿润环境下有利于上皮细胞及其修复细胞的增生，有效促进创面的愈合；具有良好的安全性和有效性。

hUCB-MSC-CM中含有血管内皮生长因子(VEGF)，成纤维细胞生长因子(FGF)、血小板源生长因子(PDGF)、转化生长因子(TGF-β)、肝细胞生长因子(HGF)等。这些生长因子可以参与多种细胞反应。如VEGF可以形成功能性血管，有效促进血管再生，促进创伤组织的修复[8]；TGF-β在组织的创伤修复中，一方面发挥炎症的介质作用，减少炎症细胞的迁移和促进炎症反应的消退；另一方面，可促进细胞外基质如胶原蛋白、纤粘连蛋白的表达，促进细胞形态发生、增殖和分化，诱导血管形成。Hirshberg等[9]研究发现，TGF-β对于黏膜损伤早期治疗效果更加显著；FGF可调节细胞代谢和促进血管生成。商振球等[10]认为FGF可以为创面的愈合提供蛋白等营养，使上皮细胞加快生长，加快创面愈合；PDGF可促进炎症反应、肉芽组织形成、再上皮化、基质形成与重塑，Cheng等[11]实验表明PDGF可促进创面的愈合，明显提高愈合质量，参与血管的生成与重构；HGF、VEGF具有抗血管内皮、肾小管及肝细胞凋亡的作用，而HGF除了抗凋亡外，还能促进有丝分裂并通过抑制TGF-β表达起到抗纤维化作用；hUCB-MSC-CM中存在MSCS合成和分泌包括钠尿肽、降钙素基因相关肽、内皮素等在内的多种调节肽，参与细胞存活与保护、心血管调节和组织修复[12]。hUCB-MSC-CM原材料从废弃的脐带中获取，并由产妇同意，签署同意书，也是脐带血间充质干细胞培养中的“副产品”，可以在体外大量的制备，不属于国家规定干细胞三类技术范畴内,国家卫计委2015年发布的《干细胞临床研究管理办法》中细胞培养条件培养基不属于其范畴，具有可行性，实验方案经过医院医学伦理委员会批准，不涉及伦理问题。在大剂量化疗导致口腔黏膜炎的患儿中，疗效显著，使用方法简单。但机制有待进一步研究，具有较大的临床应用前景。

综上所述，化疗药物影响了口腔黏膜上皮细胞的正常代谢和更新，而黏膜的修复取决于该部位黏膜的血液供应及细胞生长繁殖的速度, hUCB-MSC-CM可以提供白血病患儿化疗后缺乏的各种细胞因子，为促进溃疡面愈合提供了更好的条件，因此给予hUCB-MSC-CM护理干预后，疗效较外用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子凝胶显著，缩短了口腔黏膜炎愈合的时间，提高了溃疡面的愈合率，减轻了患儿的痛苦。

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门倩倩(1986-), 女,山东,本科,主管护师，护士长,从事临床护理及管理工作

R473.73,R733.7

B

10.16821/j.cnki.hsjx.2017.03.022

2016-10-10)