铁皮石斛的组培快繁技术研究进展
2017-02-04刘和平唐海尧林剑波张俊丽李彤丰关广胜
陈 勇 刘和平唐海尧 林剑波 张俊丽 李彤丰 关广胜
（阳江职业技术学院，广东 阳江 529566）
铁皮石斛的组培快繁技术研究进展
陈 勇 刘和平*唐海尧 林剑波 张俊丽 李彤丰 关广胜
（阳江职业技术学院，广东 阳江 529566）
铁皮石斛是我国名贵濒危药材，药效显著，但是传统种植方法繁殖率低，利用组织培养繁殖技术，扩大铁皮石斛产量，成为提高其经济价值的重要方式。本文参考多年来国内外铁皮石斛组织培养相关文献，对铁皮石斛的快速繁殖关键技术进行了总结。
铁皮石斛；组织培养；快速繁殖
1 铁皮石斛快速繁殖关键技术
1.1 外植体选取
铁皮石斛自然繁殖率低下，因此，利用组织培养技术来快速繁殖是解决铁皮石斛种苗的有效途径。目前，铁皮石斛外植体主要有种子、无菌苗幼苗茎段等。饶宝蓉[3]等研究表明，从无菌系建立效率来看，种子外植体优于茎段外植体，种子诱导感染率为8%～13%，而茎段诱导感染率为48%～62%。从生长整齐度来看，也是种子外植体优于茎段外植体。
2.2 初代培养基选择
在铁皮石斛的组织培养技术中，选择合适的培养基是尤为关键的环节，不同的物种、同一物种不同品种、同一植物不同位置的外植体材料，在不同培养阶段、不同培养目的，所对应的最适培养基也不同。
2.2.1 基本培养基。初代培养基时常用诱导或分化培养基，培养基中的生长素和细胞分裂素的配比和浓度最为重要，诱导不定芽时，需要较高的细胞分裂素。诱导愈伤组织形成，增加生长素的浓度，并补充一定浓度的细胞分裂素是十分必要的。铁皮石斛组织培养基包括MS、1/2MS、改良MS、B5、VW等，主要由于外植体来源不同所致。
林江波[4]等研究得出，通过对各处理因子不同水平的SSR检验，MS和1/2MS基本培养基的诱导率均值分别为28.5和17.3，差异不显著，与VW诱导率均值4.9差异达到显著水平；杨立昌[5]等研究发现，铁皮石斛的愈伤组织在1/2MS培养基上的出芽率比MS培养基要好，说明在适当的激素浓度及其组合下，低盐培养基有利于不定芽的分化。
2.2.2 激素及添加物。铁皮石斛的愈伤组织培养常用的基本激素主要有6-BA、2，4-D、NAA、IBA等。常用的添加物主要为一些天然有机物，这些都能够为外植体提供一些必要的微量营养成分、生理活性物质和生长激素等，对铁皮石斛原球茎的增殖和分化有促进作用。王福喜[6]通过试验发现，添加6-BA 4.0mg/L+NAA 0.5mg/L+IBA 0.3mg/L的改良MS培养基培养，增值率1∶5以上，可见增值率高。蒋向辉[7]等在用赤霉素处理对幼叶成苗的试验中发现，成苗率明显较高，且最适浓度是1.5mg/L。
2.3 继代培养基选择
铁皮石斛原球茎增殖是铁皮石斛组织培养过程中一个十分重要的环节，通过诱导石斛产生原球茎，可为之后的分化、壮苗生根奠定基础。培养基中，植物生长调节剂对植物细胞分裂、诱导器官形成和次生产物的合成都具有重要作用。但由于不同品种或不同增殖途径等原因，所研究得出的结果也不尽相同。
2.3.1 原球茎增殖与分化。唐桂香[8]等研究表明，不论是固体还是液体培养基，均以添加6-BA 1.0mg/L和NAA 0.1mg/L有利于原球茎诱导增殖，增殖系数分别达到10.3和17.1。林江波[4]等研究表明，通过对各处理因子不同水平的SSR检验，原球茎增殖的最佳培养基为MS9+蔗糖30g/L；原球茎分化的最佳培养基为1/2MS+蔗糖10g/L+10%马铃薯泥；陈兆贵[9]等研究表明，原球茎增殖以MS+NAA 1.0mg/L+6-BA 1.0mg/L+KT 1.0mg/L培养增殖倍数达到5倍；原球茎分化以MS+NAA 1.0mg/L+6-BA 3.0mg/L+KT 1.0mg/L培养分化率达84%。
谢启鑫等[10]研究得出，原球茎增殖的最佳培养基为1/2MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA+20%马铃薯提取液，每代增殖16倍，原球茎形态好、变异少；原球茎团于1/2MS+2mg/L 6-BA+0.25mg/LNAA+20%马铃薯提取液的培养基上可诱导丛芽分化，于MS+0.5mg/LNAA+20%香蕉汁+活性炭5g/L的培养基上易于诱导不定根的形成，60d后可形成健壮的完整小植株。
2.3.2 芽增殖。李宏博[11]等研究表明，在B5+蔗糖30 g/L+NAA 0.2mg/L＋香蕉汁100mg/L＋琼脂5.5g/L培养，芽增殖效果较优。蔺红苹[12]等研究，以石斛兰幼芽得出较好的继代培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+2，4-D 0.5mg/L+10%椰乳。在试验结果中可以看出，在适宜石斛兰生长的生长素和细胞分裂素浓度的范围内，生长素和细胞分裂素的比值越小，越有利于芽的生长。且在培养基中添加适量的活性碳，可以防止植物组织自身的酚类物质排泌和变褐老化，对形态发生和器官形成有良好作用，通常使用浓度为0.5～10g/L。
在前人研究的结果中可以看出，不同的研究人员，在铁皮石斛培养的不同阶段，所得出的结果都有小的区别。这可能跟不同研究人员选取的铁皮石斛品种不同、外植体类型不同而造成。因此，在铁皮石斛组织培养的培养基配方选择上，要根据具体的品种、外植体类型等实际情况选择培养配方。
1 自美发,黄敏.铁皮石斛组培技术研究[J].安徽农业科学，2008（36）
2 陆兵.铁皮石斛组织培养研究进展[J].黑龙江农业科学，2009（2）
3 饶宝蓉，陈泳和，江文清等.铁皮石斛不同外植体组培快繁技术比较[J].安徽农业科技，2017（4）
4 林江波，王伟英，李海明等.铁皮石斛茎段原球茎的诱导、分化与植株再生[J].福建农业学报，2016（31）
5 杨立昌，乙引等.铁皮石斛快速繁殖体系研究[J].北方园艺，2010（22）
6 王福喜.铁皮石斛组织培养研究[J].阴山学刊，2011（1）
7 蒋向辉，余朝文等.不同激素浓度对铁皮石斛高效快速繁殖体系的影响[J].江苏农业科学，2010（1）
8 唐桂香，黄福灯，周伟军.铁皮石斛的种胚萌发及其离体繁殖研究[J].中国中药杂志，2005（20）
9 陈兆贵，谭俊.不同激素配比对铁皮石斛组织培养的影响研究[J].惠州学院学报，2006（3）
10 谢启鑫，宋小明，黄东华，等.铁皮石斛的种子培养[J].北方园艺，2010（8）
11 李宏博，张宏宇，朴钟云.铁皮石斛组织培养研究[A].第九届全国药用植物及植物药学术研讨会论文集[C]，2010
12 蔺红苹.不同培养基成分对石斛兰继代和生根的影响[J].北方园艺，2010（4）
陈勇（1986-），男，广东吴川人，助理实验师，从事园艺专业教学与科研工作。
*通讯作者：刘和平（1976-），湖南衡阳人，博士，副教授，从事园林植物生物技术、园林植物栽培。
（责任编辑 王蔓）
