金标法、间接血凝法与酶联免疫法检测弓形虫IgG抗体的对比研究

张克传

266041山东省青岛市第三人民医院检验科

金标法、间接血凝法与酶联免疫法检测弓形虫IgG抗体的对比研究

张克传

266041山东省青岛市第三人民医院检验科

目的：探讨金标法、间接血凝法与酶联免疫法检测弓形虫IgG抗体的价值。方法：利用金标法、间接血凝法与酶联免疫法平行检测12只实验感染弓形虫家兔的血清，作为观察组；对12只正常的、未感染弓形虫的家兔进行血清平行检测，作为对照组。结果：金标法、间接血凝法的特异性、敏感性、检测效率以及综合评分均明显高于酶联免疫法(P＜0.05)。结论：金标法、间接血凝法更加适用于实验动物家兔弓形虫IgG抗体检测，金标法、间接血凝法与酶联免疫法3种方法在平行检测中缺乏一致性。

金标法；间接血凝法；酶联免疫法；弓形虫IgG抗体

弓形虫是寄生于猫科动物肠道的一种寄生虫，同时，人体脑、心脏、眼、肺、淋巴结等组织也是弓形虫的寄生场所。弓形虫是一种机会致病原虫，寄生宿主免疫功能低下时，便可能导致严重后果。全世界范围内，弓形虫广泛分布，其中西方发达国家和地区弓形虫的感染率比较高，国外相关报道称，人群弓形虫平均感染率25%～50%。近年来，我国人群感染弓形虫病原体的比例越来越大，弓形虫病原体感染会引起人畜共患病，因此，探究有效的检测方式是十分有必要的。目前常用的检测方法有金标法、间接血凝法与酶联免疫法。本次调查研究旨在探究这些方法检测弓形虫IgG抗体的临床价值，为防治工作提供一定的参考，现报告如下。

资料与方法

阳性血清(家兔血清呈阳性)：12只实验感染弓形虫病原体家兔血清(由上海市疾控中心提供)，并且要用染色方法对这已经确诊的12只感染家兔血清进行阳性标记。

阴性血清(家兔血清呈阴性)：12只正常健康家兔血清(由上海市疾控中心提供)，并且要用染色方法对这已经确诊的12只健康家兔血清进行阴性标记。

试剂的选用：本次调查研究所采用的所有试剂均由珠海海泰生物有限公司提供，其生产批号及主要成分为：①显色液 A，720130867；②显色液 B，730140847；③酶标记物，20131007；④样品稀释液，72014064；⑤终止液，740131215； ⑥ 浓 缩 洗 涤 液 ，772540263；⑦阴性对照，20131108；阳性对照，20131108；临界对照，20131108。

仪器：恒温培养箱(Thermo815)、微型振荡器、酶标仪(SPECTRAmax340pc)、各种刻度的微量移液器有机玻璃板(12×8 孔1100V)等。

检测方法：间接血凝法：①配置诊断液：严格按照标示的毫升数在试剂中添加无菌蒸馏水，并且稀释摇匀，离心10 min，将清液弃除，加上等量的稀释液，放置在4℃下静置24 h。②添加稀释液：每个样品都需要增加3孔稀释液，均设置阴性血清、阳性血清、空白进行对照，阳性和阴性血清添加8孔稀释液。③加待测血清。④稀释：已经定性的检测稀释需要到达第3孔，对照组家兔血清需要到达第7孔。⑤添加诊断液：添加完成之后，要将反应板放置于微量振荡器，并且振荡1～2 min。⑥判定检测结果：阳性血清表示为“+”，阴性血清表示为“-”。金标法的操作步骤与间接血凝法相似。

酶联免疫法：①配制洗涤液：用去离子水对浓缩洗涤液进行10倍稀释。②稀释样品：稀释比例1:100，并且液体要充分摇匀。③加样反应：将加板条固定在板架上，其他板条均密封安置在密封袋中保存。④加酶反应：将孔中的液体甩净，洗板3次。⑤显色反应。⑥反应终止：酶标仪结果显示450 nm为终止反应的判定标准。⑦判断检测结果：阳性血清表示为“+”，阴性血清表示为“-”。

结果

金标法、间接血凝法的特异性93.33%、敏感性47.58%、检测效率100%以及综合评分(总符合率86.75%)均明显高于酶联免疫法的血凝法的特异性81.25%、敏感性35.42%、检测效率91.00%以及综合评分(总符合率71.89%)。

金标法、间接血凝法的阳性检出率分别为75%(9/12)和83.33%(10/12)，阴性检出率分别为 25%(3/12)和16.67%(2/12)；酶联免疫法阳性检出率为 58.33%(7/12)，阴性检出率为41.67%(5/12)。

讨论

本次调查研究的结果显示，金标法、间接血凝法的特异性93.33%、敏感性47.58%、检测效率100%以及综合评分(总符合率86.75%)均明显高于酶联免疫法的血凝法的特异性81.25%、敏感性35.42%、检测效率91.00%以及综合评分(总符合率71.89%)。这充分地证实了金标法、间接血凝法检测的高效性、安全性。国外相关报道称，人群弓形虫平均感染率25%～50%，因此，应积极推广应用金标法、间接血凝法检测弓形虫IgG抗体，能够有效防治危害的发生，从而降低感染率。

金标法、间接血凝法检测弓形虫IgG抗体旨在控制血清性质，提高阳性检出率，通过配置诊断液、添加稀释液、加待测血清、稀释、添加诊断液、判定检测结果这样严格操作的步骤，来检测血清阳性、血清阴性，达到判断病情的目的。

综上所述，金标法、间接血凝法更加适用于实验动物家兔弓形虫IgG抗体检测，金标法、间接血凝法与酶联免疫法3种方法在平行检测中，缺乏一致性。但是我们不能忽略酶联免疫法检测弓形虫IgG抗体的临床价值，3种方法的检测价值还需要时间的检验。

[1]辛连芳,宋任浩.金标法与间接血凝法检测献血者弓形虫IgG抗体符合性评价[J].现代检验医学杂志,2013,28(2):129-131.

[2]杨亚晓,陈玉昆,魏世锦,等.3种方法检测弓形虫IgG抗体的效能[J].中国血吸虫病防治杂志,2014,17(1):109-110.

[3]Xu Xia,Xie Jin,Chen Baiming,et al.The establishment and application of IgG antibody in serum Toxoplasma gondii[J].Journal of Guangzhou Medical College,2001,29(1): 26-27.

[4]Xu Xia,Xie Jin,Chen Baiming,et al.Study on the detection of Toxoplasma gondii IgG antibody by[J].Journal of Guangzhou Medical College,2000,13(1):135-136.

[5]刘帅,崔丽丽,王贝贝,等.几种弓形虫IgG抗体检测方法的比较分析[C].中国畜牧兽医学会 2011学术年会论文集,2011(12): 432-433.

广东二类疫苗全面集中采购

2017年1月10日，广东省第二类疫苗集中采购系统上线运行，共涉及71个品规，43家生产企业，标志着广东省已全面实施第二类疫苗省级平台集中采购。据悉，广东省卫生计生委将联合有关部门进一步加强对第二类疫苗采购、储运、供应和使用工作的监督管理，规范冷链配送和温度监测，全面加强预防接种工作规范管理，确保第二类疫苗集中采购及接种工作安全有序。

(据www.news.cn)

Comparative study of gold standard method,indirect blood coagulation method and enzyme linked immunosorbent assay for the detection of toxoplasma gondii IgG antibody

Zhang Kechuan
Department of Clinical Laboratory,the Third people's Hospital of Qingdao City,Shandong Province 266041

Objective:To explore the value of gold standard method,indirect blood coagulation method and enzyme linked immunosorbent assay for the detection of toxoplasma gondii IgG antibody.Methods:We used the gold standard method,indirect blood coagulation method and enzyme linked immunosorbent assay to detect the serum of 12 experimental rabbits infected with toxoplasma gondii,as the observation group,and we detected the serum of 12 normal rabbits without infection of toxoplasma gondii, as the control group.Results:The specificity,sensitivity,detection efficiency and comprehensive score of the gold standard method, indirect blood coagulation method were significantly higher than those of the enzyme linked immunosorbent assay(P＜0.05). Conclusion:Gold standard method and indirect blood coagulation method were more suitable for the detection of toxoplasma gondii IgG antibody in experimental animals,and there have the lack of consistency among the 3 methods of gold standard method, indirect blood coagulation method and enzyme linked immunosorbent assay.

Gold standard method;Indirect blood coagulation method;Enzyme linked immunosorbent assay;Toxoplasma gondii IgG antibody

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.1.1