膝骨痹康袋泡熏洗剂的抗炎镇痛药效学研究

2017-01-18黄露露张艺强蔡唐彦赖兴泉盛录张英杰詹正烜郑乃熙苏友新福建中医药大学福建福州350122

福建中医药 2016年6期

黄露露，张艺强，蔡唐彦，赖兴泉，盛录，张英杰，詹正烜，郑乃熙，苏友新（福建中医药大学，福建福州350122）

·博硕园地·

膝骨痹康袋泡熏洗剂的抗炎镇痛药效学研究

黄露露，张艺强，蔡唐彦，赖兴泉，盛录，张英杰，詹正烜，郑乃熙，苏友新（福建中医药大学，福建福州350122）

目的探讨膝骨痹康袋泡熏洗剂的抗炎和镇痛效果，为该制剂在治疗膝骨关节炎的临床应用提供药效学实验依据。方法采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验和小鼠腹腔毛细血管通透性实验，观察膝骨痹康袋泡熏洗剂对急性炎症的影响；通过大鼠棉球肉芽肿实验，探讨其对慢性炎症的抑制效果；通过冰醋酸致小鼠扭体实验和小鼠热板法实验，探讨其镇痛效果。结果膝骨痹康袋泡熏洗剂可抑制小鼠耳廓肿胀度、毛细血管通透性及大鼠棉球肉芽组织生长，可明显减少小鼠扭体次数，提高小鼠的痛阈值。结论膝骨痹康袋泡熏洗剂有显著的抗炎和镇痛效果。

膝骨痹康袋泡熏洗剂；抗炎；镇痛；药效学

膝骨关节炎（knee osteoarthritis，KOA）是中老年人常见病，中医学认为其属“膝骨痹”范畴。传统医学对此有良好的疗效［1-2］，中药熏洗疗法具有药物与温热理疗的双重作用，其疗效在KOA临床治疗中得到肯定［3-4］。“骨关节炎洗方”为导师苏友新教授外用熏洗治疗KOA的经验方，由骨碎补、制川乌、红花等中药组成，具有祛风湿、止痹痛、通经络、强筋骨之功效，适用于肝肾气血虚损、风寒湿瘀痹阻为基本病机的KOA患者，对缓解关节疼痛、肿胀，关节功能障碍等疗效确切［5］。鉴于原方在临床应用过程中存在煎煮费时、繁琐等不便因素，课题组前期已进行“骨关节炎洗方”的剂型改良并制成袋泡剂，命名为“膝骨痹康袋泡熏洗剂”［5］。本研究针对膝骨痹康袋泡熏洗剂抗炎镇痛效应进行相关实验，旨在为其临床推广应用提供药效学实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物1月龄昆明种小鼠，雄性120只，雌性40只，体质量18～22 g；3月龄Wistar大鼠，雄性40只，体质量200～220 g。所有实验动物均为SPF级，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，实验动物许可证号：SCXK（沪）2012-0002。

1.2 实验药品与试剂双氯芬酸二乙胺乳胶剂（扶他林，北京诺华制药有限公司，批号：X4290）；骨关节炎洗方药液：按照临床用法煎煮而得，将每剂骨关节炎洗方173 g原药材用布包好，先加水3 000 mL，浸泡30 min，煎煮30 min，最后浓缩得药液2 000 mL，制成每毫升含86.5 mg生药材的水煎液；膝骨痹康袋泡熏洗剂：由福建中医药大学中药制剂研究室制备，每剂173 g原药材制得74.5 g袋泡剂颗粒，使用时用2 000 mL的90℃左右热水冲泡，搅拌5 min，制成每毫升含37.3 mg颗粒剂的袋泡剂药液（其生药材浓度同洗方药液）；冰醋酸（国药集团化学试剂有限公司，批号：20140422）；伊文思蓝（国药集团化学试剂有限公司，批号：W20141201）；二甲苯（国药集团化学试剂有限公司，批号：201504 09）；水合氯醛（国药集团化学试剂有限公司，批号：20140509）；注射用青霉素钠（80万U/支，上海新先锋药业有限公司，批号：140902）。

1.3 实验仪器智能热板仪（成都泰盟软件有限公司，型号：RB-200），万分之一电子分析天平（上海精天电子仪器有限公司，型号：FA604A）；足趾容积测量仪（安徽正华生物仪器设备有限公司，型号：ZH-YLS-7B）；双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司，型号：TU-1901）；高速低温离心机（美国BECKMAN公司，型号：64R）；直径8 mm打孔器（福建中医药大学实验动物中心自制）。

1.4 实验方法

1.4.1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验取昆明种雄性小鼠40只，采用随机数字表法分为空白对照组（简称空白组）、骨关节炎洗方组（简称洗方组）、膝骨痹康袋泡熏洗剂组（简称袋泡剂组）、扶他林乳胶剂组（简称扶他林组），每组10只。空白组予（39± 1）℃的温水湿敷右耳廓30 min；洗方组予（39±1）℃中药水煎液湿敷右耳廓30 min；袋泡剂组予（39± 1）℃的袋泡熏洗剂湿敷右耳廓30 min；扶他林组用棉签取扶他林乳胶剂涂擦右耳廓，每次0.05 g/20 g。以上各组均分别于每日9时与15时各干预1次，连续3 d。于末次干预30 min后，用二甲苯0.05 mL涂抹小鼠右耳廓致炎，左耳廓不涂做对照。致炎后30 min，将小鼠脱颈处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径为8 mm的打孔器在两耳廓相同部位打下圆形耳片，随即称重，计算两耳片差值作为肿胀度，以此衡量药物的抗炎效应。

肿胀度/mg＝致炎后小鼠右耳平均重量－小鼠左耳平均重量。

1.4.2 小鼠毛细血管通透性实验取昆明种雄性小鼠40只，分组及干预方法同1.4.1，给药部位为小鼠腹部皮肤。各组小鼠末次干预后1 h，以0.1 mL/10 g的剂量尾静脉注射1%伊文思蓝生理盐水溶液后，立即腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL/只；30 min后脱颈处死小鼠，剪开腹腔，用5 mL生理盐水冲洗腹腔3次，收集洗涤液；3 000 r/min离心15 min，在紫外分光光度计590 nm处测定吸收度（OD值），比较各组平均OD值以评估药物对小鼠毛细血管通透性增高的影响。

1.4.3 大鼠棉球肉芽肿实验取Wistar雄性大鼠40只，随机分成模型组、洗方组、袋泡剂组、扶他林组，每组10只。各组大鼠在无菌环境下用10%水合氯醛麻醉，背部右侧肩胛区靠腋下备皮后用碘酒消毒，75%酒精脱碘后，切开1 cm长的小口，用眼科镊子将已称重为20 mg的高压灭菌棉球，从小切口植入皮下，随即缝合皮肤后，覆盖以一次性创可贴。并从手术当日开始，每只大鼠每日腹腔注射8万单位青霉素，连续3 d。各组于术后第2天开始干预，模型组予以（39±1）℃的温水湿敷30 min；洗方组予（39±1）℃的中药水煎液湿敷30 min；袋泡剂组予（39±1）℃的袋泡熏洗剂湿敷30 min；扶他林组用扶他林乳胶剂涂擦，每次0.05 g/20 g。以上各组给药部位均为离手术切口周围1 cm的范围（避开手术切口），于每日9时与15时各干预1次，从手术第2天开始连续给药12 d。第13 d脱颈处死各组大鼠，打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，放入60℃烘箱中烘干12 h称重。将称得的重量减去棉球原重量即得肉芽肿的重量，比较各组平均肉芽肿重量并计算抑制率以分析各组药物对肉芽肿的抑制作用。

肉芽肿抑制率/%＝［（模型组平均肉芽组织重量－给药组平均肉芽组织重量）/模型组平均肉芽组织重量］×100%。

1.4.4 小鼠热板法实验取昆明种雌性小鼠40只，分组及干预方法同1.4.1，干预部位为小鼠双后足。先将智能热板仪接通电源，温度至（55±0.5）℃后，将小鼠依次放入仪器内，小鼠从放在热板上至出现舔后足所需时间（s）作为该鼠药前痛阈值（痛觉反应时间），剔除舔后足时间＜5 s或＞30 s或跳跃的小鼠，以确保各组小鼠药前痛阈值具有可比性。各组小鼠分别在末次干预后0.5、1、2 h测量药后痛阈值，痛阈值超过60 s者按60 s计算，再统计药后以上3个时间点各组痛阈提高率的平均值（药后痛阈值－药前痛阈值）。

1.4.5 冰醋酸致小鼠扭体实验取昆明种雄性小鼠40只，分组、干预方法及给药部位同1.4.2。各组小鼠末次干预30 min后腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.2 mL/只。观察并计算各组小鼠注射冰醋酸溶液后20 min内出现的平均扭体次数，再计算各组的镇痛率以评价各组药物对化学致痛的抑制效应。镇痛率/%＝［（空白组平均扭体次数－给药组平均扭体次数）/空白组平均扭体次数］×100%。

1.5 统计学处理使用SPSS 18.0统计软件进行数据分析。计量资料属正态分布均以x±s表示，采用t检验或非参数检验法。

2 实验结果

2.1 抗炎实验结果

2.1.1 各组耳廓肿胀度比较见表1。

表1 各组耳廓肿胀度比较

注：与空白组比较，1）P＜0.01，2）P＜0.05。

组别空白组扶他林组洗方组袋泡剂组n 10 10 10 10左耳片13.9±1.55 13.2±2.08 12.5±0.99 12.6±11.63右耳片25.97±3.67 19.53±3.63 17.87±3.23 21.05±3.48肿胀度12.03±3.03 6.29±4.511）5.35±3.271）8.36±3.812）

2.1.2 各组吸收度比较见表2。

表2 各组吸收度比较

注：与空白组比较，1）P＜0.01，2）P＜0.05。

组别空白组扶他林组洗方组袋泡剂组n 10 10 10 10吸收度0.745±0.160 0.509±0.1151）0.501±0.1751）0.420±0.1052）

2.1.3各组肉芽肿抑制率比较见表3。

表3 各组肉芽肿抑制率比较

注：与模型组比较，1）P＜0.01；与扶他林组比较，2）P＜0.05；与洗方组比较，3）P＜0.05。

组别模型组扶他林组洗方组袋泡剂组n 10 10 10 10肉芽肿干重量/mg 55.95±7.504 32.71±4.621）36.47±6.661）22.06±1.901）2）3）抑制率/%—41.54 34.82 60.57

2.2 镇痛实验结果

2.2.1 各组干预前后痛阈值比较见表4。

2.2.2 各组镇痛率比较见表5。

3 讨论

本研究抗炎药效实验结果表明：膝骨痹康袋泡熏洗剂在抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀、醋酸所致毛细血管通透性相关表现的急性炎症反应方面，疗效与扶他林和骨关节炎洗方相当；在抑制大鼠棉球肉芽组织生长相关表现的慢性炎症反应方面，疗效优于扶他林和骨关节炎洗方。镇痛药效实验结果表明：在提高小鼠痛阈值及小鼠镇痛率方面，疗效与扶他林相当，但优于骨关节炎洗方。因此，本研究证实膝骨痹康袋泡熏洗剂抗炎镇痛疗效确切，其剂型改良后效果没有下降。

表4 各组干预前后痛阈值比较（

注：与空白组比较，1）P＜0.05。

干预后n组别空白组扶他林组洗方组袋泡剂组10 10 10 10干预前15.98±6.54 16.65±4.56 14.74±5.96 14.26±2.67 0.5 h 15.69±3.63 24.79±3.411）21.05±5.381）21.57±3.661）1 h 16.15±3.52 31.26±2.41）33.46±17.761）28.95±4.01）2 h 13.8±5.28 26.64±2.991）25.53±5.061）26.42±3.461）

表5 各组镇痛率比较

注：与空白组比较，1）P＜0.05；与洗方组比较，2）P＜0.01。

组别空白组扶他林组洗方组袋泡剂组n 10 10 10 10扭体次数/（次·20 min-1）76.4±9.67 34.5±4.371）57.6±3.651）43.2±12.311）2）镇痛率/%—54.97 24.87 43.46

分析膝骨痹康袋泡熏洗剂的疗效可知，该制剂由骨碎补、续断、伸筋草、川椒、制川乌、制草乌、威灵仙、红花等14味中药组方制成，多为辛温散寒、祛风除湿之品，能针对由肝肾气血虚损、风寒湿瘀痹阻引发的“膝骨痹”，发挥祛风湿、通经络、强筋骨而止痹痛之功效。现代药理学研究［6-11］表明：骨碎补［6］主要成分柚皮苷可抑制炎症反应；伸筋草［7］中生物碱和三萜类、川椒［8］中辣椒碱等成分抗炎镇痛疗效确切；川乌和草乌［9］中均含有多种生物碱，镇痛作用明显，可用于多种痛症的治疗；威灵仙［10］可抑制COX-1、COX-2合成；红花［11］能抑制IL-1、IL-6的升高等。诸药合用，共同发挥抗炎镇痛的功效。同时，膝骨痹康袋泡熏洗剂在制备过程中，将复方中一部分药材进行提取，更有利于药物的有效成分溶出，并在短时间内发挥作用，直达病所，更加快速而有效地达到抗炎、镇痛的目的，故袋泡熏洗剂在镇痛及抑制慢性炎症方面疗效优于临床洗方。

总之，膝骨痹康袋泡熏洗剂较传统临床洗方具有体积小、使用携带更方便等优势，极大地提高了患者的依从性；且剂型改良后更节约燃料及中药材，降低了费用，保质期长，更有利于在KOA康复中的推广使用。本研究通过一般药效学实验方法初步证实了经过剂型改良的膝骨痹康袋泡熏洗剂在镇痛及抑制慢性炎症方面疗效优于骨关节炎临床洗方，为其应用于临床提供了实验依据。在此基础上今后课题组还将从特殊药效学方面进一步探讨袋泡熏洗剂治疗KOA的疗效及机制。

［1］林木南，李西海，林艳红，等.温热疏密波不同波段对实验性膝骨性关节炎软骨病理变化的影响［J］.康复学报，2016，26（1）：38-42.

［2］林洁，付长龙，李俐，等.电针治疗膝骨性关节炎疗效的系统评价［J］.康复学报，2016，26（4）：52-58.

［3］杨承杰.手法加中药熏洗治疗膝关节骨关节病62例［J］.新中医，2001，33（4）：52.

［4］王雯婷，卢美丽，王艺茹，等.三步六式健膝功合电针、中药熏洗对膝骨关节炎的康复疗效［J］.福建中医药，2016，47（1）：54-57.

［5］盛录，赖宏强，王艺茹，等.膝骨痹康袋泡熏洗剂提取工艺的优化［J］.风湿病与关节炎，2015，8（4）：28-32.

［6］殷方明，肖涟波，张昀.骨碎补柚皮苷对炎症及骨作用的相关研究进展［J］.中国骨伤，2015，28（2）：182-186.

［7］蔡卓亚，周自桂，李萍.伸筋草化学成分及药理作用研究进展［J］.中草药，2015，46（2）：297-304.

［8］党元野，陈修平，张庆文，等.辣椒碱的药理作用研究进展［J］.中药药理与临床，2009，25（4）：84.

［9］胡学军，钟燕珠.乌头类中药及其制剂的镇痛作用［J］.中医药研究，2001，17（4）：56-58.

［10］龙启才，邱建波.威灵仙、秦艽、桑寄生醇提物体外对淋巴细胞和环氧酶的影响［J］.中药药理与临床，2004，20（4）：26-27.

［11］金鸣，裴崇强，臧宝霞，等.羟基红花黄色素A缓解血小板激活因子诱导的内皮细胞炎症因子表达升高作用的研究［J］.心肺血管病杂志，2011，30（5）：429.

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