高效液相色谱法测定止汗灵颗粒中芍药苷的含量

王建花

(南京市食品药品监督检验院，江苏 南京 210000)



高效液相色谱法测定止汗灵颗粒中芍药苷的含量

王建花*

(南京市食品药品监督检验院，江苏 南京 210000)

目的：建立高效液相色谱法测定止汗灵颗粒中芍药苷含量的方法。方法：色谱柱为Agilent Eclipse Plus-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.1%磷酸(V∶V=17∶83)溶液，流速1 ml/min，检测波长230 nm，柱温30 ℃。结果：芍药苷峰面积在7.672～153.400 μg/ml(r=0.999 9)范围内线性关系良好，平均回收率为98.34%，RSD为1.4%。结论：本研究方法专属性、重复性好，可用于止汗灵颗粒的质量控制。

止汗灵颗粒； 芍药苷； 高效液相色谱

止汗灵颗粒是南京某医院制剂，由黄芪、白术、防风、太子参、桂枝、白芍等组成，具有益气养阴，调和营卫，固表止汗的作用，用于小孩多汗症[1-2]。芍药苷是方中白芍的主要有效成分[3-4]。目前该制剂现行质量标准未进行质量控制。故本研究采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)[5-7]测定止汗灵颗粒中芍药苷的含量[8-11]，为该制剂的质量评价提供一定的参考。

1 材料

1.1 仪器

岛津SPD-20A型高效液相色谱仪(日本)，Sartorius CPA225D型分析天平(瑞士赛多利斯公司)。

1.2 试剂

芍药苷对照品(批号：110736-201539，含量96.4%，来自中国食品药品检定研究院，无需干燥)；乙腈为色谱纯[12]，水为超纯水，其他为分析纯[13]。

2 方法与结果

2.1 溶液的配制

2.1.1 对照品溶液：精密称取芍药苷适量，加稀乙醇制成1 ml含0.767 2 mg的溶液，作为对照品贮备液。精密量取贮备液5 ml置于50 ml容量瓶中，摇匀，即得对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液：精密称取止汗灵颗粒10 g置于锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 ml，称质量，超声处理30 min，用稀乙醇补足减失质量，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。

2.2 色谱条件及系统适应性

色谱柱为Agilent Eclipse Plus-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)[14-15]，柱温30 ℃，流动相：乙腈 -0.1%磷酸(V∶V=17∶83)，流速1.0 ml/min。参考《中华人民共和国药典·一部》(2015年版)[16]，选择检测波长230 nm。取对照品溶液和供试品溶液各10 μl，供试品中芍药苷主峰与其他组分分离良好，无明显干扰，见图1。

2.3 线性关系考察

分别精密吸取“2.1.1”项下对照品贮备液适量，加稀乙醇配成系列标准溶液，浓度依次为7.672、38.360、76.720、115.100、153.400 μg/ml。分别进样10 μl，以浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)绘制标准曲线，结果表明芍药苷在7.672～153.400 μg/ml范围内线性关系良好，其回归方程为Y=14 052X-14 148(r=0.999 9)。

2.4 精密度考察

精密吸取对照品溶液(76.720 μg/ml)10 μl，按照“2.2”项下色谱条件进样测定。结果芍药苷峰面积的RSD=0.6%(n=6)，表明本方法精密度良好。

2.5 重复性考察

平行制备6份供试品溶液(批号：1508003)，分别进样10 μl，按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录主峰峰面积，平均1 g中芍药苷平均含量为0.521 6 mg，RSD为1.0%(n=6)，表明本方法重复性良好。

2.6 稳定性考察

按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液(批号：1508003)，分别于放置0、2、4、8、12、24 h时进行测定，考察主峰峰面积，结果芍药苷峰面积的RSD为1.1%(n=6)，表明供试品溶液在制备后24 h内较稳定。

A.对照品溶液；B.供试品溶液A. reference solution; B. test solution图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatogram

2.7 准确度考察

精密吸取6份已知含量的止汗灵颗粒5 g，置于锥形瓶中，精密加入对照品储备溶液适量，分别加入6份供试品中， 分别精密加稀乙醇补足到50 ml，摇匀，称质量，超声30 min，放冷，用稀乙醇补足减失质量。以0.22 μm微孔滤膜滤过，按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计算加样回收率。结果表明本方法准确度较好，见表1。

表1 加样回收率测定结果
Tab 1 Results of recovery test

样品称样量/g已知量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%5 01062 61352 68525 245498 015 11142 66612 68525 3762100 935 13962 68082 68525 304497 715 20712 71602 68525 340397 735 00432 61022 68525 256698 555 10152 66092 68525 269397 1498 341 4

2.8 样品含量测定

取3批次供试品(批号：1508001、1508002、1508003)，按“2.1.2”项下制备，按“2.2”项下色谱条件进样测定，计算含量。结果芍药苷含量分别为0.521 8、0.520 3、0.519 2 mg/g。

3 讨论

止汗灵颗粒的原质量检验标准中只有鉴别和检查项的内容，缺乏含量测定项，缺少控制其主药含量测定的内容，存在一定的安全隐患。本方法经方法学考察，准确度高、精密度好、稳定性佳、简单易行，可考虑在后续的标准修订过程中，逐步增加含量测定项，并通过建立含量测定的上下限范围，进一步提高该试剂的安全性、有效性和均一性。

本研究分别考察了甲醇-水(V∶V=25 ∶75)、乙腈-水(V∶V=17 ∶83)、乙腈-0.1%磷酸(V∶V=17 ∶83)作为流动相，稀乙醇、50%甲醇、纯甲醇作为提取溶剂。结果显示，流动相为乙腈-0.1%磷酸(V∶V=17 ∶83)，提取溶剂为稀乙醇时，峰型最优，杂质较少，主峰与相邻杂质峰分离度符合要求。

[1]吴艳明.止汗灵颗粒治疗小儿多汗症气阴两虚型20例临床观察[J].河北中医，2006，28(11)：814-815.

[2]袁斌，孙轶秋，韩新民.止汗灵冲剂治疗小儿多汗症气阴两虚型65例临床观察[J].河北中医，2009，31(1)：54-55.

[3]陈勇敢，王荔.参芍颗粒中芍药苷的含量测定[J].河南大学学报：医学科学版，2003，22(4)：26-27.

[4]孙丽荣，曹雄，侯凤青，等.芍药苷研究进展[J].中国中药杂志，2008，33(18)：2028-2032.

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[12] 张舒，袁晓芳，张艳.HPLC法测定骨刺片中柚皮苷、芍药苷的含量[J].广州化工，2015，43(16)：140-142.

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[14] 许倩云，王玉华.HPLC法测定养阴清肺丸中芍药苷的含量[J].内蒙古医科大学学报，2015，37(4)：314-317.

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[16] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：159.

Content Determination of Paeoniflorin in Zhihanling Granules by HPLC

WANG Jianhua
(Nanjing Supervision and Inspection Institute for Food and Drug Control, Jiangsu Nanjing 210000, China)

OBJECTIVE：To establish the method of content determination of paeoniflorin in Zhihanling granules by HPLC. METHODS: The separation was performed on a Agilent Eclipse Plus-C18column(250 mm× 4.6mm,5 μm)with acetonitrile-0.l% phosphate(V∶V=17∶83)as mobile phase. The flow rate was 1.0 ml/min, the detection wavelength was 230nm, the column temperature was 30 ℃. RESULTS: The liner arrange for paeoniflorin was 7.672-153.400 μg/ml (r=0.999 9). The average recovery of paeoniflorin was 98.34% with 1.4%RSDof precision. CONCLUSIONS: The method is simple, accurate, sensitive with good reproducibility in analyzing the paeoniflorin in Zhihanling granules which can be used for the quality control.

Zhihanling granules; Paeoniflorin; HPLC

R927.2

A

1672-2124(2016)12-1678-02

2016-08-15)

*主管药师。研究方向：中药学颗粒质量标准的检测及研究。E-mail：460999937@qq.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2016.12.036