胶质瘤中cyclinD1和p57/Kip2蛋白的表达及意义

王新伟

河南河南平顶山市第一人民医院神经外二科 平顶山 437000



胶质瘤中cyclinD1和p57/Kip2蛋白的表达及意义

王新伟

河南河南平顶山市第一人民医院神经外二科 平顶山 437000

目的 探讨p57/Kip2 和细胞周期素cyclinD1在人脑胶质瘤中的表达及意义。方法 收集54例胶质瘤和 12例正常脑组织标本，应用免疫组化方法检测胶质瘤组织及其正常脑组织中p57/Kip2 和cyclinD1 蛋白的表达水平。结果 免疫组化方法结果显示胶质瘤组织中cyclinD1 蛋白水平显著高于正常脑组织，而p57/Kip2的表达水平显著低于正常脑组织，且Pearson相关系数检验提示，胶质瘤组织中p57/Kip2 和cyclinD1 蛋白的表达水平呈负相关(P<0.01)。结论 p57/Kip2胶质瘤组织中表达显著下调，cyclinD1 蛋白在胶质瘤组织中异常高表达，且二者表达水平呈显著负相关(r=-0.782，P<0.01)。

胶质瘤；p57/Kip2；cyclinD1

与其他肿瘤一样，胶质瘤的发生和发展与基因的异常表达密切相关。p57/Kip2基因具有抑制细胞增殖与细胞的、分化诱导细胞凋亡以及与基因组印记有关[1]。cyclinD1表达异常可导致细胞异常增殖，目前已被证实与多种恶性肿瘤的发生及发展相关[2]。p57/Kip2 和cyclinD1 在胶质瘤组织中的表达及相关性研究报道不多。本研究通过检测p57/Kip2 和cyclinD1在胶质瘤组织中的表达，探讨p57/Kip2 和cyclinD1 在胶质瘤发病机制中的作用。

1 资料与方法

1．1 研究对象 选择2007-01—2013-10平顶山市第一人民医院神经外科手术切除的54例胶质细胞瘤手术标本(肿瘤组)，54例均有病理检查支持，男31例，女23例；年龄32～77岁。入组病例均属新诊断病例。病理诊断及分级参照WHO神经系统肿瘤分类标准(2007年版)：Ⅱ级28例。Ⅲ级18例，Ⅳ级8例。另选取12例经手术切除的正常脑组织的患者(正常组)，男7例，女5例；年龄38～57岁。标本切除后，置-80 ℃冰箱保存。

1．2 方法

1．2．1 HE染色：具体操作步骤：二甲苯15 min(分别操作2次)，无水乙醇5 min(分别操作2次)，95%乙醇 5 min(分别操作2次)，80%乙醇 5 min，水洗，苏木精染色 5 min，流水冲洗1～3 s，1%盐酸酒精分化1 s，0.5%伊红液染色 5 min，水洗，80%乙醇5 min，95%乙醇5min(分别操作2次)，无水乙醇 5 min，95%乙醇5min，二甲苯5 min(分别操作2次)，中性树胶封片。

1．2．2 免疫组织化学染色：所有组织切片进行常规免疫组织化学染色，包括以下步骤：脱蜡，水化，抗原修复，封闭，PBS漂洗，一抗(兔IgG)孵育4 ℃过夜，TBS漂洗10 min，二抗孵育10～30 min，PBS漂洗，DAB显色，蒸馏水漂洗，1%盐酸酒精分化，苏木素复染，脱水，透明，封片，显微镜下观察。

1．2．3 免疫组化结果判定：在光学显微镜下对组织切片进行观察，阅片采取2位病理科医师双盲阅片，每张切片取6个高倍视野(×400)。对视野内阳性细胞计数。阳性表达细胞的判断标准：①完全没有着色 0分，轻度淡黄色着色 1分，中度棕黄色着色 2分，3棕褐色着色 3分。判断阳性范围：0分<5%，1分5%～25%，2分26%～50%，3分51%～75%，4分>75%；二者相加分数为判定结果：阴性(-)<2分，弱阳性(+)2～3分，中度阳性(++)4～5分，强阳性(+++)6～7分。

1．3 统计学处理 采用SPSS 18.0软件进行处理。采用Wilcoxon符号秩检验比较配对设计的等级资料。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 2组p57/Kip2表达检测结果比较 细胞染色定位于细胞核，胞核呈棕黄色为表达阳性。脑胶质瘤组织中p57/Kip2总阳性表达率和强阳性表达率分别为14.8%(8/54)、0(0/54)；正常脑组织为 75%(9/12)、25%(3/12)。根据Wilcoxon秩检验结果看出，脑胶质瘤及正常脑组织中p57/Kip2的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组p57/Kip2蛋白表达情况比较 (n)

注：与正常组比较，#P<0.05

2．2 2组cyclinD1表达的检测结果比较 细胞染色定位于细胞核和胞浆，细胞呈弥漫棕黄色为表达阳性。脑胶质瘤组织中cyclinD1总阳性表达率和强阳性表达率分别为72.2%(39/54)、42.6%(23/54)；正常脑组织为 16.7%(2/12)、0。根据Wilcoxon秩检验结果看出，脑胶质瘤及正常脑组织中cyclinD1的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 2组cyclinD1蛋白表达情况比较 (n)

注：与正常组比较，#P<0.05

2．3 p57/Kip2和cyclinD1蛋白在胶质瘤组织中的表达具有相关性 采用Pearson相关分析，结果提示，胶质瘤组织中p57/Kip2 和cyclinD1 蛋白表达水平呈负相关(r=-0.782，P<0.01)。

3 讨论

胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，预后差，准确的病理诊断是临床有效治疗的前提。研究癌基因和抑癌基因在胶质瘤中的表达情况已成为探索胶质瘤发生、发展和预后的重要手段[3]。目前临床上利用免疫组织化学技术检测某些相关因子辅助病理学诊断，为准确地评估肿瘤的恶性程度提供客观依据。

p57/Kip2 基因属于INK4家族。p57/Kip2是Matsuoka等[4]于1995年发现、定位于人染色体11p15.5、作用于细胞周期的的抑癌基因。许多肿瘤组织中存在p57m2基因变异率低而蛋白表达下降或失活率高的现象，这与p57/Kip2蛋白表达水平除取决于基因外还要受转录、翻译、翻译后修饰等多个环节的影响有关[5]。

在细胞周期的调控中cyclinD1蛋白扮演了重要的角色。在细胞周期过程中，cyclinD1的表达受到严格的调控：cyclinD1的合成始于细胞 G0 期，并在G1 期达高峰，当细胞进入 S期后cyclinD1开始降解，在随后的细胞周期中持续低水平表达。cyclinD1的异常表达能加快细胞周期进程，并促进细胞增殖，最终导致肿瘤发生[2]。

Cyclin、CDK和CKI共同控制真核细胞周期。CDK是细胞周期调控的核心装置，激发G1～S期、G2～M期的转换。Cyclin是CDK的正性调控因子，CKI是CDK的负性调控因子，p57/Kip2属于CKI家族。本研究发现，p57/Kip2在胶质瘤组织中的表达水平显著下调，cyclinD1 在胶质瘤组织中的表达水平显著上调，提示二者在胶质瘤的发生发展中起了相反的作用。

[1] Tsugu A，Sakai K，Dirks PB，et al．Expression of p57 potently blocks the growth of human astrocytomas and induces cell senescence[J]．Am J Pathol，2000，159(3)：919-932．

[2] Casimiro MC，Velasco M，Aguirre C，et al．Overview of cyclinD1 function in cancer and the CDK inhibitor landscap：past and present[J]．Expert Opin Investing Drugs，2014，23(3)：295-304．

[3] 刘承基．细胞分子神经外科-神经外科的新领域[J]．中华神经外科杂志，2004，20(1)：1-5．

[4] Matsuoka S，Edwards MC，Bal C，et al．p57/Kip2 a structurally distinct member of the p21ClPl CDK inhibitor family，is a candidate tumor suppressor gene[J]．Genes Dev，1995，9(6)：650-662．

[5] Ito Y，Takeda T，Sakon M，et al．Expression of p57/Kip2 protein in hepatocellular carcinoma[J]．Oneology，2001，61(3)：221-225．

(收稿2016-02-10)

R739.41

B

1673-5110(2016)24-0096-02