原花青素对D-半乳糖致衰老大鼠小脑组织中IL-6和TNF-α水平的影响

宋 凌

商丘医学高等专科学校 商丘 476100



原花青素对D-半乳糖致衰老大鼠小脑组织中IL-6和TNF-α水平的影响

宋 凌

商丘医学高等专科学校 商丘 476100

目的 探讨原花青素(PC)对D-半乳糖致衰老大鼠小脑组织中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。方法 50只健康6月龄雄性Wistar大鼠随机均分为阴性对照组、衰老模型组、维生素E(VE)组、PC 160 mg/kg组和80 mg/kg组，每组10只，分别给予相应处理后，采用ELISA测定各组大鼠小脑组织中IL-6、TNF-α水平。结果 VE组、PC 160 mg/kg组和80 mg/kg组IL-6、TNF-α水平均低于衰老模型组(P<0.05)；PC 160 mg/kg组与VE组的IL-6、TNF-α水平比较差异无统计学意义(均P>0.05)；PC 80 mg/kg组SOD、GSH-Px水平高于VE组、PC 160 mg/kg组(P<0.05)。结论 PC可能通过改善免疫功能而延缓大鼠小脑组织的衰老。

原花青素；衰老大鼠；小脑；白介素-6；肿瘤坏死因子-α

原花青素(proanthocyanidins，PC)是一种生物类黄酮，具有明显的抗氧化、抗炎及抗肿瘤等作用[1-2]，但PC改变衰老大鼠小脑相关免疫反应指标的研究尚无报道。本研究采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)测定D-半乳糖至衰老大鼠小脑组织中白介素-6(interleukin-6，IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平，观察原花青素对衰老大鼠小脑免疫功能的改变作用。

1 材料与方法

1．1 实验动物及分组 50只健康6月龄雄性Wistar大鼠，体质量309～347 g，购自河南省实验动物中心，采用数字表法随机均分为5组：阴性对照组、衰老模型组、VE组、PC 160 mg/kg组和80 mg/kg组。

1．2 主要药品、试剂及仪器 PC(安阳晶森天然产物有限公司，批号：12024129)；维生素E(vitamin E，VE)注射剂(上海通用药业股份有限公司，批号：120112)；IL-6、TNF-α ELISA试剂盒(批号分别为：20120820、20120902，美国Peprotech公司)；全自动酶联免疫分析仪(北京中西远大科技有限公司)。

1．3 给药方法 阴性对照组：皮下注射3.0 mL/kg的0.85% NaCl溶液；衰老模型组：皮下注射15% D-半乳糖1.5 mL/kg和0.85% NaCl溶液1.5 mL/kg；VE组、PC 160 mg/kg组和80 mg/kg组：皮下注射15% D-半乳糖1.5 mL/kg和相应浓度的药物1.5 mL/kg。1次/d，连用12周。

1．4 标本采集及指标测定 标本采集：各组大鼠于末次给药1 h后，用1%戊巴比妥钠(0.4 mL/kg)腹腔注射麻醉，快速常规取出小脑，4 ℃ 0.85% NaCl溶液冲洗，滤纸吸干，置于-80 ℃冰箱内保存。指标测定：取适量小脑组织，称重，制匀浆，4 ℃、3 500 r/min离心10 min，取上清液，并按试剂盒说明书检测TNF-α、IL-6水平。

2 结果

衰老模型组IL-6、TNF-α水平高于阴性对照组(P<0.001)；VE组、PC 160 mg/kg组和80 mg/kg组IL-6、TNF-α水平均低于衰老模型组(P<0.05)；PC 160 mg/kg组与VE组的IL-6、TNF-α水平比较差异无统计学意义(P均>0.05)；PC 80 mg/kg组SOD、GSH-Px水平高于VE组、PC 160 mg/kg组(P<0.05)。见表1。

表1 各组大鼠小脑组织中IL-6、TNF-α 水平比较

注：与阴性对照组比较，1)P<0.05；与衰老模型组比较，2)P<0.05；与VE组比较，3)P<0.05；与PC 160 mg/kg组比较，4)P<0.05

3 讨论

免疫反应已被证实广泛存在于衰老这一病理生理过程中，且大量免疫因子在衰老的进展过程中发挥着重要作用[3]。随着免疫学和衰老相关机制研究的进展，原来越多的研究认为，免疫功能随着衰老的进展逐渐下降，而免疫功能的改变在衰老过程中具有重要地位，通过提高机体的免疫功能能够延缓衰老的进展[3-4]。D-半乳糖是目前衰老机制研究中最常用的造衰老药物，具有缩短实验周期、造模成功率高、致衰老机制明确等优点，因此，本实验选择该模型进行研究。IL-6是一种免疫调节因子，主要来自T、B淋巴细胞及单核巨噬细胞，正常机体内有一定程度的表达，且在维持机体的正常免疫功能和神经内分泌功能等生物学行为中发挥作用，而异常高水平的IL-6则会导致机体免疫和神经内分泌功能的紊乱，已被证实其参与了机体的缺血再灌注损伤、衰老、心肌梗死等病理生理过程[5-6]。TNF-α是一种由T淋巴细胞和活化性巨噬细胞分泌的细胞因子，具有调节细胞免疫以及参与衰老、肿瘤进展等病理生理过程的多重作用。在机体衰老过程中，TNF-α能够通过结合其受体而通过多条信号转导途径导致机体自由基过生、细胞凋亡增加等，从而造成机体的衰老[3，6]。本实验结果显示，衰老模型组IL-6、TNF-α水平高于阴性对照组(P<0.001)，提示D-半乳糖造模成功，IL-6、TNF-α参与了机体的衰老；VE组、PC 160 mg/kg组和80 mg/kg组IL-6、TNF-α水平低于衰老模型组，说明PC能够增强衰老大鼠小脑组织的免疫功能；PC 160 mg/kg组与VE组的IL-6、TNF-α水平相近，说明一定量的PC能够达到VE一样的增强大鼠免疫功能作用；PC 80 mg/kg组IL-6、TNF-α水平高于VE组、PC 160 mg/kg组，提示PC的作用可能具有一定的剂量依赖性，PC剂量越高，对免疫作用的增强越明显。总之，PC可能通过改善免疫功能而延缓大鼠小脑组织的衰老；PC的抗衰老作用可能有一定的剂量依赖性。

[1] 宋强，罗兰，杨拯，等．原花青素抗氧化应激效应对大鼠肢体缺血再灌注后肠黏膜的保护作用[J]．世界华人消化杂志，2015，23(9)：1 454-1 459．

[2] 钟越，齐玲，任旷，等．越桔原花青素通过线粒体通路诱导胶质瘤细胞凋亡的机制研究[J]．中国药学杂志，2015，50(6)：507-511．

[3] 周先云，潘朝旺．九龙虫对衰老小鼠免疫功能的影响[J]．中国老年学杂志，2015，35(5)：1 331-1 333．

[4] Bektas A，Zhang Y，Lehmann E，et al．Age-associated changes in basal NF-κB function in human CD4+ T lymphocytes via dysregulation of PI3 kinase[J]．Aging(Albany NY)，2014，6(11)：957-974．

[5] 杨东斌．原花青素对大鼠脑缺血再灌注脑损伤IL-6和ET-1的影响[J]．中国实用神经疾病杂志，2013，16(9)：44-45．

[6] 郑世铎，杨世彰，段永强，等．抗衰益智胶囊对衰老大鼠脑组织三磷酸腺苷酶活性和血清白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α的影响[J]．中国中医药信息杂志，2014，21(7)：40-42．

(收稿2016-03-07)

Effects of proanthocyanidins on IL-6 and TNF-α in the cerebellum of the aged rat induced by D-galactose

SongLing

ShangqiuMedicalCollege，Shangqiu476100，China

Objective To investigate the effects of proanthocyanidins(PC)on the levels of interleukin-6(IL-6)and tumor necrosis factor-α(TNF-α)in the cerebellum of the aged rat induced by D-galactose.Methods Fifty healthy male Wistar rats which were 6 months were divided into 5 groups at random：the negative control group，the aged model group，the vitamin E(VE)group，the PC 160 mg/kg group and the PC 80 mg/kg group，and each group had 10 rats.After the commensurate handling for rats in the five groups，ELISA method was used to detect the levels of IL-6 and TNF-α in the cerebellum of rats in the 5 groups.Results Compared with the aged model group，the levels of IL-6 and TNF-α were lower in the cerebellum of rats in the VE group，the PC 160 mg/kg group and the PC 80 mg/kg group(P<0.05).There was no significant difference in the levels of IL-6 and TNF-α in the cerebellum of rats between the PC 160 mg/kg group and the VE group(P>0.05).Compared with the PC 160 mg/kg group and the VE group，the levels of IL-6 and TNF-α were higher in the cerebellum of rats in the PC 80 mg/kg group(P<0.05).Conclusion PC can reduce the immune function，and delay the aging of cerebellum of rats．

Proanthocyanidins；Aged rats；Cerebellum；Interleukin-6；Tumor necrosis factor-α

R-332

A

1673-5110(2016)24-0041-02