浅析影响ELISA 实验结果因素

朱晓明

（辽宁省葫芦岛市动物疫病预防控制中心125000）

浅析影响ELISA 实验结果因素

朱晓明

（辽宁省葫芦岛市动物疫病预防控制中心125000）

ELISA是实验室检测抗体最常用的检测方法，具有灵敏性高、特异性强等特点，不需要特殊仪器设备就可以完成检测工作。目前大部分实验室检测都使用厂家生产的成品ELISA试剂盒，看似简单的操作，其中存在着复杂的反应，很多因素都会影响ELISA的实验结果。下面就对影响ELISA实验结果的因素进行总结。

1 样品

样品是检测的前提，样品质量会直接影响实验结果。可以用ELISA来检测的样品很多，根据检测项目不同可以是血清、全血、唾液、尿液等，但大部分还是以血清为样品。作为血清样品，应避免溶血，溶血可能会增加非特异性显色，导致结果出现误差。血清样品的反复冻融会使血清中的抗体效价下降，所以需要多次检测的血清样品，如在5d内检测完，可4℃保存，如需长时间检测，可进行分装冻存。样品如被细菌污染腐败，可能会导致假阳性。

2 温度和时间

抗原和抗体反应需要适宜的温度和反应时间，温度和时间是ELISA反应中最重要的条件。温度控制主要在试剂盒使用前一定要提前半小时左右取出，恢复至工作温度，恒温箱要提前打开，设定到反应温度，以保证反应速度。在温度保证的前提下，时间的控制至关重要，尤其是底物显色的时间控制，显色时间不足或过长会导致实验不成立，无法对检测结果进行判断。

3 人员操作

ELISA成品试剂盒为检测工作提供了方便，按照说明书进行操作就可以完成实验，但人为操作时候很多细节也会导致实验误差。

3.1 包被

一些ELISA反应板需要自行进行包被处理，没有进行包被，或包被液使用与检测项目不同都会使实验失败。包被时，未进行震荡，孔底未被包被液全部覆盖会导致检测结果偏差。

3.2 反应液稀释

稀释液使用错误或稀释比例不正确会导致实验失败或结果不准确。

3.3 洗板

人工洗板时，弃去洗涤液时方法不当，易使各孔液体相互流入，导致假阳性；洗涤液使用量和洗涤次数过少导致洗涤不彻底，洗板后未拍板或拍不干净都会影响实验结果。

3.4 其他

封板膜封闭不严或开启时孔内液体蒸发、震出可导致各孔相互污染；操作时接触到ELISA板底导致透光度改变，影响酶标仪测量结果；加样时未注意移液器吸头堵塞或漏气导致加液量不准确；加不同试剂时未更换吸头等。

4 设备

仪器设备是ELISA实验的基础，常用的相关仪器设备包括移液器、酶标仪、洗板机和恒温箱等。所有设备都需要进行检验校准，保证准确性和精确度。移液器的使用要尽可能选择所需加液量接近最大量程，并正确使用，减少实验误差；酶标仪要提前开机预热，保证光源稳定；洗板机要检查加液孔是否通畅，保证加液量；恒温箱要提前开机，开、关门要快速，保证反应温度。

5 试剂

试剂盒要根据要求进行保存，并保证在有效期内使用，使用前应平衡到室温。新购入的试剂盒要进行校验，检查实验是否成立，不同的试剂盒或不同批号的试剂不可混用。