脂多糖促进人结膜上皮细胞IL-6的表达

丛贾囡,宋占晨,曲 忻*

(1.长春市中心医院 眼科,吉林 长春130061；2.白城市医院 耳鼻咽喉科)

脂多糖促进人结膜上皮细胞IL-6的表达

丛贾囡1,宋占晨2,曲 忻1*

(1.长春市中心医院 眼科,吉林 长春130061；2.白城市医院 耳鼻咽喉科)

脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，当细菌死亡溶解释放出来，可引起微循环障碍、内毒素释放及血管内凝血等。本研究拟探讨脂多糖能否促进人结膜上皮细胞IL-6的表达与释放从而放大结膜炎性反应。

1 材料与方法

1.1 材料和来源

原代培养的人结膜上皮细胞均来自于长春市中心医院眼科手术中获得的结膜组织分离培养。

1.2 结膜上皮细胞的培养处理

获得原代培养的人结膜上皮细胞培养到3-4代。在24孔板内培养细胞至单层细胞融合。用PBS缓冲液洗涤细胞，加入0.25%的胰蛋白酶及0.06%的EDTA液以消化贴壁结膜细胞。用倒置显微镜观察细胞。加入终止液终止消化。调整结膜上皮细胞浓度为5×104/ml[1]。

1.3 LPS对人结膜上皮细胞的刺激

取上述培养好的人结膜上皮细胞，加入LPS至浓度为1 μg/ml，10 μg/ml及100 μg/ml，对照组加入PBS缓冲液。分别于12 h及24 h后，利用分光光度计检测培养液吸光度。然后离心培养液，获得上清液，用以检测IL-6的浓度。

1.4 酶联免疫吸附试验对IL-6的检测

采用ELISA方法检测上清液中IL-6的水平，方法按试剂盒要求执行。试剂盒为武汉博士德公司产品。

1.5 统计学方法

实验结果用均数±标准差表示。采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析。采用单因素方差分析不同浓度LPS对IL-6水平的影响。

2 结果

不同浓度LPS作用12及24小时后对人结膜上皮细胞分泌IL-6水平的结果见表1。加入LPS后12及24小时，对照组光吸收值无明显差异(P>0.05)，证明细胞数没有差异。两个时间点各浓度实验组IL-6水平明显高于对照组,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

急性结膜炎临床表现为突发结膜充血，烧灼感、痒、分泌物多，要确定结膜炎的病源需作分泌物涂片进行细菌和细胞学检查。LPS是革兰氏阴性细菌细胞壁中的重要成分。其被证实参与对小胶质细胞在内多种细胞的促炎作用，提高作用细胞分泌一氧化氮及IL-6等炎症因子的表达[2]。还有研究发现，积雪草酸能够抑制人结膜上皮细胞在炎症信号刺激下出现一系列细胞因子的变化[3],包括NF-kappaB及p-ERK等细胞信号途径会被激活，这均可能参与到IL-6的表达调节过程[4]。本研究结果表明，12及24小时两个时间点各浓度实验组IL-6水平明显高于对照组，且与LPS浓度及作用时间具有相关性。提示脂多糖能够诱导的人结膜上皮细胞炎症因子IL-6的分泌,其对结膜上皮细胞有直接促炎作用。

[1]郑健樑，卢 蓉，张 洁， 等.人结膜上皮细胞的培养鉴定及液氮冻存[J].眼科学报,2000,16(2):135.

[2]赵建云，邓展进，刘瑞珍.HU308对脂多糖诱导小胶质细胞分泌NO及IL-6的影响[J].中国医药科学，2014,4(5):36.

[3]Hua XM,Ze BC,Wang B,et al.The anti-inflammatory effects of asiatic acid in lipopolysaccharide-stimulated human corneal epithelial cells[J].Int J Ophthalmol,2017,10(2):179.

[4]Park JY,Chung TW,Jeong YJ,et al.Ascofuranone inhibits lipopolysaccharide-induced inflammatory response via NF-kappaB and AP-1,p-ERK,TNF-α,IL-6 and IL-1β in RAW 264.7 macrophages[J].PLoS One,2017 ,12(2):e0171322.

*通讯作者

1007-4287(2017)09-1403-01

2016-04-14)