三七花颗粒的质量控制方法*

冯 军，刘布鸣

(广西壮族自治区中医药研究院，广西中药质量标准研究重点实验室，广西南宁 530022)

三七花颗粒的质量控制方法*

冯 军，刘布鸣**

(广西壮族自治区中医药研究院，广西中药质量标准研究重点实验室，广西南宁 530022)

【目的】完善三七花颗粒制剂的质量控制标准。【方法】采用薄层色谱法对三七花颗粒进行定性鉴别，并用高效液相色谱法对颗粒中的人参皂苷Rb3进行定量测定。【结果】三七花颗粒供试品与对照品及药材在薄层色谱中相应的位置上，显现相同颜色的荧光斑点；人参皂苷Rb3在0.505～5.050 μg成良好线性关系(r=0.999 9)，平均回收率为101.25%，RSD为0.54% (n=6)。【结论】该方法简便、准确，可用于三七花颗粒质量的控制。

高效液相色谱 薄层色谱 三七花颗粒 人参皂苷Rb3

0 引言

【研究意义】三七花为五加科植物三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)的干燥花序[1]，学名：Panax pseudoginseng Wall.var.notoginseng (Burkill) Hoo et Tseng，英文名：Sanchi。三七花颗粒是以三七花为原料制成的单方制剂。三七主要含有皂苷类、黄酮类和挥发性成分，其中三七花中皂苷类成分人参皂苷Rb3的含量比根部要高[2],具有降血压、降血脂、护肝、抗炎、抑制细胞增殖等作用[3-5]。【前人研究进展】目前一般采用指标性成分的定性鉴别和含量的测定对中药材及其制剂的质量进行控制。张柯媛等[6]采用薄层色谱法和高效液相色谱法对四数九里香药材中的补骨脂素进行定性定量分析，以作为四数九里香药材的质量标准分析方法；李文琪等[7]采用薄层色谱定性鉴别，并用高效液相色谱测定芒果苷含量，为光石韦药材的质量标准制定提供分析方法和依据；中国药典[8]采用薄层色谱法和高效液相色谱法对三七片中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1进行定性定量分析，以控制制剂质量。【本研究切入点】三七花颗粒收载于中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第二册[9]，现有的质量标准中尚无定性鉴别和含量测定的相关规定项。【拟解决的关键问题】参考文献[6-7]，采用薄层色谱法和高效液相色谱法分别建立三七花颗粒的薄层色谱鉴别方法和人参皂苷Rb3的含量测定方法。

1 材料与方法

1.1 材料

美国Agilent 1260高效液相色谱仪(G1311C四元梯度泵，G1329B自动进样器，G1316A柱温箱，DAD检测器，OpenLAB CDS色谱工作站)，ZF-90D暗箱式紫外分析仪(上海光豪分析仪器有限公司)，HH-S数显恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂)，KQ-5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。

人参皂苷Rb3对照品(批号：111686-201504)，由中国食品药品检定研究院提供;三七花颗粒(批号：140802，140911，141018)，由广西万通制药有限公司提供;三七花药材由广西万通制药有限公司提供。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 薄层色谱(TLC)鉴别

1.2.1.1 对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷Rb3对照品5.05 mg，用纯甲醇溶解并定容至10 mL的容量瓶中，制得每毫升约含0.505 mg人参皂苷Rb3的对照品溶液。

1.2.1.2 供试品溶液的制备

分别称取三七花颗粒及阴性样品各约2 g，三七花药材约4 g，分别置于具塞锥形瓶中，加入甲醇20 mL，超声提取1 h，放冷，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。

1.2.1.3 薄层色谱鉴别方法

在同一块G-硅胶板上点样，点样量为9 μL，以氯仿-甲醇-水(7∶3∶0.5)为展开剂，预饱和10 min，

10%(V/V)硫酸乙醇溶液显色，105℃的烘箱中烘5 min，紫外灯(365 nm)下检视。

1.2.2 人参皂苷Rb3含量测定

1.2.2.1 系统适应性试验

色谱柱为Pursuit 5 C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.1%磷酸(V∶V=33∶67)，检测波长为203 nm，流速1.0 mL/min，柱温为30℃。

1.2.2.2 对照品溶液的制备

取人参皂苷Rb3对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Rb30.15 mg的溶液即得。

1.2.2.3 供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取约4 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称重，超声提取1 h，取出，放冷，用甲醇补足重量，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。

1.2.2.4 线性范围的考察

先取人参皂苷Rb3对照品适量，精密称定，加甲醇使其溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.505 mg/mL的对照品母液，再分别精密量取对照品母液8.0 mL、6.0 mL、4.0 mL、2.0 mL、1.0 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，最后精密吸取上述对照品溶液及对照品母液各10 μL，注入液相色谱仪进行测定。

1.2.2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪测定峰面积，重复进样6次，计算出人参皂苷Rb3峰面积的RSD值为0.13%。

1.2.2.6 稳定性试验

取同一批供试品溶液，分别于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h进样，计算出人参皂苷Rb3峰面积的RSD为0.42%，说明供试品溶液在24 h内稳定。

1.2.2.7 重复性试验

取同一批样品6份，分别按1.2.2.3项方法制备供试品溶液，测定峰面积，计算人参皂苷Rb3含量， RSD值为0.34%。

1.2.2.8 回收率试验

取已知含量的本品6份，每份约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入0.91 mg/mL的人参皂苷Rb3对照品溶液5 mL，再分别精密加入甲醇45 mL，自称重，超声提取1 h后参考1.2.2.3项供试品溶液的制备方法制备供试品溶液。

2 结果与分析

2.1 薄层色谱鉴别

从图1可以看出，三七花颗粒供试品与人参皂苷Rb3对照品在相应位置上有相同斑点，阴性样品在人参皂苷Rb3对照品相应位置上无斑点，比移值符合要求，说明薄层色谱可作为三七花颗粒的鉴别方法。

1～3：样品；4：人参皂苷Rb3对照品；5：三七花；6：阴性

1～3：Sample；4：Ginsenoside Rb3；5：Sanchi；6：Negative sample

图1 三七花颗粒TLC鉴定

Fig.1 TLC of sanchi granuLe

2.2 人参皂苷Rb3含量

2.2.1 系统适应性试验

按1.2.2.1节的色谱条件，分别吸取供试品溶液和对照品溶液并进样，理论塔板数按人参皂苷Rb3计大于7 000，分离度大于1.5，结果见图2。

A：对照品Standard； B：供试品Sample； 1：人参皂苷Rb3Ginsenoside Rb3

图2 三七花颗粒HPLC分析

Fig.2 HPLC of sanchi granuLe

2.2.2 线性范围

以进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得人参皂苷Rb3对照品的回归方程：y=298.329 31x+2.784 11(r =0.999 9)。结果表明，人参皂苷Rb3进样量为0.505～5.050 μg时，进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.3 回收率试验

分别吸取1.2.2.8节中所列供试品溶液注入液相色谱仪，测定峰面积，计算回收率。表1结果显示平均回收率为101.25%，RSD值为0.54%，表明方法准确性良好。

表1 人参皂苷Rb3加样回收率试验结果

Table 1 Recovery test result of ginsenoside Rb3

序号Number取样重量Sampleweight(g)样品含量Samplecontent(mg)加入重量Standardweight(mg)峰面积Peakarea测得量Testcontent(mg)回收率Rateofrecovery(%)平均回收率Averagerateofrecovery(%)RSD(%)12.00014.34.55471.108.91101.30101.250.5422.00044.34.55473.108.95102.1132.00034.34.55471.708.92101.5442.00054.34.55470.858.90101.1751.99984.34.55469.858.89100.7962.00024.34.55469.408.88100.59

2.2.4 样品测定

按上述方法分别对3批三七花颗粒样品中的人参皂苷Rb3含量进行测定，结果分别为2.15 mg/g、2.23 mg/g、1.98 mg/g。

3 结论

选择超声提取方法，并参照三七花药材标准[1]中的鉴别项调整TLC展开系统比例为氯仿∶甲醇∶水为7∶3∶0.5，再对比考察了不同提取溶剂、提取时间及溶剂用量对人参皂苷Rb3提取效率的影响，又参照文献[10-12]选择色谱条件，建立了三七花颗粒的薄层色谱鉴别方法和人参皂苷Rb3的含量测定方法。该方法准确、简便，可操作性强，可为提升三七花颗粒现有质量控制水平提供实验参考。

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(责任编辑：尹 闯)

Study on the Quality Control Method of Sanchi GranuLe

FENG Jun，LIU Buming

(Guangxi Key Laboratory of Tradtitonal Chinese Medicine Quality Standards,Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences,Nanning,Guangxi,530022,China)

【Objective】To perfect the quality control standard of sanchi granuLe.【Methods】The TLC method was used to identify the sanchi granuLe and the HPLC method was used for the determination of ginsenoside Rb3in it.【Results】Each of the sanchi,sanchi granuLe and ginsenoside Rb3had a similar fluorescent spot which performed the same colour and Rf in the TLC.The calibration curve of ginsenoside Rb3showed a good linearity within 0.505～5.050 μg,r=0.999 9.The average recovery was 101.25%,RSD was 0.54% (n=6).【Conclusion】The method was simple and accurate,it could be used for the quality control of sanchi granuLe.

HPLC，TLC，sanchi granuLe，ginsenoside Rb3

http://www.cnki.net/kcms/detail/45.1075.N.20161128.1439.002.html

2016-06-10

冯 军(1984-)，男，助理研究员，硕士，主要从事中药、天然药化学成分与质量标准研究。

*广西中药质量标准研究重点实验室系统性研究课题(桂中重系201310)和广西科学研究与技术开发项目(重大专项计划，桂科重14124002-11)资助。

R286

A

1002-7378(2016)04-0278-04

网络优先数字出版时间:2016-11-28 【DOI】10.13657/j.cnki.gxkxyxb.20161128.001

**通信作者：刘布鸣(1956-)，男，研究员，硕士研究生导师，主要从事中药、天然药化学成分与质量标准研究,E-mail:liubuming@aliyun.com。