大黄麻黄方对大鼠血压及血浆肾素—血管紧张素—醛固酮系统的影响※

于立杰 肖荷妹 李凤丹 雷新锋 李炳茂 韩卫红

(哈励逊国际和平医院综合内科，河北 衡水 053000)

实 验 研 究

大黄麻黄方对大鼠血压及血浆肾素—血管紧张素—醛固酮系统的影响※

于立杰 肖荷妹 李凤丹1雷新锋 李炳茂2韩卫红

(哈励逊国际和平医院综合内科，河北 衡水 053000)

目的 观察大黄麻黄方对大鼠收缩压、肾素活性(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和血管紧张素转换酶(ACE)的时间生物学特征的影响。方法 将64只健康雄性SD大鼠随机分为2组，即正常对照组及大黄麻黄方组，每组各32只。正常对照组予蒸馏水10 mL，大黄麻黄方组予大黄麻黄方药液10 mL，均每日2次灌服，连续4周。2组大鼠最后一次灌胃后分别于02：00、08：00、14：00、20：00四个时间点每组分别取8只大鼠，检测各个大鼠收缩压，然后处死大鼠，取心血，采用放射免疫分析法测定血浆PRA、AngⅡ和ACE，然后应用最小二乘法进行余弦拟合法(cosine fitting)，分析并比较2组血压及血浆PRA、AngⅡ和ACE的时间生物学特征。结果 大黄麻黄方组大鼠服药4周后02:00、08:00、14:00、20:00四个时间点收缩压及血浆PRA、AngⅡ、ACE水平均低于正常对照组同期，比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组相比，大黄麻黄方组大鼠收缩压及血浆AngⅡ、ACE曲线的中值(M)均减小，有统计学意义(P<0.05)，AngⅡ、收缩压A变化明显，有统计学意义(P<0.05)，同时PRA、AngⅡ的峰值时间(T)明显变化，有统计学意义(P<0.05)。大黄麻黄方组大鼠收缩压、PRA、AngⅡ和ACE曲线的Φ均发生不同程度的位移(P<0.05)。结论 大黄麻黄方可降低血压，同时对维持血压昼夜节律、改善RASS系统功能有明显影响。

血压；昼夜节律；大黄；麻黄；肾素—血管紧张素系统；动物实验

正常情况下，人体血压表现为一定的昼夜节律，呈双峰一谷的长柄杓型[1]，即夜间血压较日间下降10%～20%，称之为杓型血压。这种有规律的昼夜节律对保护心、脑、肾等器官功能有重要作用。血压昼夜节律是独立于血压水平之外的心脑血管病预测因素，血压昼夜节律消失，预示着更易发生心脑血管事件，并有更严重的靶器官损害倾向[2]。血压昼夜节律主要由神经内分泌系统调节，其中肾素—血管紧张素—醛固酮(RAAS)系统对血管张力、水钠代谢、血压等具有重要作用[3]。报道显示，昼夜血压非杓型原发性高血压患者血浆RAAS水平明显高于杓型组，RAAS与血压变异及昼夜节律有关[4]。近年来，中医药用于降低血压、恢复异常血压昼夜节律，以其毒副作用小、多靶点发挥疗效等优点逐渐受到重视[1，5-6]。研究证实，分别由大黄、麻黄、仙鹤草、甘草组成的方剂具有调节血压、改善靶器官损害等作用[7-9]，但其作用机制还有待进一步研究。本研究以雄性健康SD大鼠为研究对象，观察大黄麻黄方干预对收缩压、肾素活性(PRA)、血管紧张Ⅱ(AngⅡ)和血管紧张素转化酶(ACE)的变化，为大黄麻黄方治疗高血压、改善RASS系统功能及血压节律、减轻靶器官损害的影响提供实验基础。

1 材料与方法

1 材料

1.1.1 实验动物 清洁级健康雄性10周龄SD大鼠64只(购自河北医科大学实验动物中心，动物合格证号：1404079)，体质量250～300 g。常规饲养于河北省衡水市人民医院动物中心，自由进食，室温(22±2) ℃。

1.1.2 药品及试剂 大黄麻黄方组方：大黄6 g，麻黄5 g，仙鹤草15 g，甘草15 g。将上述药品加10倍量水浸泡1 h，煮沸后小火继续煎煮1 h，第2次加8倍量水煎煮，煮沸后小火继续煎煮1 h，将2次煎煮的药液合并，备用。PRA、AngⅡ和ACE测定试剂盒购自北京北方生物技术研究所有限公司。

1.1.3 主要仪器 鼠尾血压仪采用RBP-1B型光电法鼠尾测定仪，中日友好医院生产。

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组及给药方法 64只大鼠适应性饲养4周后，随机分为2组，即正常对照组、大黄麻黄方组，每组各32只。正常对照组予蒸馏水10 mL，每日2次灌服。大黄麻黄方组予大黄麻黄方药液10 mL，每日2次灌服。2组均连续4周。

1.2.2 检测指标及方法

1.2.2.1 血压测定 2组大鼠最后一次灌胃后，采用RBP-1B型光电法鼠尾测定仪分别于02：00、08：00、14：00、20：00四个时间分别测定大鼠收缩压，2组每个时间点分别取8只进行测量。

1.2.2 PRA、AngⅡ及ACE测定 2组大鼠在02：00、08：00、14：00、20：00时间点测完血压后，分别予10%水合氯醛0.5 mL/100 g腹腔注射，待大鼠麻醉后迅速开胸，暴露心脏，10 mL注射器抽取心室血。取血1 mL置入盛有0.3 mol/L依地酸二钠10 μL、0.32 mol/L二巯基丙醇5 μL、0.34 mol/L 8-羟基喹啉硫酸盐10 μL的离心管，3 000 r/min低温离心10 min，留取血浆，-20 ℃保存备用。采用放射免疫分析法测定血浆PRA、AngⅡ和ACE，按照试剂盒说明书进行操作。

2 结 果

2.1 2组大鼠服药4周后收缩压及血浆PRA、AngⅡ、ACE水平比较 见表1。

由表1可见，大黄麻黄方组大鼠服药4周后02:00、08:00、14:00、20:00四个时间点收缩压及血浆PRA、AngⅡ、ACE水平均低于正常对照组同期，比较差异均有统计学意义(P<0.05)。

表1 2组大鼠服药4周后收缩压及血浆PRA、AngⅡ、ACE水平比较

与正常对照组比较，*P<0.05

2.2 2组大鼠收缩压及血浆PRA、AngⅡ、ACE生物节律特征比较 见表2。

表2 2组大鼠收缩压及血浆 PRA、AngⅡ、ACE生物节律特征比较

注：*数据与表1相比为原始数值所得

对2组大鼠服药后收缩压血浆PRA、AngⅡ和ACE进行余弦拟合法分析得出余弦拟合曲线的特征值，对各曲线的特征值分析可见，与正常对照组相比，大黄麻黄方组大鼠收缩压及血浆AngⅡ、ACE曲线的M值均减小，有统计学意义(P<0.05)，AngⅡ、收缩压A值变化明显，有统计学意义(P<0.05)，同时PRA、AngⅡ的T值明显变化，有统计学意义(P<0.05)。大黄麻黄方组大鼠收缩压、PRA、AngⅡ和ACE曲线的Φ均发生不同程度的位移(P<0.05)。

3 讨 论

非杓型血压是左室肥厚、脑血管疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、蛋白尿的独立危险因素[10]。研究表明，RAAS系统既参与高血压的发病机制，也有助于逆转异常的血压节律[11]。RAAS系统各组分的血浆水平及其活性均表现出近日节律现象，这些物质的近日节律与其相应的mRNA表达量密切相关，而且RAAS系统各组分的mRNA表达也都存在近日节律[12]。RAAS系统是血压调节的一条重要途径，对血压的时间生物学形态可能有重要影响。在某些病理条件下，RAAS系统昼夜节律紊乱，人体血压的近日节律也相应改变，并与靶器官损害有着密切的关系。高血压患者常常存在高肾素活性，而且高肾素型高血压患者存在交感—肾上腺素系统和RAAS系统的激活。近年来，以整体观念和辨证论治为核心思想的中医越来越受到人们的重视，通过传统中医疗法控制血压，能够减少药物不良反应，恢复异常的血压昼夜节律，减少靶器官的损害。且中药的作用机制是多途径、多环节、多靶点的，并能兼顾高血压的其他病理环节[5-6]。

中医学认为，高血压属于眩晕、头痛等范畴，其病理因素主要为风、火、痰、虚、瘀，病变脏腑以肝、肾为主，涉及心、脾，病机主要与肝阳上亢、痰浊中阻、瘀血阻滞等相关。《素问玄机原病式》载：“风气甚而头目眩晕者，由风木旺，必是金衰不能制木，而木复生火、风火皆属阳，多为兼化，阳主乎动，两动相搏，则为之旋转。”指出肝阳上亢，风火相搏为眩晕的病机。《灵枢·卫气》认为：“上虚则眩。”《景岳全书》指出：“眩晕一症，虚者居其八九，而兼火、兼痰者不过一二。”《证治汇补·眩晕》载：“以肝上连目系而应于风，故眩为肝风，然亦有因火，因痰，因虚，因暑，因湿者。”指出风、火、痰、虚、暑、湿6种邪气皆可导致眩晕。《丹溪心法·头眩》载“头眩，痰挟气虚并火，治痰为主，挟补气药及降火药。无痰则不作眩，痰因火动”，气虚痰瘀，痰浊阻遏，升降失常，痰火气逆，上犯清窍而成眩晕，力倡“无痰不作眩”。研究显示，24 h平均血压与机体的正邪关系密切，更能反映正邪盛衰；而昼夜节律和阴阳关系更密切，更能反映机体阴阳虚实[13]。人体气血的盛衰、气机的升降出入等一切节律性变化遵循着阴阳之道。李洪波等[14]研究认为，高血压患者的血压昼夜节律与阴阳关系密切，可以以人体一日内的阳阴消长来解释。《素问·至真要大论》曰：“平旦至日中，天之阳，阳中之阳也；日中至黄昏，天之阳，阳中之阴也；合夜至鸡鸣，天之阴，阴中之阴也；鸡鸣至平旦，天之阴，阴中之阳也。故人亦应之。”《灵枢·营卫生会》言:“夜半为阴隆，夜半后为阴衰，平旦阴尽而阳受气矣。日中为阳隆，日西而阳衰，日入为阳尽而阴受气矣，夜半而大会，万民皆卧，命曰合阴。”《灵枢·顺气一日分为四时》载：“以一日分为四时，朝则为春，日中为夏，日入为秋，夜半为冬。朝则人气生，病气衰，故旦慧；日中人气长，长而胜邪，故安；夕则人气始衰，邪气始生，故加；夜半人气入藏，邪气独居于身，故甚也。”以上经文指出，白昼为阳，夜晚为阴，从白昼到夜晚的过程就是阳消阴长的过程，而从夜晚到白昼的过程则是阳长阴消的过程，人体之阴阳也随之产生相应的变化，因此人的血压也遵循着这种规律。血压的高低主要由阳气主宰，上午为“阳中之阳”，血压在阳气的鼓动下逐渐达到峰值，而夜半之前属“阴中之阴”，为一日之内阴气渐盛之时，阳气收敛而入阴，阳气鼓动无力，故血压下降[15]。而高血压患者人体阴阳失衡，阴虚不制阳，肝阳上亢，导致夜间血压下降不够，从而出现血压昼夜节律异常。因此，在治疗上要抓住阴虚为本、痰浊为标的发病机制，以调整阴阳为主要治则。大黄麻黄方中大黄味苦、性寒，入胃、大肠、肝、脾经，能泻下攻积，导湿热从大便出，活血逐瘀，推陈出新，降气利尿，用于火热亢盛、迫血上溢；甘草味甘、性平，可补气健脾，清热解毒，调和药性，为缓急之剂，与大黄配伍，相辅相成，泻中寓补，通中寓守，共奏清热燥湿、益气活血之功。血压的升高往往由气机升降失调引起，而麻黄外宣毛窍，下助利尿，阳气得宣，腠理开而汗出，则气机条达协调平衡，血液运行无阻，血压也就自然易于恢复。仙鹤草为收涩之品，既可收元气之耗散，又能敛虚火之浮越，兼补虚、熄风、祛痰、敛火诸功，故有止眩之效。

本研究结果显示，经大黄麻黄方干预后的大鼠，02:00、08:00、14:00、20:00四个时间点收缩压及血浆PRA、AngⅡ、ACE水平均低于正常对照组同期，比较差异均有统计学意义(P<0.05)。对2组相关指标生物节律特征分析显示，经大黄麻黄方干预后的收缩压平均值明显下降，但峰值时间不同，峰值相位有明显位移，大黄麻黄方组峰值时间为01:56，正常对照组峰值时间为02:31；2组大鼠血浆PRA的中值、振幅相同，但两者的峰值相位、峰值时间明显不同，大黄麻黄方组峰值时间为16:22，对照组为05:25；大黄麻黄方组大鼠血浆ACE浓度中值较正常对照组减小，振幅相同，但峰值相位、峰值时间不同，大黄麻黄方组峰值时间为06:31，对照组为06:07；大黄麻黄方组大鼠血浆AngⅡ的中值较正常对照组明显减低，振幅、峰值相位、峰值时间明显不同，大黄麻黄方组峰值时间为09:58，正常对照组为15:34。上述结果表明，大黄麻黄方对收缩压、PRA、ACE、AngⅡ不同时间的生物学特征值有明显的影响，从而说明大黄麻黄方对血压及血压的昼夜节律具有影响。研究显示，大黄、仙鹤草有明确的降低血压作用[7-8,16]。麻黄可以双向调节血压[9]。大黄能抑制去氧肾上腺素及组胺诱导的血管收缩反应；大黄还是钙离子拮抗剂，能够阻止钙离子进入细胞，从而使血管松弛，阻力减小，血压降低；大黄中含有大黄素、大黄蒽醌衍生物，其中大黄素有利尿、排尿的效果，大黄蒽醌衍生物对高血压发病过程中血管紧张素转化酶有抑制作用，从而降低血压[6]。甘草有类激素样作用，可抑制激素对自身受体的下调作用，增强和延长激素疗效，其含有的甘草酸影响肾上腺素的敏感性[17]，是否对血压及RASS系统产生影响，还有待于进一步研究。

目前，高血压的治疗原则要求不仅要降低血压，更应关注24 h的血压是否获得平稳控制，清晨血压是否相应降低，血压变异是否降低，谷峰比值是否高于50%，并发症的发生是否减少等。本实验显示，大黄麻黄方能够降低大鼠血压、改善RASS系统功能，维持血压昼夜节律，有关机制有待进一步深入研究证实。

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(本文编辑：曹志娟)

Effects of Dahuang-mahuang formula on blood pressure and plasma renin-angiotensin system in rats

YULijie,XIAOHemei,LIFengdan,etal.

DepartmentofGeneralMedicine,HalisonInternationalPeaceHospital,Hebei,Hengshui053000

Objective To observe the effects of Dahuang-mahuang formula on the chronobiology characteristic of systolic pressure (SBP), plasma renin activity (PRA), angiotensinⅡ(AngⅡ), angiotensin converting enzyme (ACE) in rats. Methods 64 healthy male SD rats were randomly divided into two groups that normal control group and Dahuang-mahuang formula group, 32 rats in each group. The normal control group received distilled water (10 mL), the Dahuang-mahuang formula group received Dahuang-mahuang decoction (10 mL), gavage twice daily for four weeks. We measured all the rats' blood pressure at different times in one day (02:00, 08:00, 14：00, 20:00) after the last gavage, 8 rats in each timing, and the the rats were executed, adopt blood form heart. The plasma PRA, AngⅡ and ACE were measured by radioimmunoassay, and then analyzed the blood pressure its chronobiology characteristic of PRA,AngⅡ and ACE in two groups by means of osine fitting in two groups. Results The SBP, PRA, AngⅡand ACE after treatment in Dahuang-mahuang formula group were lower than those in control group at four timing (02:00, 08:00, 14：00, 20:00), with statistical differences (P<0.05). As compared with normal control group, the M-value of SBP, AngⅡ and ACE in Dahuang-mahuang formula group were decreased, with statistical differences (P<0.05), the amplitude (A) of AngⅡand SBP changed obviously (P<0.05), and the peak time (T) of PRA and AngⅡchanged obviously, with statistical differences (P<0.05). The peak phase (Φ) of SBP, PRA, AngⅡand ACE in Dahuang-mahuang formula group had phase shift in varying degree (P<0.05). Conclusion Dahuang-mahuang formula can decrease blood pressure, and has significant effects of maintain circadian rhythm of blood pressure and improve RASS function.

Blood pressure; Circadian rhythm; Dahuang; Mahuang formula; Renin-angiotensin system;Animal experiment

10.3969/j.issn.1002-2619.2016.11.020

※ 项目来源：河北省中医药管理局2014年度中医药类科研计划课题(编号：2014320)

于立杰(1976—)，女，副主任医师，硕士。从事综合内科临床诊疗工作。研究方向：心血管疾病。

R544；R285.5

A

1002-2619(2016)11-1683-05

2016-05-11)

1 哈励逊国际和平医院麻醉科，河北 衡水 053000

2 哈励逊国际和平医院中医科，河北 衡水 053000