HPLC法测定氯霉素-苯氧乙醇溶液的含量

曲曙光，孙国栋

(菏泽市立医院分院，山东 菏泽 274031;菏泽市立医院 山东 菏泽 274031)

HPLC法测定氯霉素-苯氧乙醇溶液的含量

曲曙光，孙国栋

(菏泽市立医院分院，山东 菏泽 274031;菏泽市立医院 山东 菏泽 274031)

目的探讨氯霉素-苯氧乙醇溶液中氯霉素和苯氧乙醇含量。方法选用Agr1ent1100高效液相色谱仪；WP3-3000（Rs）型自动进样器；流动相甲醇-水75:75；双波长测定法：氯霉素检测波长278nm、苯氧乙醇检测波长265 nm；通过对照品求得回归方程；外标法计算含量。结果氯霉素和苯氧乙醇均在（0.025～0.5）mg/m l浓度范围有良好线性关系（r=0.9999）。结论用HPLC法测定测定氯霉素-苯氧乙醇溶液中氯霉素和苯氧乙醇含量，方法简便、快捷、可靠。

氯霉素；苯氧乙醇；HPLC法

氯霉素-苯氧乙醇溶液称氯苯溶液，主要外用清创消毒、清洗疮口、烧烫伤外创面，疗效确切，不良反应少，本品最大特点是清创杀菌外用不给患者带来疼痛感。报制剂批准文号时该制剂氯毒素和苯氧乙醇含量测量采用紫外分光光度法测[1]，因受吸收波长相互干扰，结果重现性和稳定性不好，同时采取的方法比较繁琐耗时长，为了提高简便快捷重现性的含量测定方法，我们经过试验采取高效液相色谱法对氯霉素-苯氧乙醇溶液进行含量测定。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agr1ent1100高效液相色谱仪（配三元泵、二级管陈列检测仪、在线脱气机、色谱工作站），WP3-3000（Rs）型自动进样器，BP211D分析天平。

1.2 试剂 氯霉素对照品（南京白敬辛制药有限责任公司，批号132104），苯氧乙醇对照品（瑞士Fluca公司，批号1431021），甲醇为色谱醇，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Acclccim120C18柱（4.6 mm×150mm，5μm），柱温为室温，检测波长为双波长，氯霉素278 nm，苯氧乙醇265mm，进样量为10 μl，流动相为甲醇-水75:75[2]，流速为0.8m l/min。

2.2 对照品溶液制备 精密称取105℃干燥至恒重的氯霉素对照品50.00mg，100℃干燥至恒重的苯氧乙醇对照品50.00mg，共同置于100ml棕色容量瓶中，加纯化水振摇溶解，再加至刻度度机械振动15 min至溶解完全作为对照品储备液，精密量取10m l溶液至100m l棕色容量瓶中，加流动相至刻度摇匀作为对照品。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取供试品溶液10ml至50m l棕色容量瓶中，加纯化水至刻度摇匀溶解至完全，再取5m l至25m l棕色容量瓶中加流动相至刻度摇匀，作为供试品溶液。

2.4 方法专属性 取氯霉素-苯氧乙醇对照品溶液，按上述色谱条件进样检测，分别测定波长278 nm和265 nm的吸收度，分离度为2.6良好，见下图1和图2。不加对照品氯霉素和苯氧乙醇按原有处方规定配制空白溶液，按测定上述对照品溶液的方法进样检测，得到图3空白溶液图谱，在278 nm和265 nm处，无杂质吸收峰出现，方法专属性良好。

图3 空白溶液色谱图

2.5 线性关系考察 分别取上述配好的对照品贮备溶液1m l、2ml、4m l、5m l、6m l、8m l、10m l、15ml、20ml分别至于20 m l棕色容量瓶中，加流动相甲醇-水（75：75）至刻度摇匀，分别按上述色谱条件进样检测，分别记录λmax=278 nm和λmax=265 nm，色谱图以峰面积吸收度为纵坐标（Y），以浓度为横坐标（X），经过回归方程计算λmax=278 nm的氯霉素A= 24.76X+0.4021，λmax=265 nm苯氧乙醇Y=18.21X-0.1905，r=0.9999（n-10），氯霉素和苯氧乙醇的浓度范围为0.025mg/ml～0.5mg/ml。

2.6 精密度试验 取对照品溶液，按照上述色谱条件，连续进样6次，记录峰面积，经过计算结果氯霉素峰面积RSD为0.52%，苯乙醇峰面积RSD为0.75%，说明精密度良好。

2.7 重复性试验 精密量取同一批号（20141212）氯苯溶液6份，按照供试品溶液配制方法分别进行稀释，按照上述相同色谱条件进样，按外标法计算各自含量，结果该批氯苯溶液产品氯霉素平均含量为标示量的99.65%，RSD为0.46%，苯氧乙醇平均含量为标示量的100.3%，RSD为0.62%，说明该测量方法重复性较好。

2.8 稳定性试验 分别将同一批（20141212）氯苯溶液按上述方法制成的供试品溶液分别在室温下放置0、1、3、5、7、9、15、24 h后取样按上述相同的方法进行测试，测得氯霉素峰面积RSD为0.78%，苯氧乙醇峰面积RSD为0.47%，结果说明方法稳定性较好。

2.9 供试品含量测定 取5批氯苯溶液（20141103，20150115，20150312，20150314，20150328）按照上述供试品溶液制备方法进行稀释，作为待测样品。按照上述色谱条件和相同测试方法进行进样检测，按外标法代入上述回归方程计算5批样品含量，结果见表1。

表1 氯苯溶液含量中氯霉素和苯氧乙醇标量（%）

3 讨论

氯霉素-苯氧乙醇溶液（简称氯苯溶液）作为医院制剂，未有国家统一标准，为了提高其检测质量标准，确保制剂质量稳定有效，参考《中国药典》2015年版及文献方法[3-5]对氯霉素和苯氧乙醇采取HPLC法检测，检测方法线性关系、稳定性、重复性和精密度均较好。据氯霉素和苯氧乙醇极性差别，参考氯霉素滴眼液质量标准[6]和文献方法[7-9]，对流动相进行优选，确定适合的流动相甲醇-水流动相进行分离，分离后的成分最大吸收波长分别为278 nm和265 nm，经过试验在任意单一波长278 nm或265 nm测定其含量时受干扰较大，吸收度差别不大，对计算结果的准确度和精密度不好，故采用双波长法，分别于各自最大吸收波长处测其吸收度，在278 nm和265 nm分别测定氯霉素和苯氧乙醇的吸收度较好，经过回归方程分别计算含量，结果稳定，方法简便。

[1]秦新华，孙国栋.新编实用药物制剂及合理应用[M].北京：中国科学技术出版社，2006:78-79.

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HPLC Method for Determining the Content of Chloramphenicol - phenoxyethanol Solution

Qu Shuguang，Sun Guodong
(The Branch of Heze Municipal Hospital,Heze 274031,Shandong;Heze Municiapl Hospital,Heze 274031,Shandong)

ObjectiveTo investigate the chloramphenicol-phenoxyethanol chloramphenicol and phenoxyethanol content in the solution.MethodsChoose Agr1ent1100 highly effective liquid phase color spectrometer;(Rs)WP3-3000 type automatic sampler;Mobile phase of methanol-water;75-75 Double wavelength measurement:chloramphenicol detection wavelength of 278 nm,phenoxyethanol,detection wavelength of 265 nm;Through the reference substance obtained regression equation;External standard method.ResultsPhenoxyethanol and chloramphenicol in mg/ml concentration range(0.025～0.5)has a good linear relationship(r=0.9999).ConclusionUsing HPLC method determination of chloramphenicol in chloramphenicol-phenoxyethanol solution and phenoxyethanol content,the method is simple,fast and reliable.

Chloramphenicol;Phenoxyethanol;HPLC method

R978.13;R927.2

：A

：1008-4118（2016）02-0059-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2016.02.022

2016-04-19