高效液相色谱法测定青果丸中没食子酸含量

张火旺，曾建忠，卓晓明

（1．广东省河源市药品检验所，广东 河源 517000； 2．广东省东源卫生职业技术学校，广东 河源 517000；3．广东医学院，广东 东莞 523808）

高效液相色谱法测定青果丸中没食子酸含量

张火旺1，曾建忠2，卓晓明3

（1．广东省河源市药品检验所，广东 河源 517000； 2．广东省东源卫生职业技术学校，广东 河源 517000；3．广东医学院，广东 东莞 523808）

目的 建立测定青果丸中没食子酸含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱采用Inertsil C18柱（150 mm×4．6 mm，5 m），以甲醇－0．1%磷酸溶液（5∶95）为流动相，检测波长为273 nm，流速为1．0 mL／min。结果 没食子酸质量浓度在10．536～36．876 g／mL范围内与峰面积线性关系良好，平均回收率为99．95%，RSD为0．24%（n＝6）。结论 该方法简便、灵敏、稳定、准确，无其他成分干扰，可作为青果丸质量控制的有效方法。

青果丸；没食子酸；高效液相色谱法

青果丸由青果、金银花、黄芩、北豆根、麦冬、玄参、白芍、桔梗8味中药组方，具有清热利咽、消肿止痛的功效，用于肺胃蕴热所致的咽部红肿、咽痛、失音声哑口干舌燥、干咳少痰[1]。现行标准[2]中，只有黄芩的含量测定。为确保制剂质量，保证用药安全有效，对该药的质量标准进行研究。选取青果和白芍中没食子酸作为指标性成分进行含量测定研究，本试验中采用高效液相色谱（HPLC）法建立了测定该制剂中没食子酸含量的方法，简单快速，分离度好，可用于该产品的质量控制。

1 仪器与试药

LC－2010AHT型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；UV－2450型紫外分光光度计；CP225D型电子天平；SB2200型超声处理器。没食子酸对照品（批号为110831－201204，供含量测定用）购自中国药品生物制品检定所，含量为 100%；青果丸（市售，批号为20100401，20100604，20100302）；甲 醇 为 色 谱 纯（TEDIA），磷酸（广州化学试剂厂，批号为20080701－1），水为超纯水。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱 Inertsil C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：甲醇－0．1%磷酸溶液（5∶95）；没食子酸检测波长：273 nm；流速：1．0 mL／min；进样量：20 μL；峰面积以外标法定量[2]。

2．2 溶液制备

精密称取没食子酸对照品13．17 mg，置50 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解至刻度，作为没食子酸对照品贮备液。取本丸剂适量，制成粉状，精密称定，研细（过3号筛），称取适量（约0．3 g），精密称定，置50 mL容量瓶中，加50%甲醇适量，密塞，超声处理30 min，放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜（0．45 μm）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按质量标准中处方比例同法制备不含青果、白芍的阴性样品，依法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

干扰试验：分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图，见图1。结果组分的出峰时间区域没有干扰峰，表明处方中其他成分及辅料对样品的测定无干扰。

线性关系考察：分别精密量取没食子酸对照品贮备液2．0，3．0，4．0，5．0，6．0，7．0 mL，置50 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，配成没食子酸对照品溶液，按拟订色谱条件分别进样20 μL，测定峰面积，以峰面积（A）为纵坐标、没食子酸对照品质量浓度（C）为横坐标进行线性回归，得回归方程 A＝51 142 C＋34 585，r＝0．999 9（n＝6）。结果表明，没食子酸质量浓度在 10．536～36．876 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。

图1 高效液相色谱图

精密度试验：取同一对照品溶液重复进样6次，每次20 μL，测定峰面积。结果的 RSD为0．08%（n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批样品，精密称取6份，依法制备供试品溶液，按样品测定方法平行进样测定含量。结果的 RSD为 0．10%（n＝6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，室温放置，每隔2 h测定1次，连续测定6次。结果的 RSD为0．73%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定。

加样回收试验：精密称取已知含量的样品（批号为20100401，没食子酸含量为 4．460 1 mg／g）适量，置50 mL容量瓶中，共6份，分别加入没食子酸对照品贮备液（没食子酸含量0．263 4 g／L）1，2，3 mL，按供试品溶液制备方法制备待测溶液。精密吸取溶液6份，各20 μL，注入液相色谱议，测定，计算没食子酸的回收率。结果见表1。

表1 没食子酸加样回收试验结果（n＝6）

2．4 样品含量测定

取3批青果丸，依法制备供试品溶液，进样20 μL，测定，记录峰面积，按外标法计算含量。结果批号为200100401，20100604，20100302的样品的没食子酸含量分别为4．460 1，4．416 6，4．384 7 mg／g。根据此测定结果，暂定青果丸中没食子酸含量定量限为4．0 mg／g。

3 讨论

波长选择：HPLC在选择检测波长时，取没食子酸对照品适量，用50%甲醇为溶剂，经紫外－可见分光光度计在200～400 nm波长范围内进行光谱扫描。结果发现，没食子酸在272．8 nm波长下有最大吸收，灵敏度高，故选择273 nm作为检测波长。

提取方法选择：以甲醇、50%甲醇、60%甲醇、70%甲醇4种不同溶剂分别采用超声提取，结果以50%甲醇超声处理结果为佳。分别超声处理样品10，20，30，40 min，测得没食子酸的含量最高为超声 30 min和40 min，故认为在超声30 min基本提取完全，选用50%甲醇超声处理30 min为宜。

流动相选择：没食子酸属有机酸，极性较大，选择反相高效液相色谱法，以甲醇－0．1 mol／L磷酸（20∶80）、甲醇－0．1 mol／L磷酸（10∶90）为流动相，供试品溶液中没食子酸分离效果不好。选用甲醇－0．1 mol／L磷酸（5∶95）为流动相，出峰时间约为13 min，峰形尖锐，理论板数达5 000以上，达到分离要求。

几批次样品含量相差较大，可能与原质量标准中对这种成分无含量控制有关。本试验结果表明，该方法操作简便，回收率高，专属性强，重复性好，是青果丸质量控制的有效方法，有利于更好地控制产品质量。

[1]王秋静，张蒙强．粉碎度对青果水浸出物的影响[J]．中国药业，1998，7（1）：24．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：797，附录33．

[3]张建民，关 晶，徐萧槿．高效液相色谱法测定利水通淋软胶囊中没食子酸含量[J]．中国药业，2009，18（21）：37－38．

[4]黄花红．反相高效液相色谱法测定血安胶囊中没食子酸含量[J]．中国药业，2015，24（7）57－58．

[5]何依玲，李晓誉．高效液相色谱法测定铁苋菜中没食子酸含量[J]．中国药业，2007，16（11）：18．

[6]刘 源，沈好文．高效液相色谱法测定化痔灵片中没食子酸含量[J]．中国药业，2013，22（8）：56－57．

[7]包箐箐，向 铮，林崇良．高效液相色谱法测定温州早茶中儿茶素含量[J]．中国药业，2011，20（22）：50－51．

[8]张海凤，董亚琳，张 琰．没食子酸 －葡萄糖苷酶的抑制作用及其降糖机制研究[J]．中国药业，2011，20（21）：192－195．

[9]孙桂梅，吴宏岩，王会平，等．高效液相色谱法测定克银丸中没食子酸含量[J]．中国药业，2006，15（13）：42．

[10]龙海燕，彭飞城，姚 蓉．高效液相色谱法测定复方青果颗粒中没食子酸含量[J]．中南药学，2010，8（6）：416－419．

Content Determination of Chlorogenic Acid in Qingguo Pills by HPLC

Zhang Huowang1，Zeng Jianzhong2，Zhuo Xiaoming3
（1．Heyuan Institute for Drug Control，Heyuan，Guangdong，China 517000； 2．Dongyuan Health Vocational Technical School，Heyuan，Guangdong，China 517000； 3．Guangdong Pharmacy University，Dongguan，Guangdong，China 523808）

Objective To establish an HPLC method for the content determination of gallic acid in Qingguo Pills．Methods The HPLC method was adopted and the Inertsil C18column（150 mm×4．6 mm，5 μm）was used．The mobile phase was methanol－0．1%phosphoric acid（5∶95）．The detection wavelength was at 273 nm and the flow rate was 1．0 mL／min．Results The linear range of gallic acid was 10．536－36．876 μg／mL．The average recovery rate was 99．95%，RSD was 0．24%（n＝6）．Conclusion The method is simple，sensitive，stable and accurate，which can be used for the quality control of Qingguo Pills．

Qingguo Pills；gallic acid；HPLC

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)02－0064－02

张火旺（1974－），男，广东河源人，副主任药师，研究方向为药品检验及质量标准，（电话）0762－3220319（电子信箱）zhw1011＠163．com。

2015－01－27；

2015－08－08)